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主题：【求助】请教HPLC 高手

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shmily1173
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发表于：2008/09/11 16:36:36 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用高效液相仪荧光检测硫酸新霉素，由于硫酸新霉素没有紫外吸收基团，我用的是国外的氯甲酸芴甲酯的衍生化试剂，结果每次衍生化试剂出峰时间都是3分钟左右，很稳定，可硫酸新霉素衍生化产物出峰时间总是不一致，一般在8-11分钟之间，有哪位高手做过麻烦给知道下，仪器是waters 2695，荧光仪是2475，急！急！急！
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2008/9/11 16:47:45 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 shmily1173 发表:
我用高效液相仪荧光检测硫酸新霉素，由于硫酸新霉素没有紫外吸收基团，我用的是国外的氯甲酸芴甲酯的衍生化试剂，结果每次衍生化试剂出峰时间都是3分钟左右，很稳定，可硫酸新霉素衍生化产物出峰时间总是不一致，一般在8-11分钟之间，有哪位高手做过麻烦给知道下，仪器是waters 2695，荧光仪是2475，急！急！急！


你的仪器平衡时间足够长吗？还有流动相里面加的酸或者碱是什么。如果他的PH值容易变化，那么时间就是很容易飘移。
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qingqingcao
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2008/9/11 16:52:12 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
因为是衍生化 时间不够。反应不完全。加长反应管长度。3m。 在废液后再接阻尼管（废液管了）3m
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2008/9/12 15:31:51 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 shmily1173 发表:
我用高效液相仪荧光检测硫酸新霉素，由于硫酸新霉素没有紫外吸收基团，我用的是国外的氯甲酸芴甲酯的衍生化试剂，结果每次衍生化试剂出峰时间都是3分钟左右，很稳定，可硫酸新霉素衍生化产物出峰时间总是不一致，一般在8-11分钟之间，有哪位高手做过麻烦给知道下，仪器是waters 2695，荧光仪是2475，急！急！急！

从反应的完整度、流动相的ph着手看看。
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有水有渝
xky0230699
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2008/9/12 16:57:20 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我觉得衍生化的程度跟保留时间应该没有太大的关系，还是先从流动相及其对色谱柱的影响，柱温，环境温度等因素上考虑。关于衍化程度，可以通过对比试验取得第一手资料，如不同的衍生时间，不同厂家或批号的衍生试剂，衍生化温度等。
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