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液相色谱（LC）
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主题：【求助】请教下液相测定有机酸含量的问题

浏览0 回复7 电梯直达
ssilienty
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发表于：2009/11/06 22:17:29 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
苹果酸，C18柱，PKa1=3.4,pka2=5.13,我用了0.01mol/L,0.015mol/L,0.02mol/L磷酸二氢钾做缓冲盐水溶液，PH值都用磷酸调到2.7，用了磷酸盐水：甲醇=5：95，10：90，15:85的三种流动相，柱温25度，为什么苹果酸还是解离了呢？跑出来分不开的两三个峰。
 
      请问怎么调整下呢，另外，想请教下反向柱跑有机酸，加入缓冲盐或者酸做离子抑制剂时，有机相起什么作用，除了改变保留时间，对离子抑制有作用吗？我看文献上有人写的流动相直接就是0.01磷酸二氢钾的磷酸水溶液做流动相，请问不加有机相可以吗，加有机相有什么不良影响吗，会不会把C18柱跑废？

      谢谢~
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2009/11/7 9:37:48 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有机相的多少决定洗脱能力的大小，有机相一般不起离子抑制作用，但不同有有机相可能表现出不同的选择性，峰形，保留时间都可能发生变化，C18的流动相要求含量有机相5%以上，纯水相可能会跑废，可应用于纯水系统的专用色谱柱除外。
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ssilienty
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2009/11/7 10:02:48 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢，那么加入缓冲盐的量有计算的方法吗，我看到一个公式，但是里边有摩尔吸光系数
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制备色谱
tansong40116
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2009/11/7 19:31:53 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
采用HPLC法对葡萄酒酿造过程中的苹果酸、乳酸进行测定。色谱条件为:色谱柱SUPELCOSILTMLC-8(25cm×2.6mm;5μm)柱,流动相0.1%H3PO4,流速0.8mL/min,紫外检测波长214nm,检测器UV214nm×0.1AUFS。测定结果表明:标准曲线在0.02mg/mL～0.8mg/mL时线性良好,回收率为96.7%,相对标准误差为0.13%。
葡萄酒苹果酸—乳酸发酵HPLC分析方法的研究--《中国酿造》2006年01期
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有水有渝
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2009/11/8 10:11:15 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ssilienty(ssilienty) 发表:
谢谢，那么加入缓冲盐的量有计算的方法吗，我看到一个公式，但是里边有摩尔吸光系数

缓冲盐一般以mmol/L来表示，只要计算出所加入的缓冲盐的物质的量除以体积就是浓度了，一般不超过100mmol/L；摩尔吸光系数是表示一个物质的光谱吸收能力的强弱，摩尔吸光系数大的光谱吸收就强。
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397519967
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2009/11/8 10:16:34 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
又是高效液相，
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ssilienty
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2009/11/9 13:23:24 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
缓冲溶液的浓度缓冲溶液的浓度高低直接影响其缓冲容量的大小，影响酸在流动相中的存在形式及溶液的离子强度，从而影响色谱柱的分离效果。缓冲溶液浓度越高，酸的存在形式越稳定。但浓度不能过高，因为浓度增高时，离子强度也增大，对组分的分离不利，同时影响柱的寿命，增加了流动相的本底吸收，降低了测定的灵敏度。采用紫外检测器分析样品，色谱峰的最大值达到100mAu(吸光度A=0.1)时，分析结果已相当准确，按此值可求出醋酸在色谱柱中的最高浓度（此处公式不会打，直接截取图片）缓冲溶液的浓度应和此值相当。如果样品中有5个酸性组分，则缓冲溶液的浓度应该为15mmolL，由此可估计出缓冲溶液的浓度范围。其他酸可参照此法确定缓冲溶液的浓度。


这段话的意思是能根据要分离组分的性质，直接估算出要加入缓冲盐的浓度吗，看不太明白，这里说的比色皿厚度应该是液相用的检测器的比色皿厚度吧？摩尔吸光系数能有地方查的到吗


有机酸类化合物的反相高效液相色谱法的分离条件研究 赵景蝉等
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Last edit by ssilienty
jennyzhou525
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2012/7/11 15:57:24 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我做苹果酸也是出现两个峰，到底什么原因呢？流动相直接就是0.01磷酸二氢钾的磷酸水溶液做流动相，pH2.81,求解答
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