主题:【原创】GPC标准品出峰时间波动

浏览0 回复14 电梯直达
老兵新传
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总结了近几年测定某样品的出峰时间,总的波动范围在0.3min之内,而总结近一年的标准曲线,却发现标准品的出峰时间波动极大,同一个样品最大波动达到1.2min以上,最小也在0.3min以上,致使校正结果差别很大。不知大家有没有发生过这种情况。
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老兵新传
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我用的标样是聚乙二醇系列(PEG),THF流动相,由于THF不好溶每次都需要加热,有高手知道加热是否会造成降解?偿试用水溶样,但970以下分子量的样品均被水的负峰掩盖。请高手指教,多谢!
flyaway
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原文由 bjwanhua 发表:
我用的标样是聚乙二醇系列(PEG),THF流动相,由于THF不好溶每次都需要加热,有高手知道加热是否会造成降解?偿试用水溶样,但970以下分子量的样品均被水的负峰掩盖。请高手指教,多谢!

从来没有在溶解样品的时候尝试过加热,所以不甚了解。不要用水溶解,出峰时间会有影响。
小不董
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原文由 bjwanhua 发表:
总结了近几年测定某样品的出峰时间,总的波动范围在0.3min之内,而总结近一年的标准曲线,却发现标准品的出峰时间波动极大,同一个样品最大波动达到1.2min以上,最小也在0.3min以上,致使校正结果差别很大。不知大家有没有发生过这种情况。

几年下来,柱子的性能有了好多变化,曲线也一般1-3个月就要重新做一遍了。
有波动很正常。如果是连续进样时,发现出峰偏移了,那就要找找原因了。
压力是否正常?如果不是看是否有漏液或者系统有气泡,给与解决。
正常的话,再看柱温,是否正常?
是否梯度淋洗等,一步一步的检查哪里出问题了。
原文由 bjwanhua 发表:
我用的标样是聚乙二醇系列(PEG),THF流动相,由于THF不好溶每次都需要加热,有高手知道加热是否会造成降解?偿试用水溶样,但970以下分子量的样品均被水的负峰掩盖。请高手指教,多谢!。

PEG水溶,用水相来做还是很好做的,加热没有问题,可以,但是要控制加热的温度和时间,不能太高,时间可以稍长点没有关系。震荡的时候,考虑不要把分子切断,缓慢旋摇的方法溶解。溶解用溶液要用流动相一样的溶液。这样才会减小溶剂峰,最好是在走基线的时候,把流动相接来做溶剂。这样既节约溶剂,又减小溶剂峰,峰形好看。
fattyboy
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我也出现这种情况,这个应该算是正常现象,流动相,pH,温度的改变都回导致这种情况,特别是流动相是离子对试剂时不可能每次配得都绝对相同所以时间有波动属正常现象
老兵新传
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原文由 bjwanhua 发表:
总结了近几年测定某样品的出峰时间,总的波动范围在0.3min之内,而总结近一年的标准曲线,却发现标准品的出峰时间波动极大,同一个样品最大波动达到1.2min以上,最小也在0.3min以上,致使校正结果差别很大。不知大家有没有发生过这种情况。

    上面所说的样品是我们常用的某一牌号的产品,总结了不同厂家、近3年的测定情况,出峰时间在0.3min以内变化,可以说明仪器的稳定性没有问题。而总结的标准品的出峰,是一年内的数据,并且每次测定标准品时,10个样品的出峰时间变化没有任何规律,有些点时间延长,有些点时间缩短,非常困惑。
小不董
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原文由 bjwanhua 发表:
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总结了近几年测定某样品的出峰时间,总的波动范围在0.3min之内,而总结近一年的标准曲线,却发现标准品的出峰时间波动极大,同一个样品最大波动达到1.2min以上,最小也在0.3min以上,致使校正结果差别很大。不知大家有没有发生过这种情况。

    上面所说的样品是我们常用的某一牌号的产品,总结了不同厂家、近3年的测定情况,出峰时间在0.3min以内变化,可以说明仪器的稳定性没有问题。而总结的标准品的出峰,是一年内的数据,并且每次测定标准品时,10个样品的出峰时间变化没有任何规律,有些点时间延长,有些点时间缩短,非常困惑。

可能是柱子的问题,有些孔被堵了,主要是分子量大和小的,两头的时间偏差大的话,基本就是这个问题了。
老兵新传
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duming
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viscotektegent
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原文由 bjwanhua 发表:
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总结了近几年测定某样品的出峰时间,总的波动范围在0.3min之内,而总结近一年的标准曲线,却发现标准品的出峰时间波动极大,同一个样品最大波动达到1.2min以上,最小也在0.3min以上,致使校正结果差别很大。不知大家有没有发生过这种情况。

    上面所说的样品是我们常用的某一牌号的产品,总结了不同厂家、近3年的测定情况,出峰时间在0.3min以内变化,可以说明仪器的稳定性没有问题。而总结的标准品的出峰,是一年内的数据,并且每次测定标准品时,10个样品的出峰时间变化没有任何规律,有些点时间延长,有些点时间缩短,非常困惑。


呵呵,传统GPC就是这样,影响因素太多,柱子、柱效、标样本身的差别、溶剂/流动相等等等等,没辙啊,否则多检测器GPC就没有存在的必要了。
zhangchenhui84
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原文由 bjwanhua 发表:
总结了近几年测定某样品的出峰时间,总的波动范围在0.3min之内,而总结近一年的标准曲线,却发现标准品的出峰时间波动极大,同一个样品最大波动达到1.2min以上,最小也在0.3min以上,致使校正结果差别很大。不知大家有没有发生过这种情况。


不同时间段的实验结果肯定是会偏差的
但是不会偏差1.2或0.3min以上的 (冬天和夏天,两者的结果可能会有那么大偏差)
我们都是偏差0.03左右,最近我们发现室温对样品的保留时间影响是特别大的, 这大概就是室温引起了柱压的变化,后来我们严格控制柱压(压力波动控制在0.1MP)---这样做出来的结果比较稳定,但是对GPC测分子量来说,偏差0.03min 分子量偏差大概就有200-300左右了,因此做样品分子量的时候,还是需要用以前测过的样品或标样进行比对。

PS
还有我们也有用PEG(聚乙二醇)做标样,高分子量确实是很难溶解的,而且我们发现,加热溶解后,有些PEG峰会产生分裂(不知道是什么原因?),我个人觉的GPC对PEG可能会有保留,最近我们做的PEG峰,不管分子量相差多大,它们的保留时间基本上接近(也不知道什么原因?怀疑是保留引起的,请各位老师指正)。

个人建议:

测聚乙二醇系列样品的分子量最好用GFC(凝胶过滤色谱),PEG样品在GFC能很好的出峰。
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