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主题：【已应助】【求助】请教：关于曲线不直的原因

浏览0 回复11 电梯直达
higher_104
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发表于：2009/04/20 11:01:18 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近曲线老做不直，总共8 个点，前四个是一条，后四个是一条，拟合 一条变成S2或S3的accuracy很低，到最后两个点accuracy很高，就是低的和高的都超出了标准，
流动相：0.1%FA in water with 10mM 乙酸铵
        0.1%FA in ACN
regression: linear ,1/x2

这种情况哪位前辈遇到过啊？
是什么原因呢？
怎么处理的？
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2009/4/20 11:22:11 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 higher_104 发表:
最近曲线老做不直，总共8 个点，前四个是一条，后四个是一条，拟合 一条变成S2或S3的accuracy很低，到最后两个点accuracy很高，就是低的和高的都超出了标准，
流动相：0.1%FA in water with 10mM 乙酸铵
        0.1%FA in ACN
regression: linear ,1/x2

这种情况哪位前辈遇到过啊？
是什么原因呢？
怎么处理的？


有必要做这么多点么，6个不就够了吗，并且你做标准曲线是严格按照一个浓度5个重复，不同5天做的吗
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风之彩
juju11
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2009/4/20 11:41:11 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你的浓度跨度是不是很大？这种情况说明你的标曲高浓度超出了线性范围。做两条标准曲线是可以的，但是每条至少也要6个点吧。
还有一个办法，就是将高浓度的点去掉，样品超出检测范围的点稀释后测定，然后再乘以稀释倍数。
一般我都用第二种方法。
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2009/4/20 12:34:44 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 juju11 发表:
你的浓度跨度是不是很大？这种情况说明你的标曲高浓度超出了线性范围。做两条标准曲线是可以的，但是每条至少也要6个点吧。
还有一个办法，就是将高浓度的点去掉，样品超出检测范围的点稀释后测定，然后再乘以稀释倍数。
一般我都用第二种方法。


很有道理，不过将高浓度的样品稀释然后在乘以其倍数，会不会误差很大呢，怎么去减少误差呢，有没有规范的，或者说这就是一种错误。
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2009/4/20 15:09:39 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢回复，我后来把曲线范围缩短了一半，结果还是一样啊。
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2009/4/20 17:27:13 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我觉得可以把样品稀释了做，误差不会很大。
我们没有像2楼那样，重复5个。
如果做两条曲线，样品怎么分配呢，得出来的浓度有可比性么？


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2009/4/20 17:30:27 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
浓度范围从20nM-4000nM 改到20nM-2000nM
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dickwang2008
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2009/4/20 19:02:53 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你提到的线性不好，是直接进纯溶液还是经过处理后进样，然后计算得到曲线呢？另，最好把曲线的几个点的浓度列一下，这样信息越多，更加方便大家分析问题。
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2009/4/21 8:53:54 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品是ADME样品，经过蛋白沉淀后进样的，进样体积为10ul,内标响应稳定。
曲线的每个点我记不大清楚了，但是范围已经在上面给出了。
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juju11
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2009/4/21 9:25:10 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 higher_104 发表:
谢谢回复，我后来把曲线范围缩短了一半，结果还是一样啊。


你说的缩短了一半，只是去掉了一个最高点。
你可以把你的标准曲线图发上来看看。
用两条标准曲线，每条标准曲线至少也要5、6个点，考虑到重叠的点，你做标曲曲线怎么也得8、9个点左右，而且遇到两条标准曲线重叠的点，也会遇到标准曲线的选择问题。
所以一般我们会用稀释来做，但是是用空白基质稀释。
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higher_104
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2009/4/22 11:16:21 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
缩短一半，点的个数不变，数值变了，不只是一个最高点。
两条曲线怎么选择呢？
附件是问题的具体情况。
有时间的前辈帮忙分析一下
谢谢了
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