主题：【转帖】试剂配方:DNA操作试剂

10×TAE
Tris                121.1g        484.4g
EDTA(0.5M)          20ml            80ml
NaAc•3H2O            17g            68g
glacialaceticacid  ~30ml          ~200ml
adjusttopH                  8.1
dH2Oto              1000m            l4000ml

NaOH
        10N                  4N
NaOH    400g                160g
dH2Oto  1000ml              1000ml

2NHCl
concentratedHCl        365ml        182.5ml
dH2Oto                  2000ml      1000ml

5mg/mlssDNA
SalmonspermDNA      1g
ddH2Oto            200ml

0.5MP.B(phosphateBuffer)pH6.8
Na2HPO4      16.44g      131.52g
NaH2PO4      16.11g      128.88g
dH2Oto        500ml        4000ml


20×SSC
NaCl          175.3g        701.2g
Na3Citrate      88.2g        352.8g
dH2Oto        1000ml          4000ml
Sterilizebyautoclaving

10%SDS
SDS        100g
dH2Oto    1000ml
Heatto68℃toassistdissolution

50×Denhart’sSolution
Ficoll400        10g
PVP-360            10g
BSA(FractionV)      10g
ddH2Oto            1000ml

SouthernBlotHybridizationBuffer(Saghai,sLab)
Final    conc.        StockVol.
      5×SSC              20×250ml
50mMPB(pH6.8)            0.5M100ml
5×Denhardt’s          50×100ml
2.5mMEDTA      (pH8.0)0.5M5ml
100μg/ml  ssDNA 5mg/ml  20ml
0.4%SDS  20%          20ml
Dextransulfate          50g
ddH2Oto                  1000ml
(Placeabeakeronastirrer,addthesesolutionintheorderofappearanceonebyone.SDSshouldbetheverylastitem.)

WashingoffProbeforRe-hybridizationofBlots(I)
Washingtime:    10min
Finalconc.          Stock        Vol.
0.1×SSC            20×SSC          20ml
0.1%SDS            10%SDS            40ml
dH2Oto              4000ml

WashingoffProbeforRe-hybridizationofBlots(II)
Washingtime:3min
Finalconc.      Stock          Vol.
0.1NNaOH        10NNaOH        40ml
0.2%SDS          10%SDS          80ml
dH2Oto          4000ml

WashingoffProbeforRe-hybridizationofBlots(Ⅲ)
Washingtime:20min
Finalconc.        Stock          Vol.
0.2MTris.(pH7.5)  1MTris.(pH7.5)  800ml
0.1×SSC          20×SSC        20ml
0.2%SDS          10%SDS          80ml
dH2Oto            4000ml

BlueJuice
Finalconc.            Stock          Vol.          Vol.
70%Glycerol            100%            35ml        70ml
0.5×TBE              5×            5ml          10ml
0.2%SDS                10%              1ml        2ml
20mMEDTA              0.5M            2ml        4ml
5mg/mlBromphenolBlue                  0.25g        0.5g
5mg/mlXylenecyanol                    0.25g        0.5g
dH2Oto                                50ml        100ml

EB(10mg/ml)
ehidiumbromide      1g
dH2Oto            100ml
Stironamagneticstirrerforseveralhours.Transferthesolutionto
adarkbottleandstoreat4℃.
Theconcentrationofworksolution:0.5μg/μl(50μlstocksolution
In1000mldH2O).

DecontaminationofEB
ReducetheconcentrationofEB4,mixcarefullythenadd1volumeof2.5NHCl,
mixcarefullyandallowthesolutiontostandatroomtemperature
forseveralhours.Add1volumeof2.5NNaOH,mixanddiscard.