主题:【资料】T细胞培养的原理及方法:探索细胞因子在免疫反应中的关键作用

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T细胞培养是指在体外模拟体内环境,使T细胞能够生存、生长和繁殖的一种技术。在T细胞培养中,细胞被置于无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件的环境中,以保持其活力和功能。T细胞培养被广泛应用于免疫学、生物医学和药物研发等领域,是研究T细胞功能、探索免疫反应机制的重要手段。通过T细胞培养,科学家可以观察和分析T细胞的增殖、分化、凋亡以及细胞因子分泌等过程,了解其在免疫应答中的作用。同时,T细胞培养也为疾病治疗和预防提供了新的思路和手段,如免疫疗法、疫苗研发和细胞治疗等。





T细胞培养的原理是通过复合抗体孵育标记脾脏细胞中除T细胞以外的其他细胞,再用磁珠结合抗体,然后用磁极吸附磁珠,那剩下的就是没有结合磁珠的T细胞了。



t细胞培养方法包括以下步骤:

①抗体包被培养板:用无菌PBS制备5~10 μg/mLCD3抗体,然后在96孔板的条件孔中,每孔加入50 μL抗体溶液。

②接种细胞:在抗体包被的培养板中接种T细胞,然后将培养板置于37℃培养箱中2小时或者提前一天准备培养板,置于4℃过夜。

③洗涤和消化:在接种细胞之前,用移液枪将培养孔中的50 μL抗体吸出,然后用200 μL PBS洗涤培养孔并弃去PBS。重复此步骤以去除所有未交联的抗体。

④细胞消化:将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1mlPBS+EDTA0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM,混匀,不能吹打,分装2瓶。如果细胞没长满就脱落,则只需加入5mlMEM,不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没有细胞脱落碎片,且细胞长满达到80%以上,吸走培养基,加入5mlPBS+EDTA0.02%),迅速轻微晃动,竖立培养瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超过3min,细胞完全消化脱壁,取出加入10ml培养基轻微吸打混匀,分装2瓶。

⑤培养:将分装的T细胞接种到新培养瓶中,通常T2510~12ml培养基培养,2~3天左右换液一次,若培养基变黄及时换液,以维持一个相对稳定的培养条件,有利于细胞活正常生长。



不管是我们实验室中常规的细胞培养,还是临床上的CAR-T细胞治疗等,提高T细胞的增殖和持久性,以及增强细胞再免疫抑制性TME中的功能,都离不开细胞因子。



细胞因子是由免疫细胞(如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等)和某些非免疫细胞(内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等)经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长、APSC多能细胞以及损伤组织修复等多种功能。



细胞因子可被分为白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、趋化因子、生长因子(GF)等。



细胞因子γ链共受体家族包括IL-2IL-4IL-7IL-9IL-15IL-21,它们在T细胞分化、增殖和内环境稳定中起着关键作用。他们受体包括共同的γ链(γc)和一个各自单独的受体链,下游信号激活STAT信号通路。



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