主题：求助:蛋白质测定方法

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folin法较好

原文由 chenxuwei 发表:
我在做荧光法分析蛋白,现在想找一个对照方法,临床用的溴甲酚绿法.请教哪位用过这方法的, 请告诉我操作流程.谢谢!

经典的是考马思量兰法

蛋白质测定方法
试剂配制
——BSA 蛋白质标准储备液 （keep at  4℃）
10mg BSA→1ml mili-Q water 10mg/ml
——蛋白质标准使用液：50ml储备液→4950ml mili-Q water 0.1mg/ml=0.1mg/ml
    BSA（Bovine Serum Albumin，小牛血清白蛋白）
——考马斯亮蓝染液 （keep at  4℃）
（1）100ml H3PO4(86.3%)+400 mili-Q water=17.3%
（2）100mg Coomassie brilliant blue G-250→50ml 95%乙醇中
（1）+（2）→mili-Q water至1L
——Na-P Buffer  （磷酸缓冲液）        0.5L  keep at  4℃
（1）0.1mol/l  NaH2PO4×2H2O（分析纯）（MW155.99）      7.8g
        ®50ml Milli-Q Water
（2）add NaOH Solution until　ｐＨ＝7.6（用pH计）
        dilute to 500ml by Milli-Q Water

总蛋白质的测定
——蛋白质标准工作曲线的制备：
分别取 0，10，20，30，40，50，70，90µl的蛋白质标准使用液于测量板试管中（双平行样），用去离子水稀释至 100µl 。则每一微量试管中所含的蛋白质分别为1、2、3、4、5、7，9 µg 蛋白质。加入250µl 考马斯亮蓝，显色培养2min以后测。（不超过1h）
——蛋白质样品的测定
l    空白样： 100µlBuffer
l    样品：取10µl样品（已制备好的酶源）用Buffer（990ml）稀释到1ml，取稀释样 50µl加入50µl Buffer，置于测量板试管中。
l    向空白和样品中加入250µl 考马斯亮蓝，显色培养2min以后，蓝色混合液生成。用酶标仪在595nm处，测定样品的吸光值。（先振荡30ms，再测定）

值得参考,谢谢

学习了，谢谢！