请教一下各位老师,我目前在做链霉素的
液质检测,色谱柱是2.1mm×100mm的Waters Amide色谱柱,
液质是AB sciex6500. A相是1%甲酸+20mmol/L的甲酸铵,溶于水:乙腈=90:10中,B相是1%甲酸溶于水:乙腈=10:90中,运行等度方法,A:B=80:20时,峰型很好,但保留时间0.9min太短了,试过其他等度比例,要么保留时间很短,要么峰型特别差。后面尝试了梯度方法,0-0.5min,A=35;0.5-1min,A由35变到100;1-3min,A=100;3-3.5min,A由100变到35;3.5-4min,A=35。调整成梯度之后,峰型比较好,保留时间2.2min,但是相同标品峰面积变成了等度方法的90%,想请教一下各位老师,这种现象是什么原因,以及要怎么解决,谢谢!