主题：【资料】兴奋剂类分析方法系列讲座(40讲 待续)

兴奋剂类分析方法系列讲座（21）-（2）《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》研究

3 《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》的主要内容

2005年10月在联合国教科文组织的第33次会议上正式通过《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》。

《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》（以下简称《公约》）全文除序言外包括43个条款，涉及《公约》的范围、本公约与《世界反兴奋剂条例》的关系、国家一级的反兴奋剂工作、国际合作、教育与培训、研究、《公约》实施情况的监督检查、公约的修正、最后条款7个部分。

3.1 《公约》适用的范围

这部分规定包括6条，其中第1条规定了《公约》的宗旨，主要是促进预防和反对在体育运动中使用兴奋剂，最终杜绝这一现象；第2条列述了《公约》中使用的一些词语的具体定义，根据该条款，大多数定义与《世界反兴奋剂条例》中的定义一致，是体育运动界普遍使用的，从而使《世界反兴奋剂条例》和《公约》中的定义尽可能保持一致，如果有相左之处，应以公约的条款为准；第3条概述了实现《公约》宗旨的手段，包括缔约国有义务鼓励开展各种形式的国际合作，特别是与世界反兴奋剂机构开展国际合作，并须确保为反对在体育运动中使用兴奋剂而采取的任何措施均应符合《世界反兴奋剂条例》的规定；第4条规定各缔约国应承诺，以《世界反兴奋剂条例》中确定的原则作为在国家和国际层面为实现《公约》目标而采取的措施的基础，同时把《世界反兴奋剂条例》和世界反兴奋剂机构的两项国际标准（即《兴奋剂检测实验室国际标准》和《兴奋剂检测国际标准》）列为《公约》的附录而不是作为《公约》的组成部分，因为它们主要与体育运动界有关而不适用于各国政府；第5条确认各缔约国可采用必要的措施同体育运动中使用兴奋剂的现象作斗争，包括立法、法规、政策或行政管理，因为打击使用兴奋剂现象的行动成功与否不是看过程而是看结果。

第6条确定了此项公约与其他国际文件之间的关系，本公约中的任何条款均不能影响缔约国因其加入的其它与本公约宗旨相一致的协议而享有的权利和承担的责任，但它们也不能影响其他缔约国根据本公约应享有的权利和承担的责任。该条规定借鉴的是《联合国海洋法公约》的条款，尽管它也指出相对于其他的与其内容不一致的文件而言，该公约的地位是最高的，但其保护的是根据其他公约所享有的权利和承担的责任。这个问题主要是针对欧盟理事会《反兴奋剂公约》的成员国的［9］。

3.2 国家一级的反兴奋剂工作

这部分规定共有6条，其中第7条旨在促使各缔约国通过国内协调来确保《公约》的实施，因为在缔约国内执行公约需要依靠许多有关的政府部门和非政府部门以及这些实体之间的合作协调；第8条要求缔约国采取行动限制获得和在体育运动中使用兴奋剂，但同时保证不得妨碍出于合法目的的使用；第9条吁请各缔约国针对运动员辅助人员违反反兴奋剂规则的行为采取措施，并鼓励相关组织也针对此类行为采取措施，因为缔约国或许可能对这些组织没有处罚权，故该条鼓励有处罚权的其他组织采取行动；第10条鼓励采取行动，解决与运动员服用营养补充品有关的问题，包括非故意违反行为，以及使用具有不明成分或成分说

明不清楚的产品对健康可能造成的危害；第11条吁请各缔约国，在其力所能及的范围内为兴奋剂控制计划提供资金，并对因违反反兴奋剂规则而被停赛的运动员和不遵守《条例》规定的组织实行经济制裁；第12条旨在确保毫无障碍地在任何地方对运动员实行兴奋剂控制。



3.3 国际合作

第13条至第18条的内容是涉及兴奋剂控制方面的国际合作问题的。第13条吁请每一个缔约国鼓励其管辖范围内的反兴奋剂组织、公共当局和体育运动组织与其他缔约国管辖范围内的相应机构开展合作；第14条是缔约国应对支持世界反兴奋剂机构在国际反兴奋剂方面开展的重要工作做出承诺；第15条是对第14条的补充，重申由公众当局和奥林匹克运动共同资助世界反兴奋剂机构的原则，其中“共同资助”一词来自《哥本哈根宣言》中第3条第2款的规定，只不过没有明确提出各自资助50%的规定；第16条就缔约国之间在兴奋剂控制方面开展国际合作的可能形式做出若干规定；第17条和18条规定设立了用于消除在

体育运动中使用兴奋剂现象的自愿基金，并概述了该基金的使用和管理。

3.4 教育与培训、研究

第19至23条鼓励对运动员、运动员辅助人员和一般体育运动参加者实行反兴奋剂教育和培训计划。根据第三次政府间会议做出的决定，第19条反映了向运动员和运动员辅助人员提供针对其特定运动需求的教育和培训计划的愿望。而第24至27条鼓励就反兴奋剂问题进行研究，并确定了这类研究的范围。

3.5 《公约》实施情况的监督检查

第28至32条涉及《公约》项下建立的监督机制，列述了缔约国大会的各项职能以及向缔约国大会提交国家报告的时间范围（宽松的监督机制）。第28条指出，缔约国大会为本公约的最高权力机构，原则上应每两年举行一次常会，每个缔约国在大会应有一票表决权。此外，第30条和第32条分别规定了缔约国大会和秘书处的职能，第31条则要求缔约国通过秘书处向缔约国大会提交有关其为遵守本公约的规定所采取措施的所有相关信息。

第29条规定邀请世界反兴奋剂机构作为缔约国大会的咨询机构，邀请国际奥林匹克委员会、国际残疾人奥林匹克委员会、欧洲委员会、政府间体育运动委员会（CIGEPS）作为观察员，此外缔约国大会也可以决定邀请其他相关组织作为观察员。由于缔约国大会的作用之一是决定如何实施公约的监督机制，而且也不知道哪些国家会签署公约，因此在公约中具体确定咨询机构是有些过早。世界反兴奋剂机构可能被认为是一个特殊的例外，因为其被看作是一个咨询机构而根本不用考虑哪些国家会签署公约［9］。

第33条规定了对《公约》进行修正的正常程序，而第34规定了对公约附件进行修正的具体程序，使世界反兴奋剂机构对作为《公约》附录的《禁用清单》或者《批准治疗用药豁免的标准》所作的修改都能够及时纳入《公约》的相应附件，以确保各国政府与体育运动界

适用同样的标准作为指导。

由于缔约国大会每两年举行一次，该条款允许或者在缔约国大会上或者经过书面程序来通过建议的修正案。除非有2／3的缔约国表示反对，否则建议的修正案被视为通过。这样，世界反兴奋剂机构对《禁用清单》或者《批准治疗用药豁免的标准》所作的修改可以及时纳入《公约》的附件。该条款反映了第三次政府间会议全会的辩论结果和做出的决定。

3.6 最后条款

第35至第43条为几项最后条款。在第三次政府间会议的全会上，特别强化了第35条（联邦制或非统一立宪制）的内容，使之与《教科文组织非物质文化遗产公约》的相应第35条和《教科文组织保护世界文化与自然遗产公约》第34条的内容保持一致。根据现有文本，现要求联邦政府不仅仅把《公约》条款通告各主管当局，而且要建议它们通过《公约》条款。

最后，第43条（保留意见）与第6条密切相连。第三次政府间会议的全会上，经过长时间的激烈辩论才就该条款的确切措辞达成一致意见。第43条通过禁止与《公约》的目标和宗旨不相符的保留意见，对第6条的规定予以强化。

兴奋剂类分析方法系列讲座（21）-（3）《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》研究

4 争议问题的解决

有关缔约国大会秘书处（第32条）和自愿基金（第17和18条）的规定，是就《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》的拟定工作召开第三次政府间会议之后唯一尚未解决的问题。既希望把《公约》的运作费用保持在最低水平，又力求提供充分的监督职能，需要在这两者之间找到适当的平衡。问题的核心在于拟采取的监督机制的范围。教科文组织秘书处已经同世界反兴奋剂机构明确了就此问题可能开展合作的领域，不过仍需在教科文组织内部设一个秘书处。最后草案第31条中规定了一种以双年度自行报告为基础的“宽松的”监督机制，只需一个小规模的秘书处协助该机制的运作。对于自愿基金问题，正如第17条所述，各会员国同意需要利用一项自愿基金在全球范围内制定和实施反兴奋剂计划。

然而，关于对《公约》秘书处的财政资助应来源于自愿基金还是教科文组织的正常预算（第32条第3段），“在起草的过程中分歧较大。一些代表担心教科文组织用于监督《公约》实施情况的费用需挪用本组织其他工作领域的资金，因此要求该秘书处全部使用自愿基金的资金。其他代表则认为，如果全部依靠自愿捐款来保证《公约》的实施，会带来不确定因素和缺乏前瞻性，而且《公约》的落实和执行应该具有同任何其他教科文组织公约一样的支持。为缔约国大会秘书处提供财政资助的问题，应由教科文组织大会在有关本组织总预算的讨论过程中审议《公约》时予以解决。

如果缔约国大会秘书处只能依靠自愿基金，那么资金就没有任何保障。在这种情况下，总干事将无法完成为缔约国大会提供秘书处的要求。总干事认为，制定《公约》却不能为其秘书处提供资助保障（如由正常预算提供资金），将会极大地削弱《公约》的宗旨。一项《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》之所以被视为必不可少，首先是基于下述事实：各国政府和体育运动界必须同心协力与使用兴奋剂现象作斗争，如果不相互配合和合作，任何部门都不能取得成功；体育运动界近几年来采取了强有力的行动，特别是世界反兴奋剂机构通过了《世界反兴奋剂条例》；体育运动界现期望各国政府通过一项《公约》以发挥其作用。毫无疑问，体育运动界将把一项没有秘书处的《公约》视为失败。这种情况会对整个反兴奋剂运动以及各国政府和体育运动界多年来在反对使用兴奋剂方面作出的巨大努力构成威胁。此外，如果教科文组织通过的一项公约仅靠来源于自愿捐助的资金来管理，会开一个非常危险的先例。它会有损于教科文组织作为多边独立机构的形象，因为这种机构应能够不依靠捐助者的捐款而履行其制订准则的职能［10］。

对于第43条规定的“保留意见”，《公约》初稿规定：“1989年11月16日的《反兴奋剂公约》缔约国均可声明，或在交存其批准书、接受书、赞同书（或加入书）时声明，在履行本公约时有可能不受本公约第Ⅲ和第V部分规定的约束。”这样规定的最初目的是考虑到

欧洲理事会《反兴奋剂公约》的缔约国在签署公约的时候更加简单一些，因为公约初稿中的许多条款可能会与欧洲理事会《反兴奋剂公约》的规定相同或者类似。不过，随着讨论的深入以及最终草案的形成，现行公约草案的内容与欧洲理事会《反兴奋剂公约》的规定有很大的差别，因此关于“保留意见”的规定也修改为如下条款，即“对与本公约的目标和宗旨不相符的保留意见，不得予以认可［11］。”



5 结语：

《公约》对世界体育运动的影响前瞻《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》是第一

个全球性的反对在体育运动中使用兴奋剂的公约，其通过将会对世界体育运动产生重要的影响。公约为各国政府提供了一个法律框架，以便在打击蔑视体育道德和社会价值的同时危及运动员健康的祸害的努力中进行国际协调。在这方面，公约表明在反对兴奋剂的过程中国际法是有影响力的，并且确保所有的政府都有法律上的义务来执行《世界反兴奋剂条例》，把体育运动与政府行为结合在一起［8］。

公约也规定了政府支持体育运动的方法。运动员可能不会意识到《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》的具体内容，但他们将会得到消除兴奋剂所带来的好处。各国政府承认公约的效力具有一定程度的灵活性，它们可以采取立法、制定条例和政策或者采取行政手段的方式来执行公约的具体内容。不过，可以预计的是政府将要根据公约的规定采取一定的特殊行动［7］。

制定《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》的一个重要成果就是加强了与反对在体育运动中使用兴奋剂的体育团体和其他组织的联系。譬如，在制定公约的过程中UNESCO与世界反兴奋剂机构和欧洲理事会都建立了很好的工作关系，并且期待能够进行进一步的合作。这也表明，在国际法的某些领域，政府可以和非政府的民间团体进行合作，为了全社会的利益而共同制定某些国际法规则，这无疑开创了一个可供借鉴的先例。

兴奋剂类分析方法系列讲座（22）兴奋剂检测中的化学衍生化方法

兴奋剂检测中的化学衍生化方法



摘 要

本文评述了兴奋剂检测中的各种化学衍生化方法，对蛋白同化激素、麻醉镇痛剂、β-阻断剂和利尿剂分别进行了讨论。这四类药物结构各不相同，但绝大多数属于高沸点、难挥发的极性化合物，不适于直接进行GC或GC/MS分析 通过化学衍生化，不仅可增大试样的挥发性和稳定性，减小样品的极性，使原来难以进行GC分析的试样转变成适合于色谱分析的试样，而且通过衍生化还可达到改善分离效果、提高检测灵敏度的目的。



本文摘自《分析化学》的评述与进展板块中国家体委运动医学研究所兴奋剂检测中心的徐友宣和中国医学科学院药物研究所的徐妍青两位研究人员的文章，综述了四类兴奋剂检测中的化学衍生化方法，提供网友们参考。



1、引 言

目前，在体育竞赛中使用兴奋剂来提高运动成绩的现象屡有发生。反兴奋剂的问题也已得到充分的重视 为此，国际奥委会规定了五大类100余种禁用药物，并选定GC／MS法作为分析检测的主要手段。

这五类药物除刺激剂和部分麻醉镇痛剂外均为高沸点、难挥发的极性化合物，如果使用

GC或GC／MS法进行分析．则必须要对这些药物进行化学衍生化。这些药物含

蛋白同化激素包括：7a一17一二甲睾酮(holasterone)，去氢睾酮(boldenone)，氯睾酮(closteho1)，脱氢氯甲基睾酮(dehydrochlormethyhestosterone)，氟羟甲基睾丸酮(fluoxymesterone)，lα一甲基双氢睾酮(mesterolone)；，大力补(metandienone)，甲基异睾酮(metenolone)，甲基睾丸酮(methy1．testosterone)，苯丙酸诺龙(nandrolone)，乙诺酮(norethandrolorte)，氧化甲基双氢睾酮(oxendrolone)，4-羟甲基睾丸酮(oxymesterone)，康复龙(oxymetholone)，康力龙(stanozolo1)，睾酮(testosterone)；

β-阻断剂包括：醋丁酰心安(aeebutolol ) ，心得舒(alprenolo1)，氨酰心安(atenolo1)，柳胺心定(1ahetalo1)，美多心安(metoprolo1)，萘羟心安(nadolo1)，心得平(oxprenolO1)，心得安(propranolol)，心得怡(sotalo1)；

麻醉镇痛剂包括：氨苄度冷丁(anileridine)，叔丁啡(bupren0rphine)，可待园(codeine)，双氢可待园(dibydroeodeine)，乙基吗啡(ethylmorphine)，羟甲左吗喃(1evbrphano1)，吗啡(morphine)，。环丁甲羟氢吗啡(nalbuphine)，镇痛新(pentazocine)，非那佐辛(phenazocine)；

利尿剂包括：乙酰唑胺(acetazolamide)，氨氯吡咪(amiloride)，苄氨噻嗪(bendroflumethiazide)，苄硫噻嗪(henzathiazide)，丁苯氟酸(humtanide)，烯睾丙内酯(eanrenone)，氯噻酮(ehlortalidone)，二氯磺胺(dielofenamide)，利尿酸(ethacrynic acid)．速尿({urosemide)，双氢克尿噻(hydrochlorthiazide)，安体舒通(spironolact0ne)，氨苯碟啶(triamtereiae)

化学衍生化是GC或GC／MS分析中很常用的方法，用以将高沸点、强极性的化合物转化为低沸点、弱极性的化合物，从而可以用GC或GC／MS的方法进行分析 化学衍生化方法种类繁多，已有专著 [1,2]  及综述[3~5] 。最常用的方法有硅烷化、酯化、烷基化、酰化、环化、肟化及无机试样的衍生化等．对不同种类的化合物应采用不同的衍生化方法，才能达到预期的效果。下面将对各类药物的衍生化方法进行综述。



2、 蛋白同化激素的衍生化

蛋白同化激素及其代谢物的结构多种多样，其母体结构框架为：




分子中不同位置的羟基具有不同的反应活性．酮基则常转变为烯醇式。因此，就要对羟基及转化后的酮基进行衍生化。同时．大多数蛋白同化激素经体内代谢后主要以代谢物形式从尿中排泄．原型药不出现或出现时间较短。因此，以检测其代谢物为主。而蛋白同化激素的代谢物随代谢途径的不同而不同，多易发生单羟化或多羟化反应，羟化位点固各药物结构不同而有差别，所以对不同代谢物进行适当的衍生化是很重要的。

由于蛋白同化激素分子内的酮基在有酸催化或某些衍生化试剂的情况下易转变为烯醇

式，在对羟基进行衍生化时常出现多种衍生化产物 为了获得单一的产物有两种方法，一是使酮基保持不变，只对羟基反应形成羟基-TMS衍生物 (OH—TMS醚)；另一种办法是将酮基完全转化为烯醇式，对羟基及烯醇式同时进行衍生化．形成羟基、烯醇-TMS产物 (OH—ENOL—TMS醚)

采用第一种方法可用Hydrox-Sil AQ 作为衍生化试剂，即含21% 的三甲基硅基咪唑

(trimethylsilylimidazole，TS1M) 的吡啶溶液，所用溶剂为二甲基甲酰胺(DMF)[6] 。用TSIM的反应副产物是咪唑．它是两性化合物，不会促进烯醇式-TMS产物的形成，就避免了烯醇化的发生。由于TSIM 是一强的硅基给予体，还可加快衍生化反应的进行。用这种方法比用六甲基二硅氨烷(HMDS，只对无位阻的羟基作用)、N一(三甲基硅烷)二乙胺(TMSDEA，反应很慢)及N，O一双(三甲基硅烷)乙酰胺(BSA．其对无位阻的羟基作用且反应慢)效果都好．且用TSIM 可在有水的条件下反应，省去样品干燥的步骤，衍生化产物在几天内稳定。

采用这种方法的还有用甲氧基氯化铵(O一methoxyammonium chloride)的吡啶溶液将C17侧链保护起来，再用MSTFA-TMCS-TSIM 或BSA-TSIM-TMCS [5,6,7] 进行硅烷化，这样就能获得很好的色谱性质，灵敏度高、选择性好。TMCS(trimethylchlorosilane)是一种常用的添加试剂，它能增强其它试剂的硅烷化能力。

第二种方法是将酮基完全转化为烯醇式。可用TMSI(trimethylsilyliodide)作为催化剂，用MSTFA  (N．methyl—trimethylsilyltrifluoroacetamide) 作为硅烷化试剂 [15,16,18]。TMSI是一种万能的合成试剂，其中硅是硬酸，碘是软碱，与含氧的有机物反应很容易形成Si—O键，可促进酮基的烯醇式 TMS产物的形成，而MSTFA作为硅烷化试剂对于有位阻的羟基可进行三甲基硅烷化。这种衍生化对于GC／MS分析很成功，大多数甾体的质谱都给出(M+ )或 (M-15)+离子，OH—ENOL—TMS醚能形成很强的 (M-15)+ 离子，但其它碎片比OH-TMS醚产生的要少得多。因此，这种衍生物的质谱给出的结构信息比OH—TMS醚的质谱少，但它给出的 (M-15)+离子灵敏度很高，对于筛选是很有用的。MSTFA衍生产物可在室温稳定48h或4℃下稳定5～ 6 天。类似的方法有用MSTFA 和d 9-MBTFA (N，O-bis(d9 )

trimethylsilylacetamide)作为试剂，TMSI、TMCS和d9-TMCS作为催化剂，可对大力补及其

代谢物进行成功的衍生化 [11] 。还有一种方法是将同化激素分别衍生化[13] 。游离型采用第一种方法，用MSTFA—TMCS—TSIM (100:1:2，v／v／v)，然后加入MSHFB (N-methyl-n

-trimethylsi1ylheptafluorobutylamide)。而结合型则用第二种方法，采用MSTFA—TMSI(1000:

2，V／V)，若只对羟基进行衍生化则只用MSTFA—TMCS(100：2)即可。

甾体分析时普遍采用的衍生化方法还有肟化，这也是将酮基保护起来的一种方法 肟化常见的是肟一硅醚化及甲基肟一三甲基硅醚衍生化，通常选用的试剂为苯基肟或丁基肟[12] ，五氟苯甲氧基肟一三甲基硅烷化是一种理想的方法，虽然所用的试剂种类较多，操作较繁琐[9] ，但是这种方法可对睾酮的异构体进行分离，获得高灵敏度。

当选用ECD—PID作为检测器时，五氟苯二甲氯硅烷(pentafluorophenyldimethylsi1ylchlo-

ride)是一种很好的试剂，可使填充柱峰形对称，分辨率高，检测限比不衍生化提高2～3个数量级。 ，尤其是多氟代物具有良好的电子捕获性，可获得超乎寻常的检测器响应。

此外，蛋白同化激素的衍生化还有用HFB(heptafIuor。butyric acid anhydride)的，优点是

可获得较高的分子离子丰度。而对甲基睾丸酮用三甲基硅烷化(吡啶-MSTFA-TMCS，10:3:1)比用HFB衍生化获得的峰单一。[10]

近年来，一种新的衍生化试剂CEDMSTFA (N-methyl—N—cyanoethyldimethylsilyltrifluo—roacetamide)可对甾体进行氰基化 [14]，用乙腈作溶剂，反应条件温和，无副反应，可定量，峰形对称，响应值分别为三甲基硅烷化和特丁基二甲硅烷衍生物的1．7和1．3倍，这对减小基体和背景的干扰有利，可检测到pg级。

兴奋剂类分析方法系列讲座（22）（下）兴奋剂检测中的化学衍生化方法

3  β-阻断剂的衍生化

β-阻断剂目前已有几十种，其结构通常是由芳环或杂环与异丙基或特丁基取代的二级胺直接或通过次甲氧基连接，主环上可有取代基。关于β一阻断剂的气相色谱分析，游春晖等已有综述。[10] 阻断剂的侧链手性碳原子上都有极性的羟基，二级胺上也有一未取代的活泼氢，可使分子具有较大极性，需衍生化。衍生化的方法有酰化、硅烷化及环化。环化是外含两个或两个以上官能团衍生化的方法，已有论述。[2 在环化试剂中，有用光气(COCI )作为衍生化试剂的。[20] 但以含硼有机物最为常用。其中以甲基、丁基或苯基硼酸是最常用的试剂。它能与邻二醇、a一羟基酸、邻弪基酮和 β-羟基胺等反应生成环状化合物，此种衍生物主要用于色谱-质谱联用分析。[21,22] 此法反应时间短，选择性好，产物不易分解，且由于环状结构稳定，常给出分子离子及其它的特征质谱离子，对于鉴别β一阻断剂是有价值的方法 。对于 阻断剂来说，甲基硼酸被认为是比丁基硼酸或苯基硼酸更好的方法。[23] 出峰单一，反应完全，但由于其价格较高、挥发性过强，操作中要尽可能保持容器密封，减少挥发，并在通风橱中进行；不用时密闭避光保存。由于以上诸多不便，丁基和苯基硼酸也常用作环化试剂 [24]。

用MSTFA及MBTFA混合衍生化，可选择性地形成O-TMS，N-TFA衍生物，使衍生物稳定性增加，且过量的反应试剂无须除去即可直接进样。故本法也是 阻断剂衍生化的常用方法[25]。这种衍生化对 阻断剂的灵敏度比环化法还高 [26]，但是某些衍生物及某些代谢物衍生物的质谱图很不特征，难于辨认。故定性分析宜采用环化衍生化而定量分析宜采用MSTFA及MBTFA混合衍生化的方法。

此外，由于某种需要，β一阻断剂及其代谢物也常被制成其它种类的衍生物。如HFBA、TFA等含卤试剂的衍生物在ECD上有很高的响应[24]，故HFBA、TFA等含卤试剂也是 β阻断剂的气相色谱分析常用的衍生化试剂 。全氟酸酐衍生化产生酸性副产物，这时可加入吡啶等有机碱以促进反应，也可以使用含有碱性基团的衍生化试剂，如五氟丙酰三唑(PFPT)、MBT—FA。[30]等。硅烷化试剂也被用来衍生β一阻断剂[31]。进行这种衍生化时常用TMCS做催化剂。但由于二级胺不易被硅烷化，尤其是有位阻时更是如此。故加入MBTFA将氮上氢进行酰化，可增加灵敏度和稳定性。



4  麻醉镇痛剂的衍生化

从结构上说，麻醉镇痛剂包括吗啡类、度冷丁类、镇痛新类、美散痛类等。它们大都具有数目不同的氧极性氢和氮极性氢，因此需要衍生化。对于含有氮活泼氢的麻醉镇痛剂，卤代酸酐酰化法最为合适。此法速度快、定量准确[1]，因此应用很广。用得较多的试剂是三氟乙酸酐(TFAA)[32~34] 和五氟丙酐(HFPA)[35~37] ，也有用七氟丁酐(PFBA)的[38,39]。一般来说，酰化比硅烷化出的峰单一，但文献[39]比较了用BSTFA (N ,O-his (trimethylsily1) (trifluoroacetamide) 与五氟丁酐 (PFPA) 和HFBA对吗啡、可待因、乙基吗啡等进行的衍生化，结果用HFBA衍生化产生两个峰。对尿样用BSTFA比用PFPA的图谱干净且峰单一，且于室温同样稳定。另外，文献[40] 比较了5种衍生化试剂对吗啡、可待因进行的衍生化，结果表明用PFPA或HFBA衍生化，产生的质谱中二级、三级离子丰度低，且用MBTFA时，因内标及产物稳定性差，不适合做定量分析。此外，用醋酐乙酰化比硅烷化稳定，比HFBA、PFPA衍生化产物也稳定。由此看来，用醋酐和BSTFA对于尿中的阿片类生物碱是较好的方法。

对于含有羟基的麻醉剂来说，羟基上存在的活泼氢易与MSTFA作用而生成三甲基硅醚

衍生物，此反应容易进行，且无副产物出现[41]。而当用酰化试剂MBTFA或TFAA进行衍生化时，则出现副产物，且灵敏度低[34,41] 。具体实验中从总体上讲麻醉镇痛剂的分析用硅烷化比用乙酰化好。

但是，当进行体内药物分析时，许多药物氯原子上的烷基经代谢后脱去，苯环上接上了极性的羟基，而出现氯活泼氢和氧活泼氢。这时选用酰化的方法比较灵敏和稳定。因此，为了更好地同时检出母体药物及其代谢物，同时考虑兴奋剂检测中要用同一方法检出所有麻醉镇痛剂的需要，在衍生化时往往采用连续衍生化。如先用MSTFA进行硅烷化，再用MBTFA进行乙酰化[41~44]。此反应易于进行且副产物少。



5  利尿剂的衍生化

用GC或GC／MS法分析利尿剂的文献较少。利尿剂分子一般较大，分子量常在300~400

之间，含有3～4个极性基团，有时每个极性基团上还含有两个活泼氢原子，因此，如果采用硅烷化或乙酰化的方法进行衍生化，则分子量将会增加很多，这对于常用的四极杆式质谱仪是不合适的。所以，利尿剂的衍生化一般采用甲基化的方法，这就可以克服上述缺点[45]。

甲基化方法多种多样。如重氮甲烷 相转移催化、硫酸二甲酯及卤代烷酸碱催化反应等。其中碘甲烷的碱催化反应是常用的方法[46,47] 此法试剂便宜，无毒，操作简便，产率较高。通常的做法是向经提取吹干后的试样中加入碘甲烷、溶剂丙酮和碳酸钾，60℃ 下加热了3～4h。但要注意；实验中所用碘甲烷需经重蒸处理。蒸馏所用玻璃容器要用锡纸包严，以防见光。衍生化时，所用碳酸钾要在450℃下烘烤3h，否则除不尽其中的水分，导致实验失败。提取烷基化法是利屎剂衍生化常用的方法。这种方法常使用季铵离子作为相转移催化剂，如苄氟噻嗪[48]  及氯噻酮[49] 的分析。

但甲基化并不能适用于所有利尿剂。某些利尿剂如氨氯吡眯、氨苯喋啶、烯睾丙内酯、安体舒通则应采用硅烷化，才能获得较好的结果[50,51] 。尚未见有其它方法应用于利尿剂的衍生化。



6  总 结

兴奋剂的种类繁多，其衍生化反应包括了甲基化、硅烷化、酰化、环化等常见的方法。这些衍生化方法对兴奋剂检测起到了关键性的作用，不仅可改善被测物质的色谱行为，还可利用衍生化使化合物具有特殊的裂解方式，使兴奋剂分析达到了快速、简便、可靠的要求，这是别的分析方法所无法比拟的。

致谢：本文承蒙周同惠研究员审回。

7  参考文献

兴奋剂类分析方法系列讲座（23）2种液相色谱分离模式测定半夏露糖浆中麻黄碱和伪麻黄碱 
 
用2种高效液相色谱分离模式分析测定半夏露糖浆中

麻黄碱、伪麻黄碱成分



摘 要 目的:比较采用反相键合相液相色谱法和离子交换液相色谱法分析测定中成药半夏露糖浆中麻黄碱、伪麻黄碱成分。

方法:色谱条件1以AgilentZORBAXExtendC18柱为色谱柱,流动相为0.2%磷酸溶液-乙腈(95:5),流速1.0mL·min-1,检测波长206nm;色谱条件2则以SpherisorbSCX柱为色谱柱,流动相为75mmol·L-1磷酸盐溶液(pH7.0)-乙腈(85:15),其余同色谱条件1。供试品溶液以蒸馏法获得。

结果:采用2种液相色谱法,供试品中麻黄碱和伪麻黄碱成分均可得到完全分离,盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱进样量分别在0.05～0.5μg及0.03～0.3μg与峰面积呈良好线性关系。2种色谱方法所测得结果一致。

结论:2种液相色谱法均可用于测定半夏露糖浆中麻黄碱、伪麻黄碱的含量,另采用离子交换色谱法测定可较直观地得到麻黄中包含生物碱在内的碱性成分的指纹信息。



    麻黄碱、伪麻黄碱盐酸盐是国家控制的能制备毒品的原料药，都具有拟肾上腺素作用和对中枢神经系统兴奋作用，运动员要服用这种止咳糖浆就会引来麻烦。本文由姜舜尧2 田颂九1 刘琼3 (1.中国药品生物制品检定所;  2.浙江省药品监督管理局;  3.浙江英特药业有限责任公司) 用二种实验模式来分离检测半夏露糖浆获得可靠结果。现全文介绍如下。



前 言

半夏露糖浆系一常用止咳化痰类中成药制剂,由生半夏、麻黄、枇杷叶、远志、款冬花、桔梗、陈皮、甘草、薄荷油9味中药制成。处方中主药麻黄含多种结构相似的麻黄碱类生物碱,如麻黄碱、伪麻黄碱及少量的去甲麻黄碱、去甲伪麻黄碱、N-甲基麻黄碱、N-甲基伪麻黄碱等,这类成分都具有拟肾上腺素作用和对中枢神经系统兴奋作用[1,2],在本制剂中有必要对这类成分作定量控制。本文运用2种高效液相色谱分离模式(反相液相色谱法和离子交换

液相色谱法)对样品中所含有的麻黄碱、伪麻黄碱成分进行了分析测定。



实 验

1 仪器及试药

Agilent1100高效液相色谱系统:G1311A四元泵,G1322A脱气机,G1313A 自动进样器,G1316A柱温箱,G1315B二极管阵列检测器,A08.03版Agilent化学工作站。对照品盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱及麻黄对照药材均由中国药品生物制品检定所提供。半夏露糖浆(规格:100 mL 相当于含生药13.38g)3批,由药厂提供。乙腈为色谱纯,磷酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氢氧化钠、氯化钠均为分析纯,重蒸馏水。



2 色谱条件

条件1：色谱柱为Agilent ZORBAXExtendC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为0.2%磷酸溶液-乙腈(95:5),流速1.0mL·min-1,柱温25℃,检测波长206nm。

条件2：色谱柱为SpherisorbSCX (150mm×4.6mm,5μm),流动相为75mmol·L-1磷酸盐溶液 (75mmol·L-1磷酸氢二钠溶液用75mmol·L-1磷酸二氢钠溶液调pH 至7.0)-乙腈(85:15),其余同条件1。在两色谱条件下供试品及在色谱条件2下麻黄对照药材的色谱分离结果如图1所示。




3 溶液的制备

3.1 对照品溶液

取对照品盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱适量,分别加水稀释制成9.936μg·mL-1的盐酸麻黄碱对照品溶液和6.24μg·mL-1的盐酸伪麻黄碱对照品溶液。

3.2 供试品溶液

精密称取半夏露糖浆约25g,置蒸馏瓶中,加水10mL,加氯化钠7.5g和20%氢氧化钠溶液100mL,蒸馏,用预先盛有0.5mol·L-1盐酸溶液5mL的100mL量瓶收集蒸馏液近95mL,加水至刻度,摇匀,得供试品溶液。

3.3 麻黄对照药材溶液

取麻黄药材0.5g,按供试品溶液制备方法制得麻黄对照药材溶液。



4 分析方法论证

4.1 线性范围

取盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱2种对照品溶液,分别于两色谱条件下分别进样5,10,20,30,40,50μL,对所测得的峰面积(Y)和各对照品进样量 (X) 作回归处理,结果表明,麻黄碱、伪麻黄碱进样量分别在0.05～0.5μg及0.031～0.31μg呈良好线性关系,相关系数r均大于0.9998。

4.2 进样精密度和重复性

取盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱2种对照品溶液,分别于两色谱条件下重复进样8次,进样精密度RSD (n=8)在0.4%～0.8%之间;取同批半夏露糖浆6份,按上述方法制得供试品溶液,在色谱条件1下测定麻黄碱和伪麻黄碱含量,方法重复性RSD (n=6)分别为0.6%和0.5%,在色谱条件2下测定,RSD(n=6)分别为1.0%和1.8%。

4.3 回收率试验

精密称取已知含量的半夏露糖浆(含盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱量分别为0.0382，0.015mg·g-1)约12.5g各6份,分别加入盐酸麻黄碱对照品0.4968mg和盐酸伪麻黄碱0.187mg,按上述方法提取制备,于色谱条件1下测定,计算麻黄碱和伪麻黄碱的平均回收率 (n=6)分别为100.5% (RSD=1.2%) 和102.5% (RSD=2.2%)，于色谱条件2下测定，则2成分平均回收率 (n=6) 分别为101.5% (RSD=1.7%) 和101.8% (RSD=2.5%)。



5 样品测定结果

在色谱条件1下,测得3批样品含麻黄碱量分别为0.038，0.043，0.044mg·g-1,含伪麻黄碱量分别为0.015，0.017，0.017mg·g-1;在色谱条件2下测得结果与色谱条件1下所得结果一致。



6 离子交换色谱条件下供试品的色谱分离行为采用SCX柱以离子交换色谱法分析供试品中

生物碱成分，流动相pH 及其离子浓度是影响带正电离子色谱行为的重要因素[3～7]。

6.1 流动相pH 对色谱分离的影响

取75mmol·L-1的磷酸溶液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钠溶液,互相调节配制成不同pH 的75mmol·L-1磷酸盐溶液,以磷酸盐溶液-乙腈 (85:15) 作为流动相，各自测定峰1～5 (图1) 的保留因子。实验发现，流动相pH在1.8～3.0范围变化对峰1～5的保留因子均影响很大，随pH 增大，各成分保留因子减小，而pH4.0以上峰1～5的保留因子则基本不受pH变化影响。

6.2 流动相离子浓度对色谱分离的影响

配制浓度分别为20、50、75、100mmol·L-1的磷酸氢二钠溶液及磷酸二氢钠溶液,互相调节配制成pH 为7.0的不同浓度的磷酸盐溶液，以磷酸盐溶液-乙腈 (85:15)作为流动相,各自测定峰1～5的保留因子，以磷酸盐浓度的倒数与测定物的保留因子变化作图(图2)。可看出，流动相其离子浓度倒数与各测定物的保留因子的变化均可成一斜率为正值的直线，根据离子交换色谱原理，表明此时各测定物的色谱分离均存在着离子交换保留机理[3～6]。



7 供试品中麻黄所含碱性成分的色谱指纹识别

从图1中(D)、(E)可看出,半夏露糖浆供试品色谱中的峰1～5在麻黄对照药材色谱中均能一一对应，另以处方中去麻黄的其余8味药按半夏露糖浆制备工艺、供试品溶液制备方法制得缺麻黄空白对照溶液，进样分析可证实峰1～5均为麻黄药味所特有；图2表明，峰1～5在色谱柱上存在着离子交换作用，结合在流动相pH 变化情况下这类成分的色谱行为，可判断均为带正电荷成分；另外,用二极管阵列扫描发现峰1～5的紫外光谱类同。上述实验可判断峰3～5为麻黄中的碱性成分，且推测可能为麻黄碱类生物碱成分。



8 讨论

2种液相分离模式均可用于半夏露糖浆中麻黄碱、伪麻黄碱成分的定量测定。另外,采用SCX柱以离子交换色谱法分离，供试品中的酸性成分和中性成分不被保留[7],生物碱等碱性成分可获得较好的色谱分离，故在其色谱中可较直观地得到麻黄中含生物碱在内的碱性成分的指纹信息。

兴奋剂类分析方法系列讲座（24）毛细管电泳-电化学检测技术测定了猪尿和猪饲料中的β-兴奋剂 

小型化毛细管电泳-电化学检测法测定

猪尿和猪饲料中的β-兴奋剂



摘 要:采用小型化毛细管电泳-电化学检测技术测定了猪尿和猪饲料中的克伦特罗( clenbu terol,俗称瘦肉精)及其替代品莱克多巴胺( ractopamine )和沙丁胺醇( salbutamol) 。考察了工作电极的氧化电位、运行缓冲液的酸度和浓度、分离电压和进样时间等因素对分离和检测的影响。以直径300μm 的碳圆盘电极为工作电极,检测电极电位为+ 0.95 V ( v s SCE) ，在100 mmol /L的硼酸盐(pH 9.15)运行缓冲液中，上述3种组分在7 m in内实现了较好的分离。被测物浓度与峰电流在3个数量级范围内呈良好的线性关系，检测限为1.20 ×10 -7 ～2.06 ×10 - 7 g /mL。该方法简单可靠,已成功应用于猪尿和猪饲料样品中3种β-兴奋剂的测定，是一种有效的食品安全分析检测方法。



      本文是上海市科研计划基金项目(06D Z05125) ，由华东师范大学化学系的叶建农教授指导，王伟宇、张玉莲、邢晓平、王金妍、石　雪、等研究人员完成，现全文介绍如下：

,前 言
β-兴奋剂(β-adrenergic agonist; β-agonist)的全称为β-肾上腺素兴奋剂(BAA ) ，又称β-激活剂,是一种化学结构和生理功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇类衍生物， 它能与动物体内大多数β-肾上腺素受体相结合，导致细胞代谢过程改变。20世纪80年代有人发现, 在饲料中添加β-兴奋剂具有营养成分再分配作用，能使肌肉比例提高,增大禽畜的瘦肉率,因此β-兴奋剂一度被用作畜牧业中的饲料添加剂。β-兴奋剂易在动物组织特别是内脏中积聚残留,并可通过食物链进入人体，严重危害人类健康。欧美等国先后立法禁止在畜禽生产中使用β-兴奋剂作为饲料添加剂[ 1 ] 。我国政府也明令禁止使用克伦特罗(俗称瘦肉精) 、沙丁胺醇等作为饲料添加剂，且严格控制动物性食品中β-兴奋剂的残留量。为更好地控制克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等的非法使用，迫切需要建立一种快速、简便、有效的检测方法。

　　薄层色谱法[ 2 ] 、气相色谱-质谱联用法( GC-MS ) [ 3, 4 ] 、高效液相色谱法(HPLC ) [ 5 - 8 ] 、免疫分析法( IA ) [ 9, 10 ]等已经应用于β-兴奋剂的检测，但上述方法普遍存在检测周期长、分析成本高、某些方法灵敏度比较低等缺点，有些还需复杂的样品前处理或衍生化。毛细管电泳(CE)具有分离效率高、分析速度快、重现性好、样品和试剂用量少等优点，是高效的分离分析技术之一。它与电化学检测方法( ED )联用，对具有电活性的物质有很高的灵敏度和选择性。小型化毛细管电泳分离装置与常规毛细管装置相比，分析速度更快，适宜于实际样品中被测成分的快速检测。本文使用小型化的毛细管电泳-电化学检测技术测定猪尿和猪饲料中的克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇，在7 min 内即可实现上述3种物质的分离检测，为食品安全监控提供了一种有效快速的分析测试方法。



1　实验部分

1. 1　仪器和试剂

　　小型化的毛细管电泳-电化学检测系统( CE2ED )为自组装, 包括直流高压电源(中国科学院上海应用物理研究所) ; 固定毛细管和检测池及进样转盘的有机玻璃(如图1, 在有机玻璃的左端, 固定有检测池,里面是三电极体系; 右端是进样用的转盘,转盘的外侧有用于插进样管的小圆孔,旋转转盘即可连续进样) ； 14.5 cm 长熔融石英毛细管(内径25 μm , 外径360 μm , Polymicro Techno logies,USA)，BAS LC-3D 安培检测器(Bioanalytical Bystems, USA)，XWD T-164型双笔记录仪(上海大华仪表厂)，TGL -16C 型离心机(上海安亭科学仪器厂) 。




克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇均购自上海安谱公司，其他试剂均为分析纯，各标准品均按说明使用。猪尿分别取自湖北和吉林的个体养殖户，猪饲料购自饲料供应站。用蒸馏水配制3种标准品质量浓度均为1.0 ×10 - 3 g /mL储备液，于4 ℃下避光保存；其他不同浓度的工作液，用运行缓冲液稀释储备液得到。

1. 2　样品处理

　　将猪尿离心( 2 000 r /m in ) 10 m in 后, 用0.22μm 的聚丙烯滤膜将上层清液过滤后存于5 mL 容器中备用。

　　将猪饲料磨成粉状，准确称取其粉末2.00 g,置于25 mL 容量瓶中，加入乙醇-水(体积比为4∶1)混合溶液10 mL, 超声萃取2 h ( 50 Hz, 19 W ) ，离心 (2 000 r /m in ) 10 m in，上层清液经0.22μm 聚丙烯滤膜过滤后存于5 mL 容器中备用。

1. 3　碳圆盘电极的制作

　　将铜导线与直径为300 μm 的碳棒相连, 然后将碳棒外侧用聚氨酯清涂料包覆制成碳圆盘电极，在室温下放置24 h 固化后备用。使用前碳圆盘电极端面用金相砂纸抛光， 并置于二次蒸馏水中超声清洗5 m in。

1. 4　实验方法

　　使用自组装的小型化CE-ED 装置，电化学检测为三电极体系，直径300 μm 的碳圆盘电极为工作电极，Ag /AgCl电极( SCE )为参比电极； 铂丝为辅助电极。采用电动进样， 条件为在1.15 kV 下从毛细管阳极端进样6 s。运行缓冲液为100 mmol/L硼砂溶液(pH 9.15) 。试液与运行缓冲液均经0.22μm 聚丙烯滤膜过滤后再使用。

兴奋剂类分析方法系列讲座（24）（下）毛细管电泳-电化学检测技术测定了猪尿和猪饲料中的β-兴奋剂 


2　结果与讨论

2. 1　电泳条件的选择

2. 1. 1　电极电位的选择

　　在电化学检测中，加在工作电极上的工作电位直接影响检测的灵敏度、检测限和电极的稳定性。因此，有必要研究电极电位对被测物峰电流的影响以确定最佳的检测电位。工作电极的工作电位对被测物峰电流的影响如图2所示。


随着工作电位的增加，峰电流增大。当工作电位超过+ 0.50 V ( vs SCE)后，峰电流迅速上升，当工作电位超过+ 0.95 V ( vs SCE )后，虽然所有被测物都产生更大的峰电流， 但同时由于基线电流也急剧增加，信噪比反而有所降低。综合考虑选择工作电极的工作电位为+ 0.95 V ( vs SCE)，此时信噪比较高，电极的稳定性较好。

2. 1. 2　运行缓冲液的酸度和浓度的选择

　　运行缓冲液的酸度直接影响毛细管的ξ电位，从而影响电渗流( EO F )的速率，同时溶液的酸度也决定样品中各组分分子的电荷情况，进而影响各组分的迁移时间和分离度，所以对运行缓冲液的酸度进行优化是获得良好分离条件的关键。本文选择pH 9.15的缓冲液作为运行缓冲液，在此pH 条件下，各组分间的分离度较好。

　　除了运行缓冲液的pH 值外， 缓冲液的浓度也是影响分离度、峰电流、迁移时间等的另一个重要因素。在pH 9.15的条件下，随着缓冲液浓度的增加，被测组分的分离度得到了提高， 但同时被测组分的迁移时间变长。为了取得较好的分离效果，本文选择100 mmol /L 硼砂溶液(pH 9.15)作运行缓冲液。

2. 1. 3　分离电压和进样时间的选择

　　对于一定长度的毛细管，分离电压决定电场强度，从而影响被测组分的迁移速度和电渗流的速度，进而影响各组分的迁移时间。分离电压对迁移时间的影响如图3所示。



分离电压越高，迁移时间越短，但过高的分离电压会降低分离度； 而过低的分离电压，会导致分析时间过长，使被测组分峰展宽。在本实验中，当分离电压为1.15 kV时，所有被测组分在7 m in内实现了较好的分离，因此选择1.15 kV 为工作电压。分离电压为1.15 kV时,选择进样时间分别为2, 4, 6, 8, 10 s,测定克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的峰高与进样时间的关系，发现进样时间高于6 s后峰高增加幅度不大，却引起电泳峰展宽、峰拖尾等现象发生，所以本文在分离电压为1. 15 kV时,选择进样时间为6 s。

　　在优化条件下测得的克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的混合标准溶液和实际样品的电泳谱图如图4所示。



2. 2　重现性、线性范围及检测限

　　在上述优化条件下，将1.0 ×10- 5 g /mL 克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的混合标准溶液连续进样7次，峰高的相对标准偏差(RSD )分别为2.90%，3.02%和1.69%，结果表明方法的重现性良好。

　　配制一系列不同浓度的3 种组分的混合标准液，在优化条件下，考察各组分的线性范围， 得出各组分的线性回归方程，并以3倍信噪比对应的浓度为检测下限。3种组分的线性范围和检测下限如表1所示。



2. 3　样品及回收率测定

　　分别取经0.22μm 聚丙烯滤膜过滤后的猪尿和猪饲料适量 (使实际样品中的峰高既不低于检测限，也不超出所选量程) ，用运行液稀释至1 mL, 在优化条件下测定。取等量的实际样品， 加入3种标准品，稀释至1 mL，在优化的条件下检测，通过峰高的增长来对实际样品中的物质进行定性。猪尿和猪饲料中3种β-兴奋剂的含量如表2所示。检测结果表明，所有实际样品中均含有克伦特罗的替代品沙丁胺醇或莱克多巴胺，说明由于相关部门加强了对瘦肉精的监管和打击力度，不法商人改头换面，以沙丁胺醇或莱克多巴胺作为瘦肉精的替代品，企图逃避监管，继续非法牟利。



取等量的实际样品(猪尿) ，加入如表3所示的标准品，测得加标后的峰高，从而计算出回收率。回收率的测定结果见表3。



上述分析结果表明， 本方法准确性好、灵敏度高,为猪尿和猪饲料中3种β-兴奋剂的同时分析检测提供了一种行之有效的方法。

兴奋剂类分析方法系列讲座(25)-麻醉药品和第一类精神药品的使用调查 

我院麻醉药品和第一类精神药品利用研究及处方评价



摘 要

目的：了解我院麻醉药品和第一类精神药品的使用情况及变化趋势，评价临床用药的合理性。

方法：采用 WHO 推荐的限定日剂量（ DDD ）和药物利用指数（ DUI ）作为药物利用研究和评价单位，统计2000年~2004年麻醉药品和第一类精神药品的应用数据，并随机抽取2896 张用药处方进行分析和评价。

结果：五年中我院麻醉药品、第一类精神药品的消耗金额增长了 51.06%， DDDs 增加 61.23 % ；处方中用药频率哌替啶注射液达 44.96 % ；创伤及手术镇痛用药占 80.28 % ，癌痛占 13.74 ％。

结论：我院麻醉药品和第一类精神药品的使用基本合理，管理符合有关规定。



本文由北京积水潭医院的赵怀全和宗怡主管药师们共同总结本院的麻醉药品和第一类精神药品的使用情况及变化趋势，这对国家严管、社会和谐具有实际意义。





前 言

依法管理和合理使用麻醉药品和精神药品是医院药学工作的重要内容，我国从20世纪 90年代开始推行“癌症三阶梯止痛指导原则”，新药品种和用药方式不断发展，用药观念更新，药品供应改善，多项相关管理法规相继出台 [1,2]，合理用药和药物利用研究得到重视，为了解我院麻醉药品和第一类精神药品的应用情况及变化趋势，评价药物使用的合理性，对我院2000年~2004年麻醉药品和第一类精神药品的应用数据及随机抽取的2896张用药处方进行统计分析和评价，以求为该类药品的管理工作和临床用药提供量化依据。



分 析

1 数据来源与统计方法

1.1  数据来源

我院西药库2000年~2004年麻醉药品和第一类精神药品应用数据，随机抽取麻醉药品、第一类精神药品处方2896张。

1.2  统计方法

采用 WHO 推荐的限定日剂量（Defind daily dose ，DDD ）的方法[3]，统计药品名称、规格、单价、用量、金额等，计算出各药的用药频度（ DDDs ) ；处方以药物利用指数（ Drug                                                                                                                                                              utilization index , DUI ）为评价单位 [4] ，统计处方药物名称、剂量、用法、用量、用药次数、性别、年龄、疾病、科室等，计算各药的用药总天数和 DUI ，评价处方用药的合理性， DUI < l.0则医师的日处方剂量＜ DDD ,DUI = 1.0 则医师的日处方剂量＝ DDD , DUI > l 表明医师的日处方剂量＞ DDD。

使用 Microsoft Excel ，将全部药品数据和处方信息输入计算机。

DDDs = 总用药量/该药的DDD值，DUI = DDDs/用药总天数。

DDD 值的设定依据： 《 药品的解剖学治疗学化学分类索引及规定日剂量 》 （ ATC ) 2002 年版；《新编药物学 》（第 15 版）；药品说明书和实际用药情况。



2  结果与分析

2 . 1 麻醉药品和第一类精神药品消耗情况

由表1可见，2004年较2000年我院麻醉药品、第一类精神药品的消耗金额增长了51.06 % ，占全部药品消耗金额的比例由 0.17 ％上升为 0.19 % ，其增幅高于药品总消耗的增长。




2.2 麻醉药品、第一类精神药品用量、 DDDs排序（见表 2 ）

我院麻醉药品有 7 种，其中注射剂 3 种、片剂 2 种、外用贴剂 2 种；第一类精神药品 2 种，其中注射剂 1 种，胶囊剂 l 种。五年中枸橼酸芬太尼注射液、盐酸哌替啶注射液、硫酸吗啡控释片用药频度始终列居麻醉药品前三位，拘椽酸芬太尼注射液用药频度大与我院创伤病人多，手术及术后镇痛，特别是与病人自控镇痛 ( Patient Controlled Analgesia , PCA ）的应用密切相关。2001 年新购人芬太尼透皮贴，其用药频度逐年上升。

五年中，麻醉药品、第一类精神药品总 DDDs 2000年~2002 年呈现上升趋势， 2002 年~2004年呈现下降趋势， 2004年 DDDs 比 2000年增加 61.23 ％。



3 麻醉药品、第一类精神药品处方分析

随机抽取麻醉药品、第一类精神药品处方 2896张．其中门诊处方 27 张，占 0 . 9 % ；急诊处方 117 张，占4 . 0 % ；病房处方 2752 张，占 95.0 ％。患者情况：男性 1701 人，占 58.7％；女性 1195 人，占 41 . 3 % ；年龄情况： < 18 岁的 285 人，占 9 . 8 % ; 18 岁~60 岁的 1989 人，占 68 . 68 % ；≥60 岁的 622 人，占 21 . 5 % （见表 3 、表 4 ）。

兴奋剂类分析方法系列讲座(25)（下）-麻醉药品和第一类精神药品的使用调查 



由表 3 可见麻醉药品处方占 91 . 78 ％、第一类精神药品处方占 8 . 22 % ，处方使用频率盐酸哌替啶注射液占.44.96 % ，枸椽酸芬太尼注射液占 38.61 % ，盐酸布桂嗪注射液占 7 . 84 % ；从处方的病情分布可见，创伤及手术镇痛占 80 . 28 % ，癌痛占 13 . 74 % ，内脏绞痛占 2 . 76 ％。盐酸哌替啶注射液主要用于创伤及手术镇痛、癌痛、内脏绞痛，枸椽酸芬太尼注射液全部用于创伤及手术镇痛，盐酸布桂嗪注射液主要用于创伤及手术镇痛、癌痛、内脏绞痛，硫酸吗啡控释片主要用于癌痛、创伤及手术镇痛，盐酸吗啡注射液主要用于心绞痛，芬太尼透皮贴主要用于癌痛，磷酸可待因片主要用于镇咳，司可巴比妥胶囊主要用于失眠症。



由表 4 可见硫酸吗啡控释片的 DUI 为 1.45 ，因其主要用于癌症患者镇痛，应由医师根据病情需要和耐受情况决定剂量，即不受药典中关于吗啡极量的限制，属合理用药；盐酸吗啡注射液的 DUI 为 1.18 ，因样本中仅有 24 例，且用途不同剂量差异较大，所以不足以说明用药不合理性。枸椽酸芬太尼注射液主要用于复合麻醉及术后镇痛，是病人 PCA 使用的主要药物， PCA 给药方法是： 1.5mg / 72h ，致使 DUI 值升高，其他药物 DUI 基本属于合理用药范围。



4  讨论

4 . 1 麻醉药品、第一类精神药品用量增加

长期以来，我国对麻醉药品的管理十分严格，导致其医疗消耗量不仅低于发达国家水平也低于发展中国家平均水平[5]。从表 1 及表 2 中可以看出，五年中我院麻醉药品、第一类精神药品消耗金额增长了 51.06 % ，DDDs 2004 年比 2000年增加 61.23 ％。随着国家对麻醉药品管理政策的不断调整，满足癌痛患者合理足量的应用麻醉药品，预计麻醉药品的用量仍会增长。

4 . 2 枸椽酸芬太尼位居首位

枸椽酸芬大尼注射液在各年度 DDDs排序中均居首位。我院以治疗创伤和烧伤为重点，手术量大，芬太尼注射液主要用于复合麻醉及术后镇痛，特别是与手术病人自控镇痛方式的普遍应用有关，该药镇痛效力约为吗啡的 80 倍，镇痛作用产生快，持续时间短，副作用比吗啡小。手术病人 PCA [6] 是病人借助于特殊的泵，按需进行反复的给予小剂量药物以达到镇痛目的的一种方法，血药浓度平稳，镇痛效果迅速。枸椽酸芬太尼注射液在 PCA 中的用药方式为： 1.5mg / 72h ，该给药剂量已被临床广泛接受，不同的手术部位和创伤程度及给药方式对镇痛药的使用剂量是有差异的。芬太尼透皮贴剂主要用于癌症患者止痛及慢性非癌性疼痛，该药因剂型独特、应用方便、止痛效果良好、镇痛作用维持时间较长且不良反应发生率较低[7]，是较理想的癌症止痛药物之一。

4 . 3  癌痛用药

在 2896张麻醉药品、第一类精神药品处方中，用于癌痛的有 398 张，处方使用频率为 13 . 74 % ，其中盐酸哌替啶注射液占 49 % ，硫酸吗啡控释片占 21 . 60 % , 盐酸布桂嗪注射液 20 . 35 % ，芬太尼透皮贴 8 . 0 % ，可见盐酸哌替啶注射液位居癌痛镇痛首位，该药近年来讨论较多，其止痛作用维持时间短（仅为 2 .5h~3 .5h ) ，代谢产物去甲哌替啶具有中枢神经毒性，长期应用易导致蓄积中毒，因此该药不被推荐用于癌症患者的长期止痛治疗。但因其价廉、起效快及旧有用药习惯，致使临床用药中仍多选择哌替啶注射液为癌症患者止痛；硫酸吗啡控释片 DDDs 虽有增长，但治疗癌痛的处方频率仍远低于盐酸哌替啶注射液，说明“癌症三阶梯止痛指导原则”需进一步落实，应根据患者疼痛程度进行个体化给药。

4 . 4 限定日剂量（DDD）的设定

限定日剂量（ DDD ）和药物利用指数（ DUI ）作为经典的药物利用研究和处方分析方法，在临床广泛应用，对于多治疗目的、多给药途径用药研究方面可能存在技术误差，如枸椽酸芬太尼注射液主要用于复合麻醉及术后镇痛，用于复合麻醉将 DDD值设定为0.1mg/d，则 DUI 为 4.14 ；如用于术后镇痛将 DDD 值设定为 0 . 5mg/d，则DUI为0 . 83 ；如果分别设定计算，则前者 DUI 为 1.06 ，后者 DUI 为 0.95 ，枸椽酸芬太尼的半衰期约为 3 .7h ，静脉给药作用维持 30min~60min ，术后镇痛为连续用药，总剂量属安全范围[8]。因此，在药物利用研究和处方评价中应特别重视 DDD 值的设定，不同学者在药物利用研究中 DDD 值不同，研究结果不同，以致影响结果合理性的评价。

4 .5  药品管理

麻醉药品、精神药品应依法管理，合理用药，满足临床患者用药需求，在调查中发现 24 张吗啡注射液处方中，总剂量 520mg ，而实际用量为 366mg ，因治疗心绞痛单次剂量为 2mg ，小于 10mg 的单支规格，在用药中有可能拼支使用产生剩余，应建立使用记录，剩余药品监督销毁；病房等部门的贮备药，多为脱离原包装的零支药品，没有标注有效期，应完善包装管理，安瓶瓶上标注药品有效期；在满足临床患者用药需求方面要严格执行有关规定[2]，不得无依据的限制使用药品。

通过对 2000年~2004年我院麻醉药品和第一类精神药品的用药情况调查及 2896张药品处方分析，结果表明：我院麻醉药品和第一类精神药品的使用基本合理，管理符合有关规定，无滥用倾向。

兴奋剂类分析方法系列讲座（26）微波萃取-气相色谱法测定尿液中的苯丙胺类毒品 
 
微波萃取-气相色谱法测定尿液中的苯丙胺类毒品



摘 要:  建立了人体尿液中甲基苯丙胺 (MA) 、3, 4 -亚甲二氧基苯丙胺 (MDA) 、3, 4-亚甲二氧基甲基苯丙胺 (MDMA )的微波萃取-气相色谱 (gc) 测定方法。分别考察了萃取溶剂种类、用量、pH值以及萃取温度、时间等因素对萃取率的影响。

实验结果表明，尿液中MA、MDA、MDMA 的最佳提取条件为:调节尿样pH 为12，以环己烷为萃取溶剂，于40℃下微波提取10 min。在此条件下MA、MDA、MDMA的平均回收率分别为92.25%，85.94%和91.50%，相对标准偏差分别为5.5%，5.5%和6.1% ( n = 5) ，提取液经气相色谱-氢火焰离子化检测器(gc--FID )检测， 3种药物与基体得到了很好的分离，对尿液中MA、MDA、MDMA的最低检测限分别为10，20和20 ng /mL。该方法未对药物进行衍生化，是一种快速、准确、灵敏度高的同时测定尿液中MA、MDA、MDMA的方法。



    本文由王继芬1 , 　孙洪峰2 , 　叶能胜2 , 　谷学新2 , 　李文君1 , 　李　瑛1

(1. 中国人民公安大学刑事科学技术系； 2. 首都师范大学化学系；)合作完成有机胺类兴奋剂的检测方法，已经应用到滥用苯丙胺类毒品人群的尿样检测，获得较理想结果。现全文介绍如下。



前 言

苯丙胺 (amphetamine,又称安非他明) 类毒品是一类人工非法合成的有机胺类兴奋剂， 它主要作用于中枢神经和交感神经， 属于中枢神经兴奋类毒品，所以又称为苯丙胺类兴奋剂。目前，苯丙胺类毒品在我国滥用现象形势严峻，严重影响了青少年的身心健康和社会稳定。国内外文献报道苯丙胺类兴奋剂药物的检测方法主要有气相色谱法(gc ) [ 1, 2 ] 、高效液相色谱法( HPLC ) [ 3 ] 、毛细管电泳法(CE) [ 4 ] 、气相色谱-质谱联用法(gc-MS ) [ 5, 6 ]和高

效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS ) [ 7 ]等。其中体内检材中苯丙胺类毒品的分析研究是当前法庭科学研究的热点。尿液是检测分析滥用毒品应用最为广泛的体内检材。在对苯丙胺类毒品滥用者尿样的检验过程中，传统的前处理主要是液-液萃取和固相萃取[ 8 ] 方法。近年来, 固相微萃取[ 9 ] 、液相微萃取[ 5, 10 ]和微波萃取技术[ 11 ]已经广泛应用于法庭科学领域。其中微波萃取技术是近年来发展起来的一种快速高效、可自动控制制样条件的萃取方法。作者已采用微波萃取技术对人体血液中的甲基苯丙胺(MA )直接提取进行了研究[ 2 ] 。甲基苯丙胺、3, 4-亚甲二氧基苯丙胺(MDA ) 、3, 4-亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)是常被滥用的3种苯丙胺类毒品,本文在前期工作的基础上, 建立了同时检测尿液中MA、MDA和MDMA 的微波萃取-气相色谱分析方法。所建立的方法简单实用、选择性好及回收率高，已经应用到滥用苯丙胺类毒品人群的尿液检测中，获得了理想效果。



实 验

1　实验部分

1. 1　仪器、材料和试剂

　　Agilent 6890N 气相色谱仪(美国安捷伦科技公司) ，配氢火焰离子化检测器( F ID ) ; 日本岛津QP -5050 gc-MS 配CLASS-5000 数据处理工作站;MSP -100E微波萃取仪(北京雷鸣科技公司) ； 氮吹仪(北京八方世纪科技有限公司) ； Sigma 3K15高速冷冻离心机(德国) ；空白尿(采自健康志愿者) ；MA盐酸盐、MDA 盐酸盐和MDMA 盐酸盐对照品(国家麻醉药品实验室) ；甲醇(色谱纯) ； 乙酸乙酯、环己烷、氯仿、异丙醇、浓盐酸、无水甲醇、碳酸钠、碳酸氢钠和氢氧化钠均为分析纯。

1. 2　气相色谱分析条件

　　色谱柱：HP 25毛细管柱(30 m ×0.32 mm ×0.5μm ) ; 柱温采用程序升温: 120 ℃保持2 min, 以8℃/min升高到200 ℃,再以30 ℃/min 升高到280℃,保持5 min; 进样口温度280 ℃; F ID 温度300℃;载气:氮气, 流速310 mL /min, 分流比10∶1; 进样体积1μL。

1. 3　gc 2M S 分析条件

　　色谱柱: HP 21 毛细管柱( 30 m ×0.32 mm ×1μm ) ; 柱温采用程序升温: 100 ℃保持2 min, 以10℃/min升高到210 ℃,再以30 ℃/min 升高到280℃保持5 min; 进样口温度280 ℃; 传输线温度230℃; 载气:氦气,流速210 mL /min;不分流进样;进样

体积1μL。

　　离子源: 电子轰击离子( E I)源, 轰击电压115kV；扫描方式： SCAN；扫描范围: 40～400 u。

1. 4　标准溶液的配制

　　分别准确称取MA 盐酸盐9.92 m g，MDA 盐酸盐7.20 m g 和MDMA 盐酸盐7.14 m g 于2.0 mL容量瓶中,加入1 mL 甲醇使其完全溶解后定容至2.0 mL,混匀配制成浓度(以游离碱计算) 分别为4.00, 3.00和3.00 g /L 的标准储备液,密封保存于- 20 ℃。将标准储备液稀释成1.00 g /L 和0.100g /L 的混合标准溶液备用。

1. 5　样品前处理

1. 5. 1　微波萃取法

　　取2 mL 尿液于微波样品罐中，振荡摇匀,静置2 h。滴加2～3滴4 mol /L  NaOH。加入6 mL 环己烷，在微波功率85W 时按设定温度( 40℃)进行微波萃取10 min,，取出密封罐， 冷却至室温。把反应液转移到离心管中，以9 000 r /min 离心10 min。取上清液加2～3滴盐酸甲醇溶液,用氮吹仪在常温下吹干，分别用100μL 和300μL 甲醇定容。用10μL注射器取1μL进行gc-FID 和gc-MS测定。

1. 5. 2　液-液萃取法

取2 mL 尿液于密封锥形瓶中，振荡摇匀,静置2 h。滴加2～3滴4 mol /L  NaOH。加入6 mL 环己烷，振荡10 min, 把反应液转移到离心管中，以9000 r /min离心10 min。取上清液加2～3滴盐酸甲醇溶液,用氮吹仪在常温下吹干， 用100μL 甲醇定容。用10μL 注射器取1μL 进行gc--FID 测定。



2　结果与讨论

2. 1　gc -F ID 色谱图

　　在“1. 2”节色谱条件下, 微波萃取尿液样品中的MA，MDA，MDMA可以与基体干扰很好的分离,色谱图见图1。




2. 2　微波萃取条件的优化

2. 2. 1　不同溶剂对萃取率的影响

　　分别取6 mL乙酸乙酯、环己烷、氯仿和异丙醇的混合溶剂(体积比为9∶1)以及环己烷和甲苯的混合溶剂(体积比分别为1∶1，2∶1，5∶1，11∶1)作为萃取溶剂, 按“1.5.1”节的微波萃取方法处理样品。实验结果表明：乙酸乙酯、氯仿和异丙醇的混合溶剂作为萃取溶剂时, 基体对药物有明显的干扰。环己烷作为萃取溶剂时，干扰很小，提取率较高。环己烷和甲苯的混合溶剂作为萃取溶剂时，在提取率增大的同时，MDA、MDMA 出峰处的干扰明显增大。因此选择环己烷作为萃取溶剂。

2. 2. 2　萃取温度对萃取率的影响

　　取6 mL 环己烷作为萃取溶剂, 分别在25， 30，40，50，60，70和80 ℃下进行微波萃取，其余步骤同“1.5.1”节所述。实验结果表明:随着温度的升高，萃取率升高，但是高于50 ℃时,， 干扰增大。故选择40 ℃作为最佳的萃取温度。

2. 2. 3　萃取时间对萃取率的影响

　　取6 mL 环己烷作为萃取溶剂, 在40 ℃下, 分别微波萃取2, 5, 8, 10, 12, 15 min, 其余步骤同“1.5.1”节所述。结果 (见图2) 表明: 随着时间的增加，萃取率明显增加，10 min 之后萃取率变化不大，故选择10 min作为萃取时间。