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液相色谱（LC）

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主题：【讨论】进了几针样，峰就几乎没了是怎么回事

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realtiger

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发表于：2009/03/10 19:16:40 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

悬赏金额：20积分状态：已解决

弱酸性化合物多残留检测
Agilent Zorbax C18 4.6*250 5um 0.9ml

时间 A% B% C%
0 80 10 10
10 20 40 40
14 10 45 45
16 4 48 48
18 80 10 10
流动相比例：A：水（0.2%冰醋酸）B：甲醇 C：乙腈

刚开始几针都很好

第二天变成这样的峰了

换了柱子agilent 4.6*150 3.5um的 0.8ml。这是第一针

后面的都成这样了

哪位帮忙分析下原因
1 柱子是不是有受损
4 第二个图峰形有点前伸那种，是怎么回事
2 怎么改善
3 分离度能否再提高，怎么改梯度
谢谢

推荐答案：〓猪哥哥〓回复于2009/03/11

初始有机相比例再提高的话应该不利于分离啊

更换柱子后走的第一针不知道是因为没有完全走出来，还是其他原因，但是除了保留时间和峰面积的数据不知道外，单从图谱上看还可以。

提高有机相的比例不是要整个都提高，是提高最初始的比例，你的初始为10，可以提高到15-20，把前面的出峰时间缩短，对于成分较多的可以用等度试试。

补充答案：

nnsss回复于2009/03/11

柱子不适用你的色谱条件,QQ690547631

老多_小多回复于2009/03/11

存在的问题很多
1.你的物质在这个条件下是否稳定
3.你的物质用这个流动相适合吗？有没有考虑过别的
2.峰不好肯定是柱子的问题

xulili_803011回复于2009/03/11

从前两张谱图看，我觉得是不是样品溶液的稳定性不好。
你的第三和第四张图我觉得也是这样的问题。
还有就是你两次用的柱子不一样，所以第一、二张图与第三、四张可比性不大。柱子填料的粒径不同，柱效差别很大。
我感觉还是溶液稳定性的问题，你应该坐一下稳定性实验看看
还有就是，你跑得是梯度，每次跑完一次以后，是否进行了posttime,这个参数一般设定5min，如果没有设定这一参数，也可以在每次进样结束后，在流动相初始条件下，平衡柱子5到10 min

小不董回复于2009/03/11

楼主说的还不详细，zorbax只是一个牌子，C18是个型号，具体是什么的柱子，是否适合做酸性比较大的物质分离，还要看柱子。
看图谱，基线有向上走的趋势，不是很稳。254nm，波长用的很普遍，不存在流动相干扰的问题。第一天和第二天相差都比较大了，柱校下降太快，真要考虑是否流动相的酸度不适合。

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2009/3/10 19:18:42 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

进的是标样1ppm 乙腈溶液；换柱子后进样量由20改为10ul

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华翔九天

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2009/3/10 21:18:38 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

是不是你的柱子有问题了？还有前伸峰好像也是和柱子有关。

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东风恶

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2009/3/10 21:27:39 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

个人认为是柱子没有冲洗干净。

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2009/3/10 21:40:53 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 luoleqc 发表:
个人认为是柱子没有冲洗干净。

应该怎么冲洗

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ygx

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2009/3/10 22:27:48 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

是不是楼主的试样稳定性不好？查查是否是试样的溶剂问题？

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〓猪哥哥〓

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2009/3/10 23:16:53 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

从总体来看，峰的分离不好。所以条件尚待改善。

1、比较第一和第二的图谱，有两个差异，一个是峰高，一个是峰的种类。

不知道你第二天进针是不是进了2倍的体积，峰面积较高。从而含量比较小的物质成分也在图谱中表现出来了。这样峰比第一个就多了不少。如果进样量是一致的话，那就应该是柱子残留，即冲柱子的时间不够，建议不要倿嗇冲柱子的时间。一般用5%-10%的甲醇冲40min，再用有机相冲洗一个小时。如果残留比较严重可以小流速的再长时间冲洗下。

2、换了一根柱子之后，第一针的图谱是比较标准的。分离度相比另一根柱子第一针稍微好了些。但是第二次的进样图谱完全变形了。但是看到你的峰高，好像进样量是前一针的一半，当你进样量减小，峰高必然降低，又由于你是梯度，存在漂移，这些原因就会使图谱很难看。建议在针与针之间增加柱子的平衡时间。等到柱子残留很低，再进第二针。

3、至于提高分离度。由于不能看到你的保留时间，只能大概的，建议初始有机相比例提高，在10-16分钟走一个等度，等你要的峰全部出来，再加大有机相知道纯有机相冲洗和平衡。

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