主题：【分享】UV测定中的问题

UV测定中的问题希望对大家来说有点点用处




在UV测定中的常见问题回答

以下在岛津UV（紫外可见分光光度计）上测定的总结

液体的测定

[问题1] 如何使用UV更好的测定浓度高的溶液？
[回答]
因为样品的吸收值（Abs.）高（大约2 Abs.以上）时，易出现测定误差，所以要稀释或使用短光程池使吸收值降低后再测定。
[稀释]
例如，浓度100的样品吸收值为2.7时，稀释为1/5的浓度，即20。测定得到的吸收值乘以5，换算得出浓度100的吸收值。
[使用短光路光程池]
稀释繁复时，可以使用短光程池（1mm/2mm/5mm等，要与专用隔板一起使用，保证光垂直照射样品池）例如，上面的例子可以使用2mm光程池测定。可以得到一个和上面一样的低吸收值。（当然测空白也要用2mm光程池。）
如果想换算为10mm，可以用这个吸收值乘以5。因为浓度和光路长成比例，所以使用A mm的池子换算为使用10mm光程池的测定值时，要（10/A）加倍。

[问题2]为什么测定浓度高的溶液时误差变大？
[回答]
原因是分光光度计上有杂散光。杂散光就是目的波长以外多余的（不纯的）光，这会使测定准确度下降。低档的UV杂散光多。使用低档UV测定的结果，吸收值超过1时，稀释后使吸收值在1以下测定比较安全。

[问题3]可以测定浓度为多少的（限度）稀溶液？
[回答]
因为每种物质具有其各自不同的吸收系数，所以不能用mg/l和mol/ml等单位来回答。将使用吸收值（Abs.）表现.
一般情况下,UV的噪声水平(数值的漂移)在0.002Abs.左右。因为定量下限（可以测定浓度为多少的稀溶液的限定浓度）可以说是噪声水平的10倍，所以UV的定量下限约0.02Abs.左右。
因此，吸光度值在0.02Abs以下时，可以说在定量测定上浓度过稀。
此时，使用长光路池子，提高吸收值后测定（100mm/50mm/20mm长等）。

[问题4]溶液的测定方法是什么？
[回答]
溶液的测定方法见下文。典型的步骤如下。
双光束分光光度计
[步骤]
1．    两个池子中加入溶剂，把池子放入样品侧（以下简称S侧）和参比侧（以下简称R侧）的池架内。
2．    基线校正。（基线校正结束后，画面上的值不为0时，在数值稳定的波长处自动归零。）
3．    从S侧取出池子，倒掉溶液，加上要测定的溶液。放入S侧的池架内。（R侧仍是1. 的状态。）
4．    测定。以下，根据样品数量重复3. ~4.。

单光束分光光度计
[步骤]
1．    池子中加入溶剂，放入池架内。
2．    基线校正。（基线校正结束后，画面上的值不为0时，在值稳定的波长上自动归零。）
3．    取出池子，倒掉溶液，加上要测定的溶液。放入池架内。
4．    测定。以下根据样品数量重复3. ~4.。

注意：3. 通常用样品溶液清洗两次后，测定第三次的样品溶液。

[问题5]狭缝宽是什么意思？
[回答]
使用分光光度计测定，重要的条件就是狭缝宽。
狭缝宽具有和分辨率、（光谱）谱带宽大致相同的意思。
狭缝变大，打到样品上的光量就会增多，分辨率会下降。狭缝宽减小，光量就会减少分辨率会上升，但数据噪音会变大，数据稳定性变差。
进行什么样的测定由最合适的狭缝宽决定。
大致来讲，测定溶液狭缝通常设为2nm。（另外，即使不是溶液，测定的是玻璃和滤光片的透过率，狭缝设为2nm即可。）
使用积分球测定固体狭缝应设为5nm以上。

通常，到达检测器的光量越多，越能得到噪声少的数据。因为使用积分球测定会损失很多的光能量，所以需要把狭缝设大。虽然狭缝越大分辨率越低，但是使用积分球测定固体受分辨率的影响很小，所以建议优先考虑光量。
光谱曲线的峰尖锐时需要设定小的狭缝。虽然有时溶液需要罕有的1 nm的分辨率（狭缝），但是一般2nm就足够。