主题:【讨论】如何终止酶促反应?你是怎么做的 ?

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dong3626
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最近,在做一个工艺实验:主要是利用鲜叶中的多酚氧化酶酶促氧化生产茶色素。
中间需要在线取样分析含量变化。
但是因为溶液里面残存有酶液,如果不将酶失活或者处理的话,反应还会继续,那如何终止酶反应呢?

目前我们的做法是:
1. 取出后,用普通滤纸过滤,放置零下20度冰箱中保存,直至开始分析。
2. 取出,加入有机溶剂,如乙醇或者乙腈,将反应终止,分析!

有个小问题:在1中,用滤纸过滤,感觉酶一般比较大,可以被截留?不知道是不是这样呢?
大家还有什么好 的办法没有??
推荐答案:It is me!回复于2009/07/24


茶叶里可能你需要研究的是多酚氧化酶,其实里面有很多很多的酶的。

如果有机试剂消耗量比较大的话,你可以添加高浓度的盐。例如盐酸胍,可能比有机试剂要便宜一些。
补充答案:

〓疯子哥〓回复于2009/07/23

酶应该留在滤纸之上的吧~我以前用过好象是在上面的~不知道其他的酶怎样

雾非雾回复于2009/07/23

个人觉得滤纸只能滤掉大的酶基质的颗粒,酶是应该具有溶解性的,滤不掉。低温只是能大大降低酶活性,尽可能使之处于停滞状态吧。

酶也是蛋白质,一般都是加热,重金属,盐析的方法使它变性吧,不过对于特定的酶可能要用有针对性的方法的。

家有宝贝儿回复于2009/07/23



普通滤纸过滤应该是无法达到过滤酶的作用,用普通滤纸过滤的作用可能是去除不溶物,至于放置于-20冰箱中,使酶的活性降低,反应暂时停止,之后可直接进行分析,这种做法一般用于检测酶反应的过程。
采用有机溶剂能起到使酶失活的作用,比较适合于后期采用反相检测的情况。

tianru的爸爸回复于2009/07/27

这个方法可靠些。

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〓疯子哥〓
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酶应该留在滤纸之上的吧~我以前用过好象是在上面的~不知道其他的酶怎样
It is me!
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原文由 dong3626 发表:
最近,在做一个工艺实验:主要是利用鲜叶中的多酚氧化酶酶促氧化生产茶色素。
中间需要在线取样分析含量变化。
但是因为溶液里面残存有酶液,如果不将酶失活或者处理的话,反应还会继续,那如何终止酶反应呢?

目前我们的做法是:
1. 取出后,用普通滤纸过滤,放置零下20度冰箱中保存,直至开始分析。
2. 取出,加入有机溶剂,如乙醇或者乙腈,将反应终止,分析!

有个小问题:在1中,用滤纸过滤,感觉酶一般比较大,可以被截留?不知道是不是这样呢?
大家还有什么好 的办法没有??


因为酶是具有生物活性的,所以没有绝对的方法适用于所有的酶活中止。通常用的比较多的是热变形,或者加高浓度的有机试剂或者盐去改变酶的结构,从而导致其失活。但是这些条件不是对所有的酶都具有作用的。

对于滤纸过滤,你们过滤的应该是鲜叶的碎片。普通滤纸是不可能截留住酶的,酶分子相对滤纸太小了。有可以依据分子量大小过滤蛋白的膜,称为超滤膜。
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原文由 madprodigy 发表:
酶应该留在滤纸之上的吧~我以前用过好象是在上面的~不知道其他的酶怎样


呵呵,普通滤纸是不行的。。。估计你以前做的时候肯定是存在一定的条件
dong3626
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应该冰冻也能终止反应吧?

一来是整个反应体系终止,二来,冰冻也对酶的结构也有破坏!

如果直接加入乙醇应该也有效果。。
我们主要就是茶碎鲜叶中的酶,也就是粗酶液。。。
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原文由 dong3626 发表:
应该冰冻也能终止反应吧?

一来是整个反应体系终止,二来,冰冻也对酶的结构也有破坏!

如果直接加入乙醇应该也有效果。。
我们主要就是茶碎鲜叶中的酶,也就是粗酶液。。。


冰冻应该称为暂停反应,因为冻成冰后不能像液态那样自由运动了,所以反应暂停,但是在复融后会继续反应的。

冰冻对于不同的酶的作用是不一样的,一般而言,对于活性蛋白冻融一次损失20%的活性。这是仅仅是一般而言的。
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我不知道你分析时候需要用多大的体积?另外,待分析物质会不会受热影响。如果可以的话我建议用热变性,对于绝大多数的酶都适合。
dong3626
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那根据我们的情况,只能是加入高浓度的有机溶剂来破坏酶活性了?

茶叶里面的酶主要就是多酚氧化酶。。。

加热的话,虽然可以终止反应,但是怕对里面的成分有影响。。

雾非雾
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个人觉得滤纸只能滤掉大的酶基质的颗粒,酶是应该具有溶解性的,滤不掉。低温只是能大大降低酶活性,尽可能使之处于停滞状态吧。

酶也是蛋白质,一般都是加热,重金属,盐析的方法使它变性吧,不过对于特定的酶可能要用有针对性的方法的。
家有宝贝儿
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原文由 dong3626 发表:
最近,在做一个工艺实验:主要是利用鲜叶中的多酚氧化酶酶促氧化生产茶色素。
中间需要在线取样分析含量变化。
但是因为溶液里面残存有酶液,如果不将酶失活或者处理的话,反应还会继续,那如何终止酶反应呢?

目前我们的做法是:
1. 取出后,用普通滤纸过滤,放置零下20度冰箱中保存,直至开始分析。
2. 取出,加入有机溶剂,如乙醇或者乙腈,将反应终止,分析!

有个小问题:在1中,用滤纸过滤,感觉酶一般比较大,可以被截留?不知道是不是这样呢?
大家还有什么好 的办法没有??


普通滤纸过滤应该是无法达到过滤酶的作用,用普通滤纸过滤的作用可能是去除不溶物,至于放置于-20冰箱中,使酶的活性降低,反应暂时停止,之后可直接进行分析,这种做法一般用于检测酶反应的过程。
采用有机溶剂能起到使酶失活的作用,比较适合于后期采用反相检测的情况。
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原文由 dong3626 发表:

茶叶里面的酶主要就是多酚氧化酶。。。



茶叶里可能你需要研究的是多酚氧化酶,其实里面有很多很多的酶的。

如果有机试剂消耗量比较大的话,你可以添加高浓度的盐。例如盐酸胍,可能比有机试剂要便宜一些。
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