主题：【第二届网络原创作品大赛】解析外标两点对数方程计算黄芪药材含量

前言：本篇是以黄芪含量测定的方法为例来介绍两点对数方程的应用，有关安捷伦1100的操作方法和蒸发光检测器的知识大家可以在本网和回帖中找到，如有疑问我们共同探讨。并在此感谢大家对文章的建议，也使我学到了很多知识，谢谢大家！

              解析外标两点对数方程计算黄芪药材含量

方 法：  照高效液相色谱法，ODS柱，以乙腈-水（32：68）为流动相，流速1ml/min，经蒸发光检测器检测，用外标两点对数方程计算黄芪药材中黄芪甲苷的含量。
仪 器：  安捷伦1100型液相色谱仪、蒸发光检测器（ELSD）、ODS柱（4.6um*5mm*200mm）
供试品： 黄芪药材（检测成分：黄芪甲苷）
关键词： 高效液相法、蒸发光检测器、黄芪甲苷、粉碎、提取物、外标两点对数方程
正 文：
前处理：
取约20g的黄芪药材放置于小型粉碎机内，粉碎后，盛装在密闭的容器中待用。
供试品制备：
取黄芪药材粉末两份，Ⅰ.4.0037g；Ⅱ.4.0022g。分别置索氏提取器中，加甲醇40ml，浸泡过夜（大于8小时）。第二天，加甲醇适量，加热回流4小时，提取液浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇（制法：把水加入正丁醇中至饱和）振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液；用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷；通过D101型大孔吸附树脂柱(备注：自己装填)，并以水50ml洗脱，弃去水液；再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液；继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干；用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
简单讲，即把黄芪药材最后提取物（黄芪甲苷）溶解到5ml甲醇中。
对照品制备：
称取黄芪甲苷对照品（中检所购入）0.0512g至100ml容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，摇匀，即得。
测定：
系统平衡后，精密吸取对照品溶液10ul进样，得色谱峰面积Ⅰ.259457 ；进样20ul，得色谱峰面积Ⅱ.523039。供试品溶液进样20ul，两针，色谱峰面积为：
Ⅰ.909836，Ⅱ. 902925 。根据对照品峰面积和进样量，以外标两点对数方程计算供试品含量。
两点对数方程定义：
是利用两点的对数值呈线性关系求解二元一次方程y=ax+b。
本题是利用对照品溶液两针进样量的对数值和所得峰面积的对数值呈线性的关系，把两组数据带入方程y=ax+b中，求得a和b，即求解了该方程式。然后带入供试品峰面积的对数值，求得供试品进样量的对数值，对其求反对数得供试品进样量（黄芪甲苷的量）。方程中x、y值均为进样量和峰面积取对数（lg）后的数值。
简单讲，就是通过对照品溶液两针的进样量和峰面积（均取对数lg）求解方程式后，把供试品峰面积（取对数lg）带入方程式求得供试品的进样量。
数据处理：
根据外标两点对数方程，应先计算得到方程式中的x、y值，才能求解此方程式。即取对照品进样量的对数值为x，取对照品峰面积对数值为y，计算结果如下：
---------对照品-----------Ⅰ--------------------------Ⅱ
---------进样量：---0.0512g×10ul（5.12ug）-----0.0512g×20ul（10.24ug）
进样量取lg，得x：--------0.7093 --------------------1.0103           
-----色谱峰面积：--------259457---------------------523039
峰面积取lg，得y：--------5.4141---------------------5.7185           
方程式求解：
根据“数据处理”中求得的x、y值，通过Excel图表中的XY散点图，以（0.7093，5.4141）、(1.0103, 5.7185)两点，求得方程如下：

供试品进样量求解：
取供试品色谱峰面积的对数值，得y，带入已求得的方程式y=1.0112x+4.6969，求得x，如下：
---------供试品------------Ⅰ----------------------Ⅱ       
---------称样量：--------4.0037g -----------------4.0022g       
-----色谱峰面积：--------909836-------------------902925
峰面积取lg，得y：--------5.9590-------------------5.9557             
通过方程，求得x：--------1.2481-------------------1.2448
根据lg(进样量)=x，求x（1.2481、1.2448）的反对数，得供试品进样量:Ⅰ.17.7052ug 、Ⅱ.17.5711ug（黄芪甲苷）
含量计算：
根据供试品称样量、样品的稀释倍数5ml及20ul进样量中黄芪甲苷的量，求得：
供试品Ⅰ含量：（17.7052ug×5ml/4.0037g/20ul）×100%=0.1106%
供试品Ⅱ含量：（17.5711ug×5ml/4.0022g/20ul）×100%=0.1098%
平均值为：（0.1106%+0.1098%）/ 2 = 0.11%
结  果：
该批黄芪药材中含黄芪甲苷的量为0.11%。

数据处理Excel表：
见附件：黄芪含量测定数据处理全过程

参考文献：
1.《中国药典》2005版一部
2.《高效液相色谱法及其在药物分析中的应用》（中华康网）
3.《你了解蒸发光检测器吗？》（仪器信息网）
（全文完，请大家指导！）
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蒸发光检测器知识：
一.ELSD检测步骤：
1）雾化：在雾化器中，洗脱液通过1个针孔与氮气（也可以用空气）混合，形成均匀的雾状液滴。
2）流动相蒸发：液滴通过加热的漂移管时，流动相被蒸发，样品组分形成气溶胶，进人检测室。
3）检测：在检测室内，用激光来照射气溶胶，产生散射，测定散射光强，记录散射光强度随时间的变化关系，就得到了色谱图。

二.ELSD检测原理：
气溶胶受固定光强的激光照射后，待测组分的质量(m）和散射光强度(I)有以下的关系：
I=Kmb
lgI=blgm+lgK
式中K和b为与蒸发室温度和流动相性质有关的常数。上式说明散射光的对数响应值与组分的质量的对数成线性关系。