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主题：【已应助】【求助】孔雀石绿回收率如何提高

浏览0 回复22 电梯直达
qing2009
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发表于：2009/11/01 15:46:44 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家好，我现在正在做孔雀石绿HPLC检测的方法测定，开始用的是FDA 的方法，但是回收率比较低，在60%左右，我想提高一下，自己也试过改变那几种提取试剂的量，不过效果不是很好，请大家帮我看看，能不能给些建议，特别是那几种试剂决定了回收率。
以下是我的提取步骤：
样品5g
+ 5ml 醋酸胺缓冲液 + 2ml 0.25g/ml盐酸羟胺溶液 + 2 ml p-TSA
震荡
+25ml乙腈
震荡
+10 硅藻土
震荡 离心 上清液加入分液漏斗（内有50ml 水+2ml 二甘醇）
重复乙腈的提取，合并离心上清液
+25ml 二氯甲烷， 震荡，静止分层，取下层液
重复二氯甲烷提取， 合并下层液
旋转蒸发二氯甲烷层近干，用3ml 乙腈溶解，过离子交换柱，用5ml乙腈洗两次都加入离子交换柱，用 醋酸胺缓冲液 ：乙腈=1：1洗脱柱子
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2009/11/2 9:34:55 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
将本帖置顶，希望关注这方便的版友前来帮助解决一下。
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2009/11/2 10:54:41 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我前处理是用的GB/T 19857-2005液相部分的方法，加1.5 mL 20%的盐酸羟胺溶液、2.5 mL 1.0 mol/L的对-甲苯磺酸溶液、5.0 mL乙酸盐缓冲溶液，这3种加完后一定要先充分均质后再加入乙腈。如果缓冲液与乙腈同时加入会影响回收率。

你过的是什么离子交换柱的？是否在过柱时回收率损失掉了？我是浓缩完直接洗脱后上机。
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2009/11/2 10:56:10 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定
GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定
附件：
gbt19857—2005.pdf
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qing2009
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2009/11/2 11:38:50 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 新窦(capinter) 发表:
我前处理是用的GB/T 19857-2005液相部分的方法，加1.5 mL 20%的盐酸羟胺溶液、2.5 mL 1.0 mol/L的对-甲苯磺酸溶液、5.0 mL乙酸盐缓冲溶液，这3种加完后一定要先充分均质后再加入乙腈。如果缓冲液与乙腈同时加入会影响回收率。

你过的是什么离子交换柱的？是否在过柱时回收率损失掉了？我是浓缩完直接洗脱后上机。


首先谢谢您的帮助
我也是那三种加完后先充分混匀后再加入的乙腈。
我的交换柱是VARIAN的，用的是AL-N 和 LRC-RPS 两个柱子结合起来的，前一个用于除去油脂，后一个是离子交换柱。
我也考虑过柱子对回收率的影响，所以曾经直接用标准样过柱子，不过标准样是95%，我觉得有损失但是不大。

对了，有一个问题，你在用分液漏斗萃取时，有没有遇到过分层不明显的情况，有好多乳状物在界面上，每次我都嫌脏扔了，是不是有孔雀石绿残留在那里呢，请问你是怎样处理的？
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2009/11/2 12:15:53 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 qing2009(qing2009) 发表:
对了，有一个问题，你在用分液漏斗萃取时，有没有遇到过分层不明显的情况，有好多乳状物在界面上，每次我都嫌脏扔了，是不是有孔雀石绿残留在那里呢，请问你是怎样处理的？

我是做的水产品检测，没有发现不好分层的情况，萃取时震荡时间长一点，要充分震荡分层会比较好。
可以在各个步骤分别添加回收，试验一下回收率是在哪步损失掉的。
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qing2009
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2009/11/2 18:30:04 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
好的，实在不行我就分部添加回收。
另外，其实我也曾浓缩完就上机试过，浓缩完后将残留物溶解，微孔滤膜过滤后上机，但是回收率没有过柱子的好，请问您用的洗脱液是什么？
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2009/11/3 9:54:58 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 qing2009(qing2009) 发表:
好的，实在不行我就分部添加回收。
另外，其实我也曾浓缩完就上机试过，浓缩完后将残留物溶解，微孔滤膜过滤后上机，但是回收率没有过柱子的好，请问您用的洗脱液是什么？

洗脱液用的就是流动相（10mmol/L乙酸胺：乙腈＝30：70），直接过滤膜后上机回收率没有过柱的好问题应该出在二氯甲烷提取的那一步分层不好造成二氯甲烷与乙腈层杂质多。后面浓缩干后洗脱出来的应该是比较浑浊，可以试试用高速离心后再过微孔滤膜。
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hongys1019
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2009/11/3 20:48:42 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有时有乳化现象，最好分层时多静置一段时间。
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suodecheng
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2009/11/4 8:47:40 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有时有乳化现象,可以加点饱和氯化钠溶液。
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qing2009
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2009/11/4 16:54:35 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
非常感谢！！︿　︿
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