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主题：【讨论】为何会出双峰？

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gunterz
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2010/1/5 12:49:34 31楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换个思路吧  样品稀释一百倍再试试看  有可能是柱子过载了
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hrcren
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2010/1/5 16:51:07 32楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 gunterz(gunterz) 发表:
换个思路吧  样品稀释一百倍再试试看  有可能是柱子过载了


这个恐怕不行，要是稀释一百倍，估计都快没信号了
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tyys98
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2010/1/6 0:18:40 33楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hrcren(hrcren) 发表:
原文由 pandora98(pandora98) 发表:
这个有两个可能，
一个是样品不稳定，在稀释剂中存在互变异构
另外一个可能是稀释剂有问题，稀释剂尽量多加水比较好


我觉得有两种可能，要么是样品不稳定产生异构，要么是流动相的酸性使部分样品酸化成了季铵盐，个人认为后一种的可能性更大一些，因为感觉这个样品还是蛮稳定的，产生异构的可能性不大

后来我们用甲醇直接稀释后直接进样就只有一个峰了，现在唯一担心的就是，用甲醇做稀释剂会不会因为甲醇与流动相（甲醇：水=70：30）的极性差异而产生溶剂效应，因为原来在用流动相溶解跟踪样的时候，会产生分层现象（跟踪样的反应体系是甲苯溶剂体系），用甲醇溶解，不会产生分层现象

现在做下来的结果，大概似乎好像maybe可能是用甲醇的结果要稍微好一些，因为甲醇把双峰变成了单峰，而且消除了分层现象，至于进到柱子里面以后甲苯还会不会与水分层，那个，我看不见，估计应该影响不大，因为做产品没有什么大的影响，做跟踪有丁点影响也看不出来，原来的跟踪样本来就经常出些乱七八糟的不规则的大包，梯形、馒头形，从头拉到尾的那种，积分的时候根本都不看的那种

首先排除色谱柱的问题，因为可以看到后边7分、15分的两个杂质峰形正常。
第二，根据你的这些叙述，我的猜测是流动相不太合适，具体来说是缓冲液的pH值以及缓冲容量不合适，再具体一点，是pH值过低或缓冲容量不足（相对于进样量而言）。因为这种化合物在酸性条件有可能质子化，生成季铵盐或者进一步重排为芳香醇结构？最大可能是注进的样品在管道中酸性流动相中部分转化为季铵盐，由于缓冲容量不足另一部分仍为原结构，进样后在后续流动相作用下逐渐转化为季铵盐形式形成后边的峰，两者峰面积会随每次进样条件的细微差异产生微妙的变化。
解决方法：
1）在更强的酸性条件下分离
2）适当增加缓冲容量
3）用流动相配制（稀释）样品工作液（浓度更高的贮备液可依旧）。
如果以上方案有效，就可以证实我的推测。从仪器保养的角度，不提倡使用高浓度的缓冲盐，所以第3点格外重要。
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tyys98
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2010/1/6 0:44:17 35楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
根据你的描述首先可以排除色谱柱的问题，因为后面7分、15分的峰都很正常。我的推测是流动相的问题。具体说是pH值偏高或缓冲容量不足（相对于进样量而言）。因为这种成分在酸性条件下会质子化，如果酸不够用就会出现两种形态。解决办法：
1）提高缓冲容量
2）降低pH值
3）用流动相稀释样品溶液（浓度较高的贮备液依旧，工作液用流动相来稀释即可）。
以上办法中3更可取，1最差（不利仪器保养）。
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qingping011700
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2010/1/6 9:57:37 36楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子污染了吧
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qinglei123
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2010/1/15 15:40:20 40楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
调整一下流速试试看！
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raul-lei
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2010/1/16 15:59:19 41楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
也有可能是保护柱芯的问题，前几天我也遇到这种情况了，换了个保护柱芯就好了。你可以试试。
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yankunsu
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2010/1/16 21:21:05 42楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我认为是流动相的问题。流动相缓冲容量和PH值不合适建议使用醋酸铵和甲醇试试，PH跳到3.8试试
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wanghongmei1123
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2010/1/18 10:48:55 43楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很可能是柱子坏了，建议更换一支试试。
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yaolihu523007
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2010/1/18 10:55:03 44楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我估计是流动相的问题！
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