主题:【luxw实验,我指导2】说说薄层色谱试验的过程和注意事项

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小卢
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这么长时间,续集终于写完剧本了,现在来欣赏吧!
资料回顾:
薄层色谱法:thin layer chromatography ,即TLC,是将供试品溶液点样于涂布有固定相的薄层板上,经展开、检视后所得的色谱图,与适宜的对照物按同法操作所得的色谱图进行比较。
用途:
药品鉴别、杂质检查
按照分离原理分类:
吸附色谱法、分配色谱法、分子排阻色谱法、胶束薄层色谱法等。本实验为吸附色谱法,即固定相为吸附剂的薄层色谱法。
题目:
以某个药品的鉴别或杂质检查为例,以实验前后的顺序为主线,从固定相种类、薄层板的制备、点样注意事项、展开注意事项、检视的方法等方面阐述本实验,发表自己的看法。
回答详细、独到者有双重奖励(版主加分、悬赏得分)!
推荐答案:羽香回复于2009/08/25
具体步骤: 
    ⑴制板(以硅胶板为例)
    选择合适的玻璃板(经常使用显微镜上的载玻片),依次用水和乙醇洗净,晾干。取适量薄层色谱用的硅胶,加适量蒸馏水调成糊。调制时慢慢搅拌,勿使产生气泡。将糊倒在玻璃板上,摇动摊平,晾干。使用前放入烘箱内,在105-115oC左右烘干40-50分钟。冷却后使用。

    ⑵点样
    将试样用最少量展开剂溶解,用毛细管蘸取试样溶液,在薄层板上点样。在样点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细线。薄层色谱板载样量有限,勿使点样量过多。
    ⑶展开
    吹干样点,竖直放入盛有展开剂的有盖展开瓶中。展开剂要接触到吸附剂下沿,但切勿接触到样点。盖上盖子,展开。待展开剂上行到一定高度(由试验确定适当的展开高度),取出薄层板,再画出展开剂的前沿线。
    ⑷显色,计算Rf值
    挥发干展开剂,选择合适的显色方法显色。量出展开剂和各组分的移动距离,计算各组分的相对移动值。
补充答案:

土老冒豆豆回复于2009/08/27

这里提到粘合剂CMC,我们的经验是先用溶剂浸泡过夜,第二天再加入硅胶当中混匀,因为CMC在水中不容易溶解,所以要浸泡过夜,使其充分溶散。

怪侠一点红回复于2009/08/29


大家讨论很积极,不论是自己的经验所得,还是从文献上学来的方法,都值得学习讨论和交流。

chemistryren回复于2009/08/29


一个帖就提到了好几个想说的问题:
1.跑板,应该跑到什么程度呢?
2.铺板,固定相的配制注意事项有哪些?
3.点样后的板处理,这应该有好几种情况,比如:105°烘后观察、晾干后喷显色剂、晾干在紫外下看荧光,当然还有上面提到的再提取(我还没遇到过呢)等等,这其中有什么要点吗?

跑板一般展开剂跑到板子上端就可以结束了。铺板前的硅胶配制是关键。。。要充分搅拌均匀,不能出现结块的硅胶。铺的时候要均匀,每块板子铺的硅胶量应接近。再提取没什么特别的,刻下来后装到小烧瓶里,在磁力搅拌机上用乙酸乙酯提取。当然这是我做的实验。。别人实验的提取就不一样了。

老多_小多回复于2009/08/25


应该说自己的经验


有道理!来一段吧,期待中!

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土老冒豆豆
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点样时一定要注意,斑点不能点太大,点了一点就赶紧收手,然后吹干或者用加热装置烘干斑点继续点。
但我犯过这样的笑话啊,点对照的时候,点了一点,吹干后,一点痕迹都看不出来,我左看右看上看下看反面再看还是不确定刚才那点点哪去了,只好犹豫着再加一点,结果展开显色后就发现我点了一个葫芦状斑点出来。
大家吸取教训啊
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Last edit by 土老冒豆豆
小卢
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原文由 土老冒豆豆 发表:
点样时一定要注意,斑点不能点太大,点了一点就赶紧收手,然后吹干或者用加热装置烘干斑点继续点。
但我犯过这样的笑话啊,点对照的时候,点了一点,吹干后,一点痕迹都看不出来,我左看右看上看下看反面再看还是不确定刚才那点点哪去了,只好犹豫着再加一点,结果展开显色后就发现我点了一个葫芦状斑点出来。
大家吸取教训啊

有身临其境的感觉!
在点样方面,我们大部分点的是圆点。它的漂移很大,但找到圆心,比较位置,做鉴别时一点问题都没有的。
我做过薄层法计算含量,仪器厂家推荐了个方形点,是用自动点样器点上去的,方方正正很好看。薄层扫描仪扫描起来也很方便,不用担心点偏移设定的间距。
土老冒豆豆
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对,我也用过自动点样器,能选择点正方还是长方还是圆形,果然省力。但我没有想到方形的比圆形的优势是在这个上。
羽香
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1、铺板时一定要铺匀,特别是边、角部分,晾干时要放在平整的地方。

2、点样时点要细,直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上,浓度不可过大,以免出现拖尾、混杂现象。

3、展开用的烧杯要洗净烘干,放入板之前,要先加展开剂,盖上表面皿,让烧杯内形成一定的蒸气压。点样的一端要浸入展开剂0.5cm以上,但展开剂不可没过样品原点。当展开剂上升到距上端0.5-1cm时要及时将板取出,用铅笔标示出展开剂前沿的位置。


上文提到的烧杯应该就是展开槽吧?不然,用烧杯的话,应该不是很好控制!

羽香
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(1)先用铅笔在距薄层板一端1 cm处轻轻划一横线作为起始线,然后用毛细管吸取样品,在起始线上小心点样,斑点直径一般不超过2 mm。
(2)若样品溶液太稀,可重复点样,但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样,以防样点过大,造成拖尾、扩散等现象,而影响分离效果。
(3)若在同一板上点几个样,样点间距离应为1—1.5 cm。
(4)点样要轻,不可刺破薄层。
在薄层色谱中,样品的用量对物质的分离效果有很大影响,所需样品的量与显色剂的灵敏度、吸附剂的种类、薄层的厚度均有关系。样品太少,斑点不清楚,难以观察,但样品量太多时往往出现斑点太大或拖尾现象,以至不易分开。
羽香
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1、薄层板的制备应注意两点
⑴ 载玻片应干净且不被手污染
⑵ 吸附剂在玻片上应均匀平整。
2、点样与展开应按要求进行
⑴ 点样不能戳破薄层板面,各样点间距1-1.5 cm,样点直径应不超过2 mm;
⑵ 展开时,不要让展开剂前沿上升至底线。否则,无法确定展开剂上升高度,即无法求得Rf值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。
3、薄层色谱的展开,需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸气迅速达到平衡,可在展开槽内衬一滤纸。

这里是展开槽了!总结的很仔细!
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羽香
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    ⑴制板(以硅胶板为例)
    选择合适的玻璃板(经常使用显微镜上的载玻片),依次用水和乙醇洗净,晾干。取适量薄层色谱用的硅胶,加适量蒸馏水调成糊。调制时慢慢搅拌,勿使产生气泡。将糊倒在玻璃板上,摇动摊平,晾干。使用前放入烘箱内,在105-115oC左右烘干40-50分钟。冷却后使用。

    ⑵点样
    将试样用最少量展开剂溶解,用毛细管蘸取试样溶液,在薄层板上点样。在样点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细线。薄层色谱板载样量有限,勿使点样量过多。
    ⑶展开
    吹干样点,竖直放入盛有展开剂的有盖展开瓶中。展开剂要接触到吸附剂下沿,但切勿接触到样点。盖上盖子,展开。待展开剂上行到一定高度(由试验确定适当的展开高度),取出薄层板,再画出展开剂的前沿线。
    ⑷显色,计算Rf值
    挥发干展开剂,选择合适的显色方法显色。量出展开剂和各组分的移动距离,计算各组分的相对移动值。
老多_小多
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原文由 shenyan1981 发表:
1、铺板时一定要铺匀,特别是边、角部分,晾干时要放在平整的地方。

2、点样时点要细,直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上,浓度不可过大,以免出现拖尾、混杂现象。

3、展开用的烧杯要洗净烘干,放入板之前,要先加展开剂,盖上表面皿,让烧杯内形成一定的蒸气压。点样的一端要浸入展开剂0.5cm以上,但展开剂不可没过样品原点。当展开剂上升到距上端0.5-1cm时要及时将板取出,用铅笔标示出展开剂前沿的位置。


应该说自己的经验


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原文由 shenyan1981 发表:
1、薄层板的制备应注意两点
⑴ 载玻片应干净且不被手污染
⑵ 吸附剂在玻片上应均匀平整。
2、点样与展开应按要求进行
⑴ 点样不能戳破薄层板面,各样点间距1-1.5 cm,样点直径应不超过2 mm;
⑵ 展开时,不要让展开剂前沿上升至底线。否则,无法确定展开剂上升高度,即无法求得Rf值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。
3、薄层色谱的展开,需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸气迅速达到平衡,可在展开槽内衬一滤纸。

这里是展开槽了!总结的很仔细!


在上面提到在展开槽中放滤纸,大家知道是问什么?怎么放吗?
〓猪哥哥〓
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原文由 luxw 发表:
原文由 shenyan1981 发表:
1、薄层板的制备应注意两点
⑴ 载玻片应干净且不被手污染
⑵ 吸附剂在玻片上应均匀平整。
2、点样与展开应按要求进行
⑴ 点样不能戳破薄层板面,各样点间距1-1.5 cm,样点直径应不超过2 mm;
⑵ 展开时,不要让展开剂前沿上升至底线。否则,无法确定展开剂上升高度,即无法求得Rf值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。
3、薄层色谱的展开,需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸气迅速达到平衡,可在展开槽内衬一滤纸。

这里是展开槽了!总结的很仔细!


在上面提到在展开槽中放滤纸,大家知道是问什么?怎么放吗?


一般裁剪成方形,一端浸入在展开集中,使展开剂沿着滤纸上升,快速达到溶剂平衡饱和。

点成方状的非常好看,尤其是在荧光下。但并不是所有的都适合点方状。
该帖子作者被版主 luxw2积分, 2经验,加分理由:同感啊!
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