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液质联用（LCMS）

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主题：【原创】GB 31658.20 酰胺醇类出现无法线性拟合的问题分析与解决办法

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冰箱冻梨

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发表于：2024/04/26 10:24:23 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

实验员做方法时发现，混标稀释配制而成的系列标准溶液上机后，氟苯尼考不成线性
原以为是响应值的问题，没太在意，让人调节一下流动相中甲酸铵浓度试一下，结果仍然不成线性，如下图：

于是我去机器工作站看情况，发现次响应值其实并不高，甚至挺低的（因为摸索过程中过分改变了甲酸铵的浓度），那么不成线性的原因是什么呢？
分析标准曲线涉及的各个数据时，发现如果不选内标法，氟苯尼考本身线性良好，同时发现，氟苯尼考-D3浓度升高，与之前拟合的氟苯尼考呈相反的趋势

所以可以推测，是氟苯尼考-D3收到了干扰，导致了这个异常结果！
色谱图上看，氟苯尼考胺和氯霉素都分开了，保留时间对不上，不会是二者或二者的氘代内标影响，氟苯尼考本身线性良好、氯霉素线性也良好说明更不是配制溶液等操作问题，那么就剩下一个可能。。

氟苯尼考影响了氟苯尼考-D3。。（皇后杀了皇后？

）

氟苯尼考化学式C12H14Cl2FNO4S，那有可能是因为化合物含有Cl元素且同位素内标选择不合理导致的，即外标物同位素与内标物质量数发生重叠。
然后我查到了下图

氟苯尼考[M-H]-离子的基峰为356.0，由于天然同位素的存在，因此氟苯尼考出现了358.0、359.0、360.0、361.0的离子峰
好死不死，标准中规定的内标离子对是359.2＞339.0
配制只有内标的溶液上机进样测定发现，峰面积是稳定的，当配制同浓度的氟苯尼考和氟苯尼考-D3，氟苯尼考-D3峰面积增大约17%

到此，已经可以确定，随着目标物浓度的不断提高，内标的响应也会随之增大，内标法无法拟合线性也就可以解释了。

【解决方案1-换更多氘的同位素内标】
答：失败，市售好买的只有氟苯尼考-D3

【解决方案2-换不受影响的内标离子通道】
答：成功！经测试，将氟苯尼考-D3的MRM方法变更为361.0＞341.0，线性有了质的提升，虽然还差一点，但是只需要再调节一些条件，即可满足。

没有选择362.1，是因为丰度确实有点太低了，担心影响响应值，但是应该也可以跑的出来，线性应该更好的多，有空时候再试试。

再就是对氟苯尼考和氟苯尼考-D3做子离子扫描，找一个新的不受氟苯尼考影响的子离子。

【解决方案3-在方案2的基础上，适当增大标准曲线溶液中和测试样品中的内标浓度】
答：未进行测试，理论上就是进一步稀释氟苯尼考361.0同位素的影响，线性肯定会更好的。有空时候再试试。

该帖子作者被版主 hujiangtao加 5积分， 2经验，加分理由：鼓励发帖

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hujiangtao

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2024/4/26 20:28:48 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

听过岛津一位工程师讲的，就是氟苯尼考内标法不成线性的问题，就是像楼主的说的

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Insm_fe8f17c4

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2024/4/28 18:00:31 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

请问这张图是在哪里查到的？

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冰箱冻梨

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2024/4/28 20:23:44 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 Insm_fe8f17c4(Insm_fe8f17c4) 发表:

请问这张图是在哪里查到的？

我找找有点忘记了。。
或者你用单标自己做一下母离子扫描也能得到这样的图。。

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liushaoliche

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2024/5/1 11:13:10 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

进来学习一下！

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木头2013

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2024/5/3 8:31:25 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

进来学习一下

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Insm_a857577

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2024/5/3 14:34:15 9楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

进来学习一下看看大有收获

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物价真高

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2024/5/6 7:01:33 10楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

谢谢分享学习了

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Ins_9606c2bc

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2024/5/20 18:00:23 11楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主你好，关于这个问题我也发现了，我直接增大了氟苯尼考的内标加入量，这样就能不受外标的干扰。但是关于31658.20有另一个让我十分困扰的问题，就是氟苯尼考胺的绝对回收率太低了，内标的回收率只有10%左右，请问你们做的时候是怎么解决的呢？

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冰箱冻梨

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2024/5/21 11:22:34 12楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 Ins_9606c2bc(Ins_9606c2bc) 发表:
楼主你好，关于这个问题我也发现了，我直接增大了氟苯尼考的内标加入量，这样就能不受外标的干扰。但是关于31658.20有另一个让我十分困扰的问题，就是氟苯尼考胺的绝对回收率太低了，内标的回收率只有10%左右，请问你们做的时候是怎么解决的呢？

氟苯尼考胺和氟苯尼考胺内标都只有10%吗？
你们氟苯尼考胺出峰时间是多少呢？

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