主题：【原创】皮革水解物的测定

1前言
某些非法厂家在乳粉，尤其是在婴幼儿配方乳粉中掺入廉价的水解动物蛋白来冒充或替代乳蛋白质。水解动物蛋白是将牛皮下脚料等有害成分粗加工后制成的水解蛋白质，因其氨基酸的组成不合理，且不易消化，所以营养价值低下，导致人体吸收利用率低，严重影响到婴幼儿的生长发育和智力水平。
2检测基本思路：
动物水解蛋白是利用皮革下脚料等水解制成，其中的特有成分L-羟脯氨酸和羟赖氨酸，且羟脯氨酸的含量较高，达10%以上，而大豆蛋白与乳蛋白中不含此成分。利用这一特性就可进行动物水解蛋白质的鉴定，即通过对羟脯氨酸的测定来鉴定乳与乳制品中是否添加了动物水解蛋白的成分。
3检测方法
3.1分光光度法
3.1.1实验原理
  试样经酸水解，释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化，生成还有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲胺基苯甲醛反应生成红色化合物，在波长558nm处进行比色测定。通过对羟脯氨酸含量的测定，可判断是否含有动物水解蛋白。
3.1.2实验仪器
紫外分光光度计﹑恒温水浴锅﹑酸度计﹑恒温干燥箱等
3.1.3试剂
氯胺T（HG3-972）溶液，苯酚溶液，显色剂-对二甲胺基苯甲醛，L-（-）-羟脯氨酸（C5H9NO3）标准溶液。
3.1.4试验步骤
3.1.4.1标准曲线的制作
3.1.4.2样品的前处理
  准确称取0.15g样品（精确至0.0001g），放于水解管中，在水解管内加入12mol/L盐酸10~15mL,含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，再加入新蒸馏的苯酚3~4滴，然后充入纯氮气，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖，将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解6小时后，取出冷却。打开水解管，将水解溶液混匀，过滤至100mL(V1)容量瓶中，用蒸馏水反复冲洗漏斗，并定容至刻度。吸取一定量的水解液（视水解液中L（-）-羟脯氨酸的含量而定）于100mL三角瓶中，用10mol/L氢氧化钠溶液调pH为8±0.2，定容至100mL容量瓶中，摇匀备用。
3.1.4.3样品的测定
3.1.4.4验证结果
表2 乳品中L（-）-羟脯氨酸的工作曲线回归方程和线性相关系数﹑检测线
化合物    线性回归方程（Y=a+bx）    线性相关系数（r）    检出限
(g/100g)
L（-）-羟脯氨酸    Y=22.837a-0.1418    0.9992    0.01
表3乳品中L（-）-羟脯氨酸加标回收率数据（n=6）
样品    添加浓度
（μg/mL）    加入量
（μg）    检出量
（μg）    加标回收率
%
1    500    150    154.5    103.0
2    500    150    157.4    104.9
3    500    250    239.5    95.8
4    500    250    247.2    98.9
5    500    500    500.5    100.1
6    500    500    500    98.7
3.2液质
只有文献报道：高效液相色谱-质谱法联用测定胶原蛋白中的羟脯氨酸