主题：【第一届网络原创作品大赛】如何利用LC-MS/MS，更快更好的建立生物样品分析方法?（根据意见和建议，完善后的作品已呈上）

原文由 sally98 发表:

原文由 dickwang2008 发表:

原文由 sally98 发表:

原文由 dickwang2008 发表:
四、实例
    确定质谱条件后，我们对色谱条件进行了优化。在这里最主要的是根据化合物的极性大小选择合适的色谱柱，由于该化合物含有羧基，极性相对较大，我们就选用C8填料的色谱柱为分离媒介。同时为了有助于化合物的离子化，加入一定浓度的乙酸，对峰型的改变也有一定程度的作用。

请教楼主一个问题，既然该化合物呈酸性，流动相中加入乙酸不是会抑制该物质的离子化么？从理论上来讲，应该加入乙酸铵之类的缓冲盐，将pH值调得稍高一点吧？谢谢！

是这样子的，液相色谱分离和质谱检测是一个矛盾体。色谱分离要求化合物呈游离状态，对于酸而言就要求在酸性条件下才能呈游离状态；而对于质谱检测而言，需要检测离子，即需要化合物能够很好的离子化，这对于酸而言就需要在碱性条件下较好。对于这样矛盾的体系，我们就只能兼顾考虑，那么最好选择在化合物的pKa值附近，上下不超过1。
不知道我说的有道理没？有问题继续发帖。

谢谢您的回复！再请教一个问题，在液相中有一种说法，流动相的pH应避免选择在待分析物的pKa±2的范围内，因为这时该化合物呈游离和离子两种状态，会引起峰形问题，不知道实际中是不是这样？既然您的pH在pKa±1，那么您提到的“对峰型的改变”是一种怎样的改变呢？应该是比较过多种pH的情况下得出的结论吧？谢谢！

原文由 yourname 发表:
支持楼主！
学习中~
如果能把这样的主题做成一个系列就好了。

原文由 shengfazi2008 发表:

原文由 dickwang2008 发表:
前言：  以前曾在实验室的seminar上，做过一次关于如何建立生物样品分析方法的工作报告。时隔两年，恰逢仪器信息网举办第一届网络原创作品大奖赛，在这里将这几年来对于生物样品分析的一点点感受总结一下，与大家交流、分享。


首先明确一下文中提到的“生物基质”，主要指的是血浆、血清、唾液、尿液或者器官组织等。药物透过机体的各种生理屏障，进入到这些基质中，就是我们所说的“生物样品” (Biosample)。生物样品中的药物浓度极低，我们如何利用灵敏度高的仪器如LC-MS/MS，更好的建立测定生物样品中药物浓度的分析方法呢？下面我主要从以下四个方面进行阐述：


本文的电子版如下，欢迎下载阅读。

如何利用LC-MS/MS，更快更好的建立生物样品分析方法?

给大家提供一篇关系消除生物样品里基质的影响从而让LC-MS/MS得到平稳的基线以及更低的检测限和定量限!

用于体液的生物质谱直接分析的多维在线SPE技术(SPE-LC-MS技术权威，德国慕尼黑大学Karl-Siegfried Boos教授)
用于体液的生物质谱直接分析的多维在线SPE技术(SPE-LC-MS技术权威，德国慕尼黑大学Karl-Siegfried Boos 教授)

原文由 davidchen820927 发表:
Dickwang的经验总结对我们药动学研究很有参考价值，另外我再请教一个问题：在检测器的选择方面，有时我们很难选择，到底选择LC-MS或LC-MS/MS有没有一个基本原则？

原文由 peterhello 发表:
楼主总结的很好
在此补充一点大家容易忽视的问题——数据处理
虽然对于液质来说方法摸索和优化是十分重要的，但是其实数据处理也应该引起大家的重视。很多时候对于线性好坏的判断，并不能光从回归系数有多少个9来判断。
有时候虽然9很多，但是实际低浓度点的准确度是很差的。在较宽的线性范围下，比如三个数量级，即使回归系数有三个9，低浓度准确度仍然可能只有50%，这必须引起我们的注意。
特别是对于有复杂基质存在的液质分析（比如生物基质），基质效应几乎是不可避免存在的，而且尤其对低浓度点的影响最大。在做线性回归时应该更多的考虑低浓度点的准确度，所以应该尽量采用加权线性回归方法，如果浓度为X，则可以采用1/X或者1/X^2等权重系数来增加低浓度点的准确度对回归系数的影响。
特别是对于药物动力学和药物等效性的分析研究，往往需要兼顾整个药时曲线的浓度范围，数量级跨度可能很大，要满足《指导原则》的要求，往往必须使用权重法，可以说在复杂基质中的液质分析都应该尽量采用权重系数法来进行线性回归。
实际上，几乎所有仪器公司的定量软件里都有权重系数的设置，而往往被我们忽略了。