1、PROTEIN A , PROTEIN G 和 PROTEIN L 对不同种属和抗体亚型的相对结合强度?
首先根据不同的种属亚型参考“相对结合强度”表(如下图),Protein A和Protein G 均结合抗体的重链部分,若存在 Protein A 及 Protein G 都有较强结合能力时, 更加推荐 Protein A。 Protein A 的洗脱条件(pH 3.5–4.5)较 Protein G(< pH 3)更加温和,利于对低 pH 敏感抗体的稳定性。 另外, Protein A 有耐碱清洗的 PrismA或 SuRe 配基可供选择,且载量更高。 尤其是纯化多个抗体,为了避免交叉污染,优先推荐耐碱清洗的填料,长久使用更经济。
Protein G Sepharose 来源于链球菌, 为细胞表面的 III 型 Fc 受体。 可以广泛、更强地结合更多类型的IgG、 多克隆 IgG 及人 IgG。同时, 重组表达的 Protein G 去除了 N 端白蛋白结合结构域, 血清蛋白结合水平更低。 此外,Protein G 还可以和某些抗体的 Fab 和 F (ab’)2 段结合。 但是,其工业化程度低于 Protein A。
Protein L结合抗体的轻链可变区,适合抗体片段的纯化。同时Protein L对于某些种属亚型有结合能力,可以作为Protein A和Protein G的有效的补充。
2、不同类型的 PROTEIN A 配基,有什么差别,如何选择?
Nprotein A 即为天然 (Native) Protein A,来源于金黄色葡萄球菌。有5 个结合结构域可以和 IgG 的 Fc 区有强的特异性结合。
Rprotein A Sepharose 4 FF,为重组 Protein A,去除了天然蛋白中跟抗体结合不相关的细胞壁结合结构域,分子量从 42 KD 减少到 34 KD。主要结合 Fc 区。经基因工程改造后,单点定向偶联于琼脂糖骨架上,降低空间位阻,增加了与 IgG 的结合能力,载量比 nprotein A更高 ;同时重组的配基,在发酵和纯化过程中没有使用人源的IgG,避免了人源 IgG 的污染风险。
rmpProtein A,多位点附着的技术,保证更低的重组protein A配基的脱落。
MabSelect 为 rProtein A 配基,使用高流速琼脂糖凝胶基架 ( 类似 Capto,但孔径更大)。
MabSelect Xtra(rProtein A 配基),比 MabSelect 粒径小、载量更高,孔径更大。