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主题：【求助】求助：glu和gaba的浓度与峰面积的线性关系极差？

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bhnchnuo
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发表于：2009/12/06 00:32:44 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

用OPA作为衍生剂，waters荧光检测仪，监测脑透析液中的glu和gaba，这两种物质的浓度大概是30-50nmol/L，每个样品20uL。用外标法，在走10nmol/L~100nmol/L标准样的时候，glu和gaba的浓度与峰面积的线性关系极差。可笑的是：有时候10nmol/L的峰面积居然与50nmol/L的峰面积差不多。走了好几次了，真是没办法。

另外：走1umol/L~10umol/L的标准样时，线性很好

请问有什么办法解决，或者用别的衍生剂，能测到10nmol/L的glu和gaba，先谢过了！
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2009/12/6 9:32:42 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
检测方法是成熟的吗？OPA加入的量是不是足够，衍生过程是否完全等有没有检查过？
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bhnchnuo
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2009/12/6 9:57:41 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多谢！

检测方法就是用参考文献的，都大同小异，缓冲盐控制ph值6.0，然后用缓冲盐与甲醇混合梯度冲洗。

OPA加入的量应该是足够的，因为用同样剂量OPA衍生剂衍生1uM，2.5uM，5uM，10uM的glu和gaba的时候，线性就很好。

衍生时间是90秒，但是不知道该怎么判定衍生完全。
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有水有渝
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2009/12/6 10:54:04 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
那你能不能把样品也处理到线性好的范围内呢，衍生后的样品是否稳定，如果稳定，那么衍生90s，与衍生10min和20min的比较，面积应该是一样的，如果后的更大，那就可能衍生时间要延长了，我想10-100的浓度也可能不在浓度不在线性范围内才不成线性。
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bhnchnuo
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2009/12/6 16:29:15 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
OPA与上述氨基酸反应90s反应最完全，时间长了就不稳定了。我一般是读秒90s后加入反应终止剂，结果还是线性差。
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celiajia
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2013/7/8 15:36:33 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问你们进行这个衍生反应的时候加什么作为反应终止剂？？
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