主题:【求助】液相冲柱问题

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qjw73
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我这里的做法是,用缓冲盐时,用纯水冲洗泵头,以免柱塞杆堵,做完试验后,用5%的甲醇冲洗半小时左右,再用65%的甲醇保存柱子就可以了,一般情况下,用含磷酸或醋酸的流动相也是这样处理的。先使其成中性再换高浓度的甲醇!
cjf123
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有用到盐时,可以先用5%的甲醇冲洗30min,再过渡到80%的甲醇冲洗10-20个柱体积(特别是当最近还要用到此柱时,没有必要用100%甲醇冲洗).如果盐的浓高的话,可以把柱子拆下,用100%水冲洗系统30-60min.如果有Seal-Wash功能的就一定洗下柱塞密封.
柱体积计算公式:V=3.14*r*r*L*0.6
如:4.6*150mm,5vm的柱子,V=3.14*0.23*0.23*15*0.6=1.5ml左右

另外,并不是所有的柱子都不能用100%的纯水冲洗:
当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时,有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象,这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相,再用高水含量的流动相进行平衡。由是色谱柱长期储存也会发生此现象。使用内嵌极性基团的反相色谱柱(如Waters SymmetryShield RP色谱柱)或非端基封口的色谱柱(如Waters Resolve色谱柱)也可避免发生坍塌,后面这的两种柱子其实都可以用100% 的纯水冲洗的。
希望对大家有帮助!!!

bochg
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大多数柱子开始冲就要含有一定量的有机相,除非是那些可以用100%水相的柱子. 倒伏了再想把盐洗掉就难了
beifen20071107
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当流动相里含盐里较大时,我们都用纯水冲两小时,流速1.0。没觉得毁柱子有多严重。
bochg
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随柱子来的说明会说明怎么冲,怎么保存吧.甲醇,水,乙腈,甚至THF什么的,都不能一概而论
tlhhb
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真不知他们是些什么老师?他没难道没做过试验啊?
普通C18柱,非特殊说明可用纯水的柱子,最好别用纯水啊。
如流动相中用过盐,应使用至少5%的甲醇溶液冲冼,后用纯甲醇冲洗并保存。
sepu0898
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原文由 cjf123 发表:
有用到盐时,可以先用5%的甲醇冲洗30min,再过渡到80%的甲醇冲洗10-20个柱体积(特别是当最近还要用到此柱时,没有必要用100%甲醇冲洗).如果盐的浓高的话,可以把柱子拆下,用100%水冲洗系统30-60min.如果有Seal-Wash功能的就一定洗下柱塞密封.
柱体积计算公式:V=3.14*r*r*L*0.6
如:4.6*150mm,5vm的柱子,V=3.14*0.23*0.23*15*0.6=1.5ml左右

另外,并不是所有的柱子都不能用100%的纯水冲洗:
当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时,有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象,这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相,再用高水含量的流动相进行平衡。由是色谱柱长期储存也会发生此现象。使用内嵌极性基团的反相色谱柱(如Waters SymmetryShield RP色谱柱)或非端基封口的色谱柱(如Waters Resolve色谱柱)也可避免发生坍塌,后面这的两种柱子其实都可以用100% 的纯水冲洗的。
希望对大家有帮助!!!



估计会有点问题,根据不同的柱子首先大家都应该明白要用不同的冲洗方法了。如果按照“5%甲醇。。。。。。”这种公式化的做法,那么如何解决特异性的柱子呢?尤其还有有点,即使是缓冲盐溶液,特异性也非常大吧?用“公式”肯定是错误的。

所以,怎么冲洗?问厂家那是最正确的做法!
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