主题:【第二届网络大赛参赛作品】···重磅出击,再谈“基质效应”··讨论升级,欢迎参与···

浏览0 回复202 电梯直达
dickwang2008
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原文由 MandyCheng(gtyt1324) 发表:
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Ion suppression for LC-MS

Ion suppression for LC-MSMS.doc


首先感谢Mandy版友上传这篇文献,学习之后,受益匪浅!

个人认为,文献中讲的离子抑制,它并没有分内源性和外源性的离子抑制,而是指内源性的物质和外源性的物质产生的离子抑制。同样的,对于干扰也是分为内源性和外源性物质引起的干扰。而对于离子抑制和干扰,这两者既有不同之处,也有相互联系的地方。不同之处在于,干扰主要用回收率是评价,干扰的大小由回收率的多少来体现,即使回收率低,但是只要满足我们测定的要求,那么这个方法是接受的;而离子抑制主要通过LLOQ或者质控样品来评价,跟干扰不同的是,如果离子抑制增强,那么我们的方法是不能接受的,包括线性、准确度和精密度等都是不满足接受标准的。

他们的联系在于干扰也能引起离子抑制,而离子抑制也是一种干扰。


不知道各位版友对这个有什么看法?欢迎交流!!


LZ您好,我有以下问题:
1. 按照您的意思,标准和非同位素标记的内标是属于能产生离子抑制的外源性物质,而同位素标记的内标则属于内源性物质?不知我的理解是否正确?但是在Cleveland Clinic的程序中,离子抑制部分的内源性物质和外源性物质则同时提到了非同位素标记的内标,在我们的日常工作中到底需要怎样做才是最正确的验证离子抑制的方法呢?是用您说的LLOQ或者质控样品来评价就足够了吗?
2. 如果使用柱后流动注射法来观察信号的时候,观察的应该是TIC图吗?
3. 在观察或验证离子干扰的时候,也不一定非要用回收率来评价吧?比如,检测睾丸酮时,因为DHEA,Epitestosterone与待测物具有相似的分子量,都属于可能干扰的物质,但只要确保色谱分离就行了吧?
4. 请问LZ有没有相关介绍外源性和内源性概念的资料?
因为刚接触液质不久,可能很多问题都让您见笑了,见谅!


针对你的问题,我一一回复,如有不同意见,请回复:
1. 对于Internal standard,不管是同位素标记的还是未标记的,如果这个内标在所分析的生物基质中不存在,那么他就是外源性的。在附件中提到的干扰、离子抑制部分,也是限制了内源性的分析物后来讨论内标的。

在日常工作中,考察离子抑制目前使用的几种方法,我在前面的帖子中已有提及,而我们目前主要使用LLOQ来评价基质效应。因为基质效应对低浓度的影响一般来讲要大于高浓度的,如果低浓度的都能满足要求,对于高浓度来讲,一般没有问题。并且我们通过方法学确证试验,来保证方法的可行性和可靠性。

2. 使用柱后注射法,观察的应该是MRM(SRM)中各个离子对的信号强度。

3. 在考察干扰的时候,不一定使用回收率来评价。但是如你说讲,色谱分离是一种手段,但对于内源性的物质,其中会存在一些代谢物等干扰物质,而这些是你事先不清楚的,所以仍需要考察通道间的干扰,这这种情况下,要达到色谱分离就很难啦。

4.我们一般只考察内源性的物质干扰,而外源性的我们一般就是考察纯溶液的干扰。

我们需要的就是互相交流,将自己的想法讲出来,达到共同提高的目的。。
dickwang2008
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原文由 cranberry007(cranberry007) 发表:
ESI源的响应要比APCI源相对高,但APCI源的重现性要好很多
这可能也跟基质效应有很大的关系
.

ESI和APCI源的响应没有绝对的哪个高,这需要根据化合物的性质来确定。但对于大多数化合物,你讲的还是很适应的。
dickwang2008
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ESI源的响应要比APCI源相对高,但APCI源的重现性要好很多
这可能也跟基质效应有很大的关系
.

ESI和APCI源的响应没有绝对的哪个高,这需要根据化合物的性质来确定。但对于大多数化合物,你讲的还是很适应的。
MandyCheng
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哎,琢磨了几天,还是有些不太清楚,只能慢慢体会了。还想请问LZ的是,如果有权威文献报道且已经过多个实验室验证过的干扰实验,在我们自己的实验室开发和验证该方法的时候,还需要一一再去验证吗?
dickwang2008
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原文由 MandyCheng(gtyt1324) 发表:
哎,琢磨了几天,还是有些不太清楚,只能慢慢体会了。还想请问LZ的是,如果有权威文献报道且已经过多个实验室验证过的干扰实验,在我们自己的实验室开发和验证该方法的时候,还需要一一再去验证吗?


个人认为必须要进行验证。因为不同的仪器、不同的试剂所产生的干扰是不同,只有在方法确证时排除了,那么才能用这个方法去分析样品,从而得到准确的结果。
kmq
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原文由 dickwang2008(dickwang2008) 发表:
原文由 bongyi 发表:
一直想请教楼主个问题,像分析那些蛋白结合率较高的物质,如果采用沉蛋白的方法处理样本,会不会有一定比例的待测物质随蛋白一起被沉淀,一般情况下比例会有多少,同一物质这个比例会比较稳定吗?



个人认为待测物质不会随蛋白一起被沉淀,这是由蛋白沉淀的原理决定的。因为沉淀蛋白是利用沉淀试剂如甲醇、乙腈或者高氯酸等将蛋白变性,形成沉淀,而化合物会溶解到沉淀试剂中。这种方法可能会将一些内源性物质带入到沉淀试剂中,产生基质效应。


请问楼主蛋白沉淀还可以采取哪些试剂呢?
dickwang2008
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原文由 kmq(kmq) 发表:
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原文由 bongyi 发表:
一直想请教楼主个问题,像分析那些蛋白结合率较高的物质,如果采用沉蛋白的方法处理样本,会不会有一定比例的待测物质随蛋白一起被沉淀,一般情况下比例会有多少,同一物质这个比例会比较稳定吗?



个人认为待测物质不会随蛋白一起被沉淀,这是由蛋白沉淀的原理决定的。因为沉淀蛋白是利用沉淀试剂如甲醇、乙腈或者高氯酸等将蛋白变性,形成沉淀,而化合物会溶解到沉淀试剂中。这种方法可能会将一些内源性物质带入到沉淀试剂中,产生基质效应。


请问楼主蛋白沉淀还可以采取哪些试剂呢?


一般分为几类:有机试剂类。如甲醇、乙腈、丙酮;重金属盐类,如硫酸锌等;强酸类,如高氯酸等。
MandyCheng
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原文由 dickwang2008(dickwang2008) 发表:
原文由 MandyCheng(gtyt1324) 发表:
哎,琢磨了几天,还是有些不太清楚,只能慢慢体会了。还想请问LZ的是,如果有权威文献报道且已经过多个实验室验证过的干扰实验,在我们自己的实验室开发和验证该方法的时候,还需要一一再去验证吗?


个人认为必须要进行验证。因为不同的仪器、不同的试剂所产生的干扰是不同,只有在方法确证时排除了,那么才能用这个方法去分析样品,从而得到准确的结果。

明白,谢谢LZ!
speleers
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原文由 dickwang2008(dickwang2008) 发表:
【2】色谱条件的优化
基质效应的产生,是由于内源性物质与待测物一同流出色谱柱,从而产生竞争抑制引起的。优化色谱条件,改变内源性物质与待测物在色谱柱上的保留时间,使其流出的速度不同,从而进入质谱的时间不同,这样就可以去除或降低基质效应的影响。比如待测物易离子化,那么调节样品或溶液中的PH值,会对它的保留、选择性和灵敏度产生很大的影响。
请看下面两图,色谱条件优化前




色谱条件优化后,




从优化后的色谱图中,可以看出在4.2min左右有部分内源性物质的小峰出
现,这说明如果化合物在这时候被洗脱下来,那么内源性物质就会一同下来,同时进入离子源,从而产生基质效应。为了避免这个问题,我们优化了色谱条件,将洗脱程序变缓,使内源性物质和待测得化合物分开,这样就减小了基质效应。

看得见的干扰好解决,我想大多数看不见的干扰如何解决才是关键。
dickwang2008
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原文由 speleers(speleers) 发表:
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【2】色谱条件的优化
基质效应的产生,是由于内源性物质与待测物一同流出色谱柱,从而产生竞争抑制引起的。优化色谱条件,改变内源性物质与待测物在色谱柱上的保留时间,使其流出的速度不同,从而进入质谱的时间不同,这样就可以去除或降低基质效应的影响。比如待测物易离子化,那么调节样品或溶液中的PH值,会对它的保留、选择性和灵敏度产生很大的影响。
请看下面两图,色谱条件优化前




色谱条件优化后,




从优化后的色谱图中,可以看出在4.2min左右有部分内源性物质的小峰出
现,这说明如果化合物在这时候被洗脱下来,那么内源性物质就会一同下来,同时进入离子源,从而产生基质效应。为了避免这个问题,我们优化了色谱条件,将洗脱程序变缓,使内源性物质和待测得化合物分开,这样就减小了基质效应。

看得见的干扰好解决,我想大多数看不见的干扰如何解决才是关键。


这位版友所指的看得见的干扰指什么?看不见的干扰又指什么?
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