主题：【资料】蛋白标签的作用及其常见类型优缺点详解

浏览0 回复0 电梯直达

Ins_bf0c01c3

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2023/11/01 16:43:22 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

蛋白标签是什么？

一些肽类和蛋白质被广泛的用于大量生产重组蛋白，它们与目的蛋白融合表达，以便于目的蛋白表达、检测、示踪和纯化。这类多肽或蛋白，被称为标签蛋白（Protein Tag）。

蛋白标签的具体作用包括以下几个方面：

1、识别：给蛋白加标签使其易于识别，进而快速鉴定感兴趣的蛋白质。

2、纯化：利用标签蛋白对目的蛋白进行纯化。

3、定量：通过量化标签来确定目的蛋白的存在量。

4、定位：通过定位标签蛋白定位到目标蛋白在细胞中的特定位置，进而研究其生理功能、信号通路等。

5、跟踪：在细胞、组织和生物体中，通过追踪标签蛋白质追踪目的蛋白，以研究它们的表达、分布、代谢等生物学过程。

常见的蛋白标签有：

一、 His6

序列：CATCACCATCACCATCAC

His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。

His-tag有以下特点优点：

1.标签的分子量小，只有~0.84KD；

2.可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化；

3.可用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；

4.His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；

5.可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；

6.可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。

二、Flag

序列：GACTACAAAGACGATGACGACAAG

Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。

FLAG融合表达目的蛋白后具有以下优点：

1.FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质。

2.融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。

3.FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。

4.融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。

三、HA

序列：TACCCATACGATGTTCCAGATTACGCT

HA标签蛋白，标签序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，9个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小，容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti－HA抗体检测和ELISA检测。

四、Myc

序列：GAACAAAAACTCATCTCAGAAGAGGATCTG

Myc标签蛋白，是一个含11个氨基酸的小标签，标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。Myc tag已成功应用在Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。

蛋白标签在重组蛋白生产中具有非常重要的作用，使得各种蛋白的表达和纯化得以实现，在实验过程中标签的选择，可根据实验目的来选择。义翘神州的可提供重组蛋白表达定制服务，通过适合的标签快速表达出目的蛋白。更多蛋白标签详情可以关注：https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag