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主题：【第六届原创】移液器原理、使用、维护、校准鉴定

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发表于：2011/11/30 20:57:51 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

维权声明：本文为012304原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

第一部分：移液器相关基本常识

移液器基本原理：

微量加样器（移液器）最早出现于1956年，由德国生理化学研究所的科学家Schnitger发明，其后，在1958年德国Eppendorf公司开始生产按钮式微量加样器，成为世界上第一家生产微量加样器的公司。这些微量加样器的吸液范围在1—1000~1之间，适用

于临床常规化学实验室使用。微量加样器发展到今天，不但加样更为精确，而且品种也多种多样，如微量分配器、多通道微量加样器等，其加样的物理学原理有下面两种：①使用空气垫(又称活塞冲程)加样；②使用无空气垫的活塞正移动(positive displacement)加样。上述两种不同原理的微量加样器有其不同的特定应用范围。

一、空气垫加样器

活塞冲程(空气垫)加样器可很方便地用于固定或可调体积液体的加样，加样体积的范围在小于1ul至l0ml之间。加样器中的空气垫的作用是将吸于塑料吸头内的液体样本与加样器内的活塞分隔开来，空气垫通过加样器活塞的弹簧样运动而移动，进而带动吸头中的液体，死体积和移液吸头中高度的增加决定了加样中这种空气垫的膨胀程度。因此，活塞移动的体积必须比所希望吸取的体积要大约2％～4％，温度、气压和空气湿度的影响必须通过对空气垫加样器进行结构上的改良而降低，使得在正常情况下不至于影响加样的准确度。一次性吸头是本加样系统的一个重要组成部分，其形状、材料特性及与加样器的吻合程度均对加样的准确度有很大的影响。

二、活塞正移动加样器

以活塞正移动为原理的加样器和分配器与空气垫加样器所受物理因素的影响不同，因此，在空气垫加样器难以应用的情况下，活塞正移动加样器可以应用，如具有高蒸汽压的、高黏稠度以及密度大于2．0g／cm3的液体；又如在临床聚合酶链反应(PCR)测定中，为防止气溶胶的产生，最好使用活塞正移动加样器。活塞正移动加样器的吸头与空气垫加样器吸头有所不同，其内含一个可与加样器的活塞耦合的活塞，这种吸头一般由生产活塞正移动加样器的厂家配套生产，不能使用通常的吸头或不同厂家的吸头。

三、多通道加样器、电子加样器和分配器

多通道加样器、电子加样器和分配器的原理与上述相同。多通道加样器通常为8通道或12通道，与8X12＝96孔微孔板一致。多通道加样器的使用不但可减少实验操作人员的加样操作次数，而且可提高加样的精密度。电子加样器和分配器为半自动加样系统，电子加样器最大的优点是其具有很高的加样重复性，应用范围广。

第二部分：移液器的使用规范以及注意事项

1．使用合适的吸头：
为确保更好的准确性和精度，建议移液量在吸头的35％-100％量程范围内。

2．设定移液体积
从大量程调节至小量程为正常调节方法，逆时针旋转刻度即可
从小量程调节至大量程时，应先调至超过设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以保证移液器的精确度

3．吸头的安装：
对于大多数品牌的移液器，特别是多道移液器，安装吸头并非易事：为追求良好的密封性，将移液器垂直插入吸头，左右旋转半圈，上紧即可。也有人会用移液器反复撞击吸头来上紧，但这样操作会导致吸头变形而影响精度，严重的则会损坏移液器，所以应当避免出现这样的操作。有的多道移液器设有O型环，配合有前挡点的吸头，只需轻压一下即可达致理想密封。

4．吸头浸入角度和深度：
吸头浸入角度控制在倾斜20度之内，保持竖直为佳；吸头浸入深度建议如下所示：

5．吸头润洗：
对常温样品，吸头润洗有助于提高准确性；但是对于高温或低温样品，吸头润洗反而降低操作准确性，请使用者特别注意。

6．吸液速度：
移液操作应保持平顺、合适的吸液速度；过快的吸液速度容易造成样品进入套柄，带来活塞和密封圈的损伤以及样品的交叉污染。

7．移液器的放置
吸有液体的移液器不应平放，吸头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈

8．移液器在每次实验后应将刻度调至最大，让弹簧回复原型以延长移液器的使用寿命

9．为获得较高的精度，吸头需预先吸取一次样品溶液，然后再正式移液，因为吸取血清蛋白质溶液或有机溶剂时，吸头内壁会残留一层”液膜”，造成排液量偏小而产生误差。

10．.浓度和粘度大的液体，会产生误差，为消除其误差的补偿量，可由试验确定，补偿量可用调节旋钮改变读数窗的读数来进行设定。

11．移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体

12．不要用大量程的移液器移取小体积的液体，以免影响准确度。同时，如果需要移取量程范围以外较大量的液体，请使用移液管进行操作

移液器（移液器）使用建议：

1、移液时保持正确的姿势；不要时刻紧握移液器，使用带指钩的移液器帮助缓解手部疲劳；有可能的话经常换手操作。
2、定期检查移液器的密封状况，一旦发现密封老化或出现漏液，须及时更换密封圈。
3、每年对移液器进行1-2次检验（视使用频率而定）。
4、绝大多数移液器，在使用前和使用一段时间后，要给活塞涂上一层润滑油以保持密封性；

移液器的日常维护与维修

移液器的清洁
定期清洗移液器，可以用肥皂水、60 ％异丙醇、70%乙醇等非腐蚀性洗涤剂，再用蒸馏水清洗，自然晾干。高温消毒之前，要确保移液器能适应高温。

故障分析以及排除

第三部分：移液器一般使用方法

一下各图中的标示：

A=起点位置
B=第一停点
C=第二停点

注意事项
在吸取液体时不宜急速弹回，在吸取高粘度的液体时操作需更加如此，吸液前应检查管嘴内有无异物；新装的管嘴先吸入液体再排空，如此2-3次后再进行试验操作。移液器使用温度与校准相差很大的时候，移液器需另行校准。

1、前进法
在洁净的试剂容器中注入待转移的溶液
A、将按钮压至第一停点位置
B、将移液器管嘴置于液面一下1cm深度并慢慢松开按钮，待管嘴吸入液体后，将管嘴撤出液面并协贴在试剂瓶壁上淌走多余的液体
C、轻轻压下操作按钮至第一停点，约1秒后继续将操作按钮向下压至此操作第二停点，此操作作用是排尽管嘴内的溶液
D、松开按扭使之返回起点位置
图示如下

2、倒退法
在洁净的试剂容器中注入待转移的溶液
A、将按钮压至第二停点位置
B、将移液器管嘴置于液面一下1cm深度并慢慢松开按钮，待管嘴吸入液体后，将管嘴撤出液面并协贴在试剂瓶壁上淌走多余的液体
C、轻轻压下操作按钮至第一停点，放出预设定的液体。将操作按钮保持在第一停点位置，使少量不包括移液量范围的液体依然留在管嘴内
D、剩余在管嘴内的液体随管嘴一起废弃或者移至原容器中。
图示如下

3、重复移液法（略）,需要注意的是3、4两个步骤是一直循环的，直到移液结束；

4、全血移液法（略），需要注意的是1到4是一直重复的，5只有一次操作；

第四部分：移液器的检验
注：本方法主要参考国家质量监督检测检验总局发布的JJG 646-2006以及产品说明书（德国eppendorf，法国吉尔森Gilson、Thermo热电（原芬兰雷勃）的Finnpipette，上海大龙等），其部分参数标准严于JJG 646-2006中的定量参数

环境条件
工作室温度为20±5℃。
检定时，水温与室温的温差不超过±2℃。

检定设备

通用技术要求

外观要求

移液器塑料件外壳表而应平榷、光滑，不得有明显的缩痕、废边、裂纹、气泡和变形等现象;金属件表面镀层应无脱落、锈蚀和起层。

移液器主体应具有下列标记:产品名称、制造厂或商标、标称容量(ul或ml)、型号规格、出厂编号。

活塞

按动移液器的活塞时，上、下移动应灵活，分挡界限明显。

调节器

移液器的显示窗在容址调节动作时，应转动灵活，数字指示清晰、完整。

吸头

吸头应采用聚丙烯材料制成。

吸头不得有明显的弯曲现象。内壁应光洁、平滑，排液后不得有残留液体存在。

不同规格型号的移液器应采用相应配套的吸头。

检定介质

检定介质应符合GB 6682-1992《分析实验用水规格和试验方》要求的蒸馏水或去离子水，并提前24 h放人实验室内，使其温度与室温温差不得大于2度。

被检移液器应在检定前4h放入实验室内或等条件空间。

检定方法

外观检定：

用目测、手动或读数放大镜观察，应符合外观要求的规定

密合性检验：
1、用一只装满清水的透明广口试剂瓶，瓶塞上分别有三个孔，将真空表、测试玻璃管及抽气设备(可选川玻璃注射器)分别安装在瓶塞上。
2、将已安装吸头的待检移液器连接在侵人液体5cm的测试玻璃管的上端，启动抽气设备.使真空表指针指示在(0.04MPa，达到平衡后，持续5s，此时测试玻璃管下端不得有气泡产生。(见图1）

图1

各部门校验的结果的需求

密封性校验记录表

各部门校验的结果的需求

检验要求按部门分为三个等级

第一级：以精密使用部门为主体部门的移液器必须完全符合校验标准

第二级：以次级精密度要求为主的部门使用，主要用于不需要完全精确的部门

第三级：移液器使用仅需要得到大概剂量的部门

第四级：本级为移液器遗弃等级，

定级标准：以密封性以实验中的气泡数为标准，具体

定级标准表

第五部分： 移液器的校准

采用衡量法对移液器进行检定。

1、检定前的准备
所选用的管嘴应与被检移液器的吸引杆配套。在移液器的吸引杆的下端，轻轻转动管嘴，以保证移液器的密封性，并在完成几次吸液、排液过程中应没有挂水现象。
多头型移液器的进行单孔分别检测

2、检定步骤
（1）将称量杯放人电子天平中，待天平显示稳定后，按下操纵杆使电子天平复零。
（2）将移液器的容量调到被检点。
（3）垂直握住移液器，将按钮按到指定位置，此时将管嘴浸入装有蒸馏水的容器内，并保持在液面下2mm到3mm处，缓慢放松按钮，等待1到3s后离开液面，擦干管嘴外的液体（此时不能碰到流液口，以免管嘴内的液体带出。）
（4）从电子天平中取出称量杯，将吸头流液口靠在称量杯内壁并成45°，缓慢的将按钮压到第一停止点，等待1到3秒，再将按钮完全按下，然后将吸头沿着称量杯的内壁向上移开。
（5）将称量杯放入天平秤盘，记录此时天平显示出的数值，同时记录下此时容器内蒸馏水的温度。
（6）重复以上十次次以上，并填写《微量移液器校准表》

检定应包括两个量程，第一个为最大量程，第二个量程为最大量程的10%或最小量程

3，移液器容量小范围调整方法
容量不足的时用校准工具顺时针旋转螺母可增加容量
容量过大时用校准工具逆时针旋转螺母可减少容量

合格标准参照附表《移液器参数表》

移液器参数表

转换数表
转换系数值Z（ml/g），作为蒸馏水温度和压力的函数。质量比时可以参照下表校准移液器。

倒转换数表
倒数转换系数值表N（g/ml），为另一函数，我公司目前常用，质量体积配比时可参照下表，

第六部分：移液器相关附件标准

吸头

本处提出一个移液器吸头的标准合格检定技术（较为严格的标准）

1，所有吸头脱卸部分具有相同水滴外形
2，柔软的韧性锥体使得吸头与移液器之间密封性更好
3，具有通用性，适合所有现有品牌的移液器
4，精细的刻度使吸液体积清晰可见，读取更容易（高质量要求）
5，新型的吸头设计适用于多种管口和孔板
6，逐渐变细的嘴尖可以操作更微量的液体
7，无不规则形状和无毛刺
8，吸头的生产和包装都在严格保养条件下的无尘环境下进行

吸头盒

1，良好的防尘封闭效果
2，材料稳定，耐高温可高温消毒，不分解
3，结构完整，坚固有韧性、不易变形

移液器架

1，高度因高于移液器带吸头时挂柄到吸头尖端的距离
2，结实可靠，保证移液器的安全
3, 具有一定的防震、防滑措施

结后语：

移液器是一种分析实验室很常用的仪器，本文旨在对移液做一个系统的介绍，对仪器的原理、使用方法、检验、校准等多方面都做了介绍；希望给大家对大家有用；由于接触的移液器有限，可能有些移液器与本文提出的不相符合，希望能与大家好好交流；

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2011/11/30 22:20:47 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主原创吗，写的不错，但是有些地方不够准确，另现在的国标JJG646也不是最佳的标准，与国际标准ISO 8655相比，要宽松的多，改天，我将最近翻译整理的ISO 8655国际标准放上来，顺道问问管理员，怎么给我加点声望啊，连博客都开不了，写帖子没动力啊！

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2011/11/30 22:21:39 Last edit by ourjia

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2011/11/30 22:31:51 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 ourjia(ourjia) 发表:
楼主原创吗，写的不错，但是有些地方不够准确，另现在的国标JJG646也不是最佳的标准，与国际标准ISO 8655相比，要宽松的多，改天，我将最近翻译整理的ISO 8655国际标准放上来，顺道问问管理员，怎么给我加点声望啊，连博客都开不了，写帖子没动力啊！

ISO 8655的确比较准确，不过本文提出的参数标准是属于移液器的厂家的企业标准，想必这个标准更加严格一些；
同时也希望你能分享这个标准

题外话：
你可以传到资料中心供大家下载，下载十次一点声望，还可以获得相应的积分
还有你的VIP资料貌似也还没有编辑认证完全吧？那个也可以获得相应的声望

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2011/11/30 22:34:10 Last edit by 012304