紫外可见分光光度计(UV)

主题:【原创】【第二届网络原创作品大赛】分光光度计应用于口服液中的成分检测

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羽香
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结  论
1  预试验   
本实验所用药材有效成分符合药典规定。
2  提取工艺的研究
    在提取过程中采用3因素3水平的正交实验法,根据实验结果选出最优提取工艺:即8倍量溶剂,提取2次,每次1小时。
3  纯化工艺的研究
    采用醇沉浓度为75%,澄清度最好,从试验效率与成本综合考虑,进行一次醇沉。
4  矫味剂的考察   
通过对不同的白糖加入量的考察,认为每1mL溶液,加入白糖量为0.2g,可以矫苦味,味甜。
5  分析方法
采用紫外分光光度计对黄芩苷线性、精密度、稳定性、回收率考察,本试验定量分析稳定、可靠、实时控制方便、快速、准确度高。
成品中绿原酸、黄芩苷在最大波长处有重叠,用紫外分光光度计测含量受干扰,不准确,所以用高效液相色谱仪采用一点法测成品中绿原酸、黄芩苷的含量。
6  质量检查
在质量检查时针对样品的相对密度、pH值、澄清度、装量差异、有效成分含量测定进行实验考察,结果都基本符合要求。以黄芩苷、绿原酸为对照品,对口服液样品中金银花、黄芩进行薄层色谱定性鉴别,检测到黄芩苷、绿原酸。用加速试验考察药物稳定性,药物在60℃、80℃时,10天内不稳定,在40℃以下10天内稳定。
总之,经过对双黄连口服液的制备工艺和质量检查的研究,优选出较为合理的制备工艺,建立了准确可靠、重现性好的质量检查方法。
羽香
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原文由 shenyan1981 发表:
3.9 矫味剂-白糖加入量的考察结果与讨论
取样品液10mL适量3份,置于三个50mL烧杯中,向其中依次加入白糖1g、2g、3g,考察结果如下表19。
    表19  白糖加入量的考察 见附件8
从上表可见,加入白糖量不同,有口感与澄清度的不同。比较以上三种加入量,以加白糖2g为佳,即白糖的浓度为0.2g/mL,味甜,微苦,而且无混浊,澄清。
白糖的加入量主要从主、客观分析。主观方面,不同人的味蕾对味觉的感受不同,加入的量干扰味蕾,而矫味;客观方面口服液中金银花、黄芩、连翘都有苦味。所以,加入白糖可矫苦味。取样品液为50mL时,加入白糖10g。
3.10 成品制备
按上面所述方法制备三批,进行质量检查。
3.11  双黄连口服液的质量检查
3.11.1  性状
本品为棕红色的澄清液体;味甜,微苦。
从这个结果可以看出,采用的提取、纯化工艺的合理。
3.11.2  鉴别
采用薄层色谱法,对处方中绿原酸、黄芩苷进行定性鉴别。
(1)黄芩苷的定性鉴别结果
取样品溶液1mL,加75%乙醇5mL,摇匀,作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品,加入75%乙醇制成每1mL含0.1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验,吸取上述三种溶液各1μL~2μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置于紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中,黄芩在与对照品色谱的相应位置上,显示相同颜色的荧光斑点。
(2)绿原酸的定性鉴别结果
取样品溶液1mL,加75%乙醇5mL,摇匀,作为供试品溶液。另取绿原酸对照品,加入75%乙醇制成每1mL含0.1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验,吸取上述三种溶液各1μL~2μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置于紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中,金银花在与对照品色谱的相应位置上,显示相同颜色的荧光斑点。
由于试验时间仓促,没有对展开剂进行考察,没有进行选择较好的展开剂,斑点没有很好地展开,但试验现象仍然出现相同颜色的荧光斑点。出现这个结果也可能是铺板前硅胶气泡没排净,所铺板有小凹坑,所以实验中要考虑相关的影响因素,以致排除它们,才能达到好的实验结果。
鉴别结果说明,黄芩与金银花存在于药味中,它们的主要药效成分就是黄芩苷、绿原酸。
3.11.3  检查
(1)相对密度
取三个成品,测其密度,再取平均值。结果见表20。
  表20  成品的密度  见附件8
认为该双黄连口服液的相对密度为1.13,不低于1.12(中国药典2000年版一部附录),所以,其相对密度符合标准。
(2)pH值
取三批成品,测其pH值,再取平均值。结果见表21。  见附件8
从上表结果看,认为该双黄连口服液的pH值为6.5,介于5.0~7.0,符合标准。
(3)澄清度检查
    无白点,无絮沉淀,澄清度良好。
(4)装量差异
  表22  装量差异  见附件8
结果表明,装量符合规定,装量差异不显著。

(5)有效成分含量测定
取成品5支,高效液相测定有效成分含量,结果见表23。
  表23  有效成分含量测定  见附件8
(6)加速试验结果
  表24  加速试验考察表    见附件8
从上表的结果看,药物在60℃、80℃时,10天内不稳定,在40℃以下10天内稳定。                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                     








附件8
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夕阳
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首先我声明:我不懂药理。但是从楼主这篇稿件不难看出,无论是从涉及的层面,还是逻辑性,严谨性,楼主的确投入了很大的心血和精力,因此我们应该表示感谢。不过反复阅罢,有几点看法欲与楼主切磋:
(1)稿件的题目是“分光光度计应用于口服液中的成分检测”,可是口服液仅仅涉及“双黄连口服液”一种,并且被检测的成分也仅有黄芩苷(甙?)一种。让人感觉题目大于内容了。
(2)整篇内容涵盖很广:
1 引言,
1.1 双黄连口服液的药效作用,
1.1.1.小儿上呼吸道感染方面的应用,
1.2 双黄连口服液的不良作用
1.3 提取及纯化工艺,
1.4 现状,
2.2 分析方法的建立,
2.2.1 紫外分光光度计定量分析
2.2.2 高效液相色谱定量分析,
2.3 制备方法,
2.3.3 纯化工艺,
2.3.4 矫味剂-白糖加入量的考察,
2.3.5 口服液的制备,
2.3.6 双黄连口服液的质量检查,
3 结果与讨论。

从中不难看出,真正涉及检测的内容篇幅过少,仅有第2章节(这其中还包括分光和液相两种手段)和第3章(未见讨论内容)。这与利用分光光度计作为检测手段这一中心内容偏离太远了些。
(3)如果我妄加猜测的话,其实这是楼主在研究中药双黄连口服液方面的一篇非常不错的专著。而利用分光作为一种检测手段,只不过是这篇论文中的一个插曲而已。
(4)如果检测对象还是双黄连口服液,被检测成分还是黄芩苷(甙?),检测手段还是分光,我想知道的是:黄芩苷对于口服液的影响在哪里?是纯度还是含量?关于双黄连口服液,国家药典有检测标准和手段吗?利用分光光度计检测的特点是什么?它与液相色谱检测手段的优势在哪里?我想楼主如果能在上述范围内详细阐述就与主题吻合了。
最后说明,以上只是我个人的愚见,有不妥之处请楼主见谅和指正!
羽香
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首先,做这个双黄连口服液从制备到含量测定,再到成品检查,这个课题研究由两人完成。双黄连口服液中有两个主要成分:黄芩苷和绿原酸。我主要做的是黄芩苷的提取。
因为黄芩苷与绿原酸在最大吸收波长处有重叠,考虑到用紫外分光光度计测定绿原酸与黄芩苷的吸光度会有干扰,而且药典实验方案是黄芩单独煎煮,金银花、连翘合煎,可能因为黄芩苷与绿原酸互相发生化学反应,所以,本试验参考药典的方法,黄芩苷与绿原酸单独煎煮,这样黄芩苷与绿原酸在最大吸收波长处互不影响。对黄芩苷的单独提取与纯化工艺,用紫外分光光度计测定黄芩苷的吸光度,实时控制方便、方法快速、简便、准确度较高,而且不会受到绿原酸的干扰。
采用紫外分光光度计对黄芩苷线性、精密度、稳定性、回收率考察,本试验定量分析稳定、可靠、实时控制方便、快速、准确度高。


成品中绿原酸、黄芩苷在最大波长处有重叠,用紫外分光光度计测含量受干扰,不准确,所以用高效液相色谱仪采用一点法测定成品中绿原酸、黄芩苷的含量。不得已对成品中黄芩苷与绿原酸采用高效液相色谱的定量分析。
羽香
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稿件的题目是“分光光度计应用于口服液中的成分检测”,可是口服液仅仅涉及“双黄连口服液”一种,并且被检测的成分也仅有黄芩苷(甙?)一种。让人感觉题目大于内容了。
  文题定为分光光度计应用于口服液中的成分检测,的确有点题目大于内容。但是我的课题能用到分光光度计分析实属难得。现在药物的含量测定基本上都不用这个检测手段。


我的文题只是体现我所用检测手段的一部分。也就是说某些口服液中的成分检测可以用到分光光度计分析。

也许我的理解有些怪异!
夕阳
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原文由 shenyan1981 发表:
首先,做这个双黄连口服液从制备到含量测定,再到成品检查,这个课题研究由两人完成。双黄连口服液中有两个主要成分:黄芩苷和绿原酸。我主要做的是黄芩苷的提取。
因为黄芩苷与绿原酸在最大吸收波长处有重叠,考虑到用紫外分光光度计测定绿原酸与黄芩苷的吸光度会有干扰,而且药典实验方案是黄芩单独煎煮,金银花、连翘合煎,可能因为黄芩苷与绿原酸互相发生化学反应,所以,本试验参考药典的方法,黄芩苷与绿原酸单独煎煮,这样黄芩苷与绿原酸在最大吸收波长处互不影响。对黄芩苷的单独提取与纯化工艺,用紫外分光光度计测定黄芩苷的吸光度,实时控制方便、方法快速、简便、准确度较高,而且不会受到绿原酸的干扰。
采用紫外分光光度计对黄芩苷线性、精密度、稳定性、回收率考察,本试验定量分析稳定、可靠、实时控制方便、快速、准确度高。


成品中绿原酸、黄芩苷在最大波长处有重叠,用紫外分光光度计测含量受干扰,不准确,所以用高效液相色谱仪采用一点法测定成品中绿原酸、黄芩苷的含量。不得已对成品中黄芩苷与绿原酸采用高效液相色谱的定量分析。


谢谢楼主的答复。
看罢楼主的回帖,我的理解是否如下:
(1)双黄连口服液主要含两种成分:绿原酸和黄芩苷;并且波长均在276nm附近。
(2)楼主使用分光主要是测黄芩苷,但因“成品中绿原酸、黄芩苷在最大波长处有重叠,用紫外分光光度计测含量受干扰,不准确”,所以要“对黄芩苷的单独提取与纯化工艺,用紫外分光光度计测定黄芩苷的吸光度”。那么,这种测试手段仅仅是应用在生产工艺的在线检测了?而不是对成品的检测了?
(3)由于绿原酸和黄芩苷的相互干扰,所以对成品中的绿原酸和黄芩苷地含量检测仍然“用高效液相色谱仪采用一点法测定成品中绿原酸、黄芩苷的含量”了。
夕阳
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原文由 shenyan1981 发表:

我的文题只是体现我所用检测手段的一部分。也就是说某些口服液中的成分检测可以用到分光光度计分析。

也许我的理解有些怪异!


楼主的理解一点都不“怪异”。其实分光法是一种简便易行的测试手段。如果楼主能冲破常规的检测手段,而独树一帜,何乐而不为呢?
yfytap
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羽香
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47楼楼主,专家啊。因为是课题研究,还没有推广生产。这个回答先说到这里,以后一定补充完整。
夕阳
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原文由 shenyan1981 发表:
47楼楼主,专家啊。因为是课题研究,还没有推广生产。这个回答先说到这里,以后一定补充完整。


真诚地期待着楼主用分光光度计手段解决黄芩苷的检测课题。
同时给您个建议,不知绿原酸与黄芩苷的波长相差多少纳米?是否利用分光光度计的导数计算方法试试能否将两个峰分开?
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