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透射电镜（TEM）

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主题：【求助】【求助】透射电镜制片-液氮保存的标本如何处理

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jerry621

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发表于：2009/03/02 10:04:51 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

请教如下：
标本：肾穿刺取出的肾脏组织
保存方式：取出后置于液氮罐中
保存时间：至今已经有2个月了
请问是否还可以制成透射电镜切片，如果可以制作，是否和常温切片制片过程一样。标本从液氮罐中取出后是否需要特别处理，比如在一定条件下恢复常温等。
PS：由于实验条件有限，不能进行冰冻切片

概括：1.保存于液氮罐中的标本是否需要复温？ 2.固定，染色等过程与常温切片有否不同？

在此感谢大家的回答，并希望通过讨论得到正确的处理办法，感谢了！

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2009/3/3 9:37:02 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

还有一点说明：主要是为了观察是否存在凋亡小体

到目前为止只看到有朋友进来，尚没有人对此进行讨论或指出正确的处理方法，再次向大家求助啊！有懂的朋友，请帮帮忙好吗？再次感谢了！

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jerry621

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2009/3/5 13:47:36 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

有知道的吗？急切求处理办法！

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蓝莓口香糖

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2009/3/5 22:38:03 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

虽然都是TEM技术，生物电镜是一个相对独立的大分支。很多技术和研究方法都比较独特。在这里恐怕不好找到懂行的。建议你直接跟相关院校联系，也许比较快。比如清华大学生物系，他们也有自己的电镜设备，应该有这方面的经验。联系方式想必网页上能找到。

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zhouzb

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2009/3/7 11:01:26 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

为你的标本默哀！电镜标本的第一要素是保存好超微结构！经过冷冻的标本无论怎么保护，里面都会形成微小冰晶，这冰晶对光镜观察没有多大影响，对电镜观察确实致命的。所以，电镜标本不能结冰保存，更不能冷冻！

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scores

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2009/5/6 15:55:38 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

默哀吧
这个样品没法挽救了
保存样品的超微结构通常有两个办法：
一、化学固定。指用多聚甲醛/戊二醛固定保存。样品可以在固定液中放置一段时间，接下来做常温包埋切片处理；
二、冷冻固定。在常压下，一定要加冷冻保护剂（高粘度物质），才可以保护样品不产生冰晶；如果不加保护剂，只能高压冷冻，瞬时高速降温才能避免冰晶产生的步骤。两者都可以液氮中保存一定时间，然后做冷冻切片。
象你这样，没有加任何冷冻保护剂，直接往液氮里一扔，细胞里早就是冰晶了，再怎么做也白搭。
我这里倒是可以做冷冻切片，有需要可以联系，娃哈哈。

原文由 jerry621 发表:
请教如下：
标本：肾穿刺取出的肾脏组织
保存方式：取出后置于液氮罐中
保存时间：至今已经有2个月了
请问是否还可以制成透射电镜切片，如果可以制作，是否和常温切片制片过程一样。标本从液氮罐中取出后是否需要特别处理，比如在一定条件下恢复常温等。
PS：由于实验条件有限，不能进行冰冻切片

概括：1.保存于液氮罐中的标本是否需要复温？ 2.固定，染色等过程与常温切片有否不同？

在此感谢大家的回答，并希望通过讨论得到正确的处理办法，感谢了！