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毛细管电泳（CE）
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主题：【求助】请教新毛细管活化方法及其目的？

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nkmacromer
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发表于：2009/08/25 20:10:16 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
本人是毛细管的新手，近期用以下方式活化毛细管（河北永年），甲醇15min，1M HCl 15min,1M NaOH 60min ,0.1M NaOH 120min, 在0.1 NaOH中过夜。第二天0.1M NaOH 15min ，水 15min ，运行缓冲液 30min .然后开始运行测试样品。经常遇到不出峰，或者出峰但走了几个样品后，就不行了。特地来请教各位毛细管电泳的高手，介绍一下你们的活化方式，帮我看看我的问题出在哪里，以及各步骤的活化目的。万分感谢！！！
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2009/8/25 23:30:21 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般活化及冲洗的的步骤：
甲醇5-10分钟（目的：洗去毛细管在制作过程中带来的矿物油和脂类）
0.1M NaOH 15-30 分钟（目的：平滑毛细管的内表面；活化硅羟基。这一步骤中如果使用1M NaOH ,则缩短此步的冲洗时间5分钟就够了）
水，缓冲液各5-10分钟。（目的：水洗去NaOH,缓冲液平衡毛细管）

你用的活化中，NaOH冲洗的时间太长，而且根本没有必要还保存在NaOH中过夜，NaOH不是冲洗得越多越好的，它是会腐蚀毛细管，降低毛细管的寿命的。当然你不出峰的原因也可能还有其他原因。但是这种活化的方法肯定是不可以的。

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2009/8/26 7:57:19 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一楼说的很有道理，先用甲醇，然后盐酸，氢氧化钠1M，氢氧化钠0.1M，最好用0.1氢氧化钠冲洗到基线比较平稳，然后再用水冲洗，不应该放置过夜！
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2009/8/26 7:59:48 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
第一点是除去一些生产过程中引入的杂质。
第二点是使硅氧键解离，生成硅羟基，在缓冲溶液里面硅羟基可以生成双电层，是产生毛细管电泳的驱动力电渗流的原因，从而达到使部分带电性差异物质更好的分离，即引入分离的因素。
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Last edit by sunpengwjh
i_am_ling
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2009/9/2 18:35:21 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主问题解决了么？
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小雨哥
zhchyu
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2009/9/8 10:55:59 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我现在做的时候主要就是先用甲醇冲洗，再用1M的氢氧化钠冲30分钟，然后用0.1M的氢氧化钠冲至基线平稳后再用水冲，再用缓冲液冲，就可以了。
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小冬1106
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2014/8/16 23:55:12 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 chx229(chx229) 发表:
一般活化及冲洗的的步骤：
甲醇5-10分钟（目的：洗去毛细管在制作过程中带来的矿物油和脂类）
0.1M NaOH 15-30 分钟（目的：平滑毛细管的内表面；活化硅羟基。这一步骤中如果使用1M NaOH ,则缩短此步的冲洗时间5分钟就够了）
水，缓冲液各5-10分钟。（目的：水洗去NaOH,缓冲液平衡毛细管）

你用的活化中，NaOH冲洗的时间太长，而且根本没有必要还保存在NaOH中过夜，NaOH不是冲洗得越多越好的，它是会腐蚀毛细管，降低毛细管的寿命的。当然你不出峰的原因也可能还有其他原因。但是这种活化的方法肯定是不可以的。



您好，我想问一下这个冲洗活化柱子需要压力吗？要多大的？看到有的说20psi，换成mbar那是很大的？可以吗？
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小冬1106
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2014/8/17 9:18:36 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:

一楼说的很有道理，先用甲醇，然后盐酸，氢氧化钠1M，氢氧化钠0.1M，最好用0.1氢氧化钠冲洗到基线比较平稳，然后再用水冲洗，不应该放置过夜！


您好，我想请问一下，这个活化毛细管时需要加电压吗？需要压力冲吗？还是直接在软件上选flush？谢谢
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ericwong
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2014/8/18 10:49:14 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
活化的时候是用压力冲，不加电压
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nini2006
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2014/8/18 16:59:44 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 小冬1106(v2785634) 发表:
原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:

一楼说的很有道理，先用甲醇，然后盐酸，氢氧化钠1M，氢氧化钠0.1M，最好用0.1氢氧化钠冲洗到基线比较平稳，然后再用水冲洗，不应该放置过夜！


您好，我想请问一下，这个活化毛细管时需要加电压吗？需要压力冲吗？还是直接在软件上选flush？谢谢
只要溶液能进去毛细管里，你想怎么来就怎么来。。。。
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nini2006
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2014/8/18 17:00:19 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 小冬1106(v2785634) 发表:
原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:

一楼说的很有道理，先用甲醇，然后盐酸，氢氧化钠1M，氢氧化钠0.1M，最好用0.1氢氧化钠冲洗到基线比较平稳，然后再用水冲洗，不应该放置过夜！


您好，我想请问一下，这个活化毛细管时需要加电压吗？需要压力冲吗？还是直接在软件上选flush？谢谢
只要溶液能进去毛细管里，你想怎么来就怎么来。。。。
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