主题：【求助】内标物何时加入

内标是质控的一种方法，添加自然界没有的氘做内标。通常采用有代表性的内标物，如极性大的乙酰甲胺磷氘体，易挥发的敌敌畏氘体等，我公司考虑到在使用过程中的方便性，一般在开始时选用以上两种和二嗪哝氘体作为内标，等方法稳定或对于一些极性和易挥发没有大的要求时，只加入二嗪哝氘体作为内标。通过它走完前处理后跟线性做一对比，测出它的回收率。

建议在样品处理前加入

原文由 lubiao 发表:
建议在样品处理前加入

跟残留分析方法，和残留物状态有没有关系呢？

样品处理前加入，是不是保证了加入的样品流失跟分析物的流失处相同状态？

那就是说内标要做标准曲线才能算回收率吧，那样品不就直接就作了，还这么麻烦

转来这篇文章，仅供大家参考：

内标法是将一定量的纯物质作内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的含量。 选择内标物有4个要求：
1.内标物应是该试样中不存在的纯物质；
2.它必须完全溶于试样中，并与试样中各组分的色谱峰能完全分离；
3.加入内标物的量应接近于被测组分；
4.色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰的位置相近，或在几个被测组分色谱峰中间。
内标法的优点是测定的结果较为准确，由于通过测量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行计算的，因而在一定程度上消除了操作条件等的变化所引起的误差。内标法的缺点是操作程序较为麻烦，每次分析时内标物和试样都要准确称量，有时寻找合适的内标物也有困难。 外标法简便，但进样量要求十分准确，要严格控制在与标准物相同的操作条件下进行，否则造成分析误差，得不到准确的测量结果。

1、以前做过很多医药、农药中间体的芳香族卤代化合物的常量定量分析，没有自动进样器，用外标法定量，确实重现性与稳定性非常差，结果经常受到搞合成同事的质疑。其实，仔细分析原因不一定就是外标法不适合这种定量分析，首先我们的实验室仪器和手段是否调整到一种稳定而合理的状态了，比如，衬管是否洁净，玻璃棉的位置是否合适恰当（能否使样品尽可能的汽化）、汽化温度是否合适、色谱峰形是否对称（也就是样品与色谱柱健合相是否匹配）、附近有没有其它色谱峰的干扰、选用什么进样方式（如快速进样还是热针进样）等等因素的影响都需要考虑，如果这些因素都考虑了，按照GMP方法验证对于精密度的要求，同一样品进6针以上的RSD和配制6个样品的定量结果RSD都能满足小于百分之1.5的要求，那么这个方法用外标法就是完全适用的，但是前面的影响因素是一定要都考虑到的，否则谈论这个方法是否适用就有失偏颇了。在做过的许多出口产品的定量分析方法当中有许多是一些医药公司提供的比较完善而验证过的方法，内标与外标都有（他们用的都是自动进样）精密度都能满足RSD小于百分之1.5的要求，当一个方法能够满足测试要求的时候，无论内标外标，都是可行的，当然有一个分析成本和分析时间的问题，内标的成本和控制溶液、样品溶液的配制当然要比外标要高和麻烦一些了。而有些时候，可能受你实验室现有仪器和附属设备的影响，达不到一定的要求，而还必须进行定量分析，有时外标的结果可能就要差一些，这时，你可能就要考虑用内标法了，可以排除手动进样的误差、分流歧视的影响、包括一些未知因素平行误差的影响，这时内标可能就显示出它的优势来了。
2、上面已经提到当做方法验证的时候，当同一样品配制6个样品溶液用所选用的外标法进行定量的时候，RSD都满足百分之1.5的要求时，也分为两种情况，小于百分之1和大于百分之1小于百分之1.5。如果RSD的结果小于百分之1，那这个方法就没有什么可以怀疑的了；如果RSD的结果大于百分之1而在百分之1.5略低一些的范围活动时，这个方法的可行性就将受到质疑，毕竟这是方法验证，你就要考虑上面1所提到的影响因素的影响了，如果排除掉以上的影响因素，RSD还是在百分之1.5附近，就要尝试内标了，如果内标结果的RSD很好，就证明你的这个方法受实验条件的影响很大，只能用内标了，或者干脆将原方法做大的变动，再尝试用外标法测试。

3、而对于微量分析，比如农药和兽药残留的分析、环境分析等，根据不同的限量标准要求对于精密度的要求也比常量分析的要求要宽松的多，RSD有时可以允许达到百分之10甚至更高，这时可能外标法有更大的应用空间。

4、单从精密度方面去考虑，排除其它成本和效率的因素，个人认为还是内标优于外标。曾经做过一个中间体二氨基丙醇的常量定量分析，以二乙醇胺为内标，RTX-5 amine（碱改性）15mx0.32mmx1.0um色谱柱分析，将配制好的控制溶液（含有内标物）自动进样器进6针，目的物（二氨基丙醇）与内标物（二乙醇胺）峰面积比率的RSD为百分之0.18，而只对这六针样品的目的物峰（二氨基丙醇）面积求RSD，结果为百分之0.71，通过这一实例的结果大家就会发现到底哪个方法精密度更好了，当然是内标更好了。当然这个化合物的检测方法最后根据上面的验证数据用内标和外标定量都是可以的，实验室可以自由选择。但内标与外标精密度结果的差异是显然存在的事实。

结论：应用外标法能够满足要求，首选还是外标法了，毕竟简单而省事。对于精密度要求比较高、结果准确度会产生重大影响、实验室条件不是很理想的等等条件下，用内标法还是必要的。无论应用那种方法，方法的验证和确认都是很重要的，只要是按照程序经过验证和确认的方法，都有其应用的空间的。

理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质（如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等）、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。
需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率。这时，内标物是在处理前加入的。

我觉得要考虑加的内标物的期望用途来考虑，A:控制损失 B:控制系统偏差
出于控制损失，建议是处理前加入；出于控制重复性偏差，可以在处理好样品溶液中添加。
有人说在处理前加入内标能控制损失，又能消除系统偏差，本人认为由于内标物和样品组分的性质（水溶性，pH值，极性，热稳定性，等等）的不同，在控制损失上存在很大的不确定因素。
为什么能用外标就用外标呢？就是因为内标有很多值得怀疑的（不确定度因素多），而在有的情况下，外标法无法估计样品组分的损失或无法控制进样的重复性时，内标法定量就显得比外标法优越了

内标法的原理我也都知道，但操作起来就不明白了，比如说样品A和内标物B，作完校正因子后，在液液萃取中用于实际水样的测定，处理前同时加入A和B，处理完后，B的质量是多少怎么知道呢？如果是液液萃取后进气相之前加入，就可以取10ML处理后的萃取液，再加入1ML的内标物，根据内标物浓度算出其质量，这就可以用公式，算出萃取液中的A的质量，再除以10不就是浓度吗？如果是处理前加入怎么算呀

确切的说，内标物要在处理前加入，这样能够明确消除处理带来的损失。

原文由 tj2248882 发表:
内标法的原理我也都知道，但操作起来就不明白了，比如说样品A和内标物B，作完校正因子后，在液液萃取中用于实际水样的测定，处理前同时加入A和B，处理完后，B的质量是多少怎么知道呢？如果是液液萃取后进气相之前加入，就可以取10ML处理后的萃取液，再加入1ML的内标物，根据内标物浓度算出其质量，这就可以用公式，算出萃取液中的A的质量，再除以10不就是浓度吗？如果是处理前加入怎么算呀

处理前加入也是一样啊，加入多少就按多少啊
就像你进样前加入一样，在GC中的损失被忽略