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液相色谱（LC）
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主题：【讨论】流动相改变，保留时间不变？？？

浏览0 回复13 电梯直达
cherry39
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发表于：2010/01/06 10:55:35 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
昨天我用waters液相色谱分离合成的硝基咪唑，发现两个很奇怪的现象，希望各位大侠帮忙分析分析。
（1）流动相的组成分别是90%、80%、20%CH3OH，剩余的是H2O,都是一个峰，保留时间都是2.5min；
（2）流动相的组成是80%CH3OH，20%的三乙胺-磷酸缓冲溶液，当缓冲溶液的pH值为3.0和9.0的时候，出峰的保留时间都是3.0min，但是与不加缓冲溶液的比较，峰高下降了很多。其余的条件都一样
  我先谢谢各位了！
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2010/1/6 11:07:33 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是否该物质不被保留？
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cherry39
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2010/1/6 11:13:05 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 老多(emoc98311) 发表:
是否该物质不被保留？


我也这么认为的。可是第二个问题就不会解释了。
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sunpengwjh
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2010/1/6 11:14:44 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是物质和固定相之间没有作用力？
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冷冷的冰雨
xy4585618
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2010/1/6 11:16:05 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
2.5分钟有可能是溶剂峰
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cherry39
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2010/1/6 11:31:17 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xy4585618(xy4585618) 发表:
2.5分钟有可能是溶剂峰


请问溶剂峰保留时间有那么长吗？2.5分钟
我不是特别清楚呢
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有水有渝
xky0230699
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2010/1/6 11:31:35 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
物质的结构是如何的，能不能上传一个。波长选择有没有对，有没有可能在你选择的波长下样品没有吸收，2.5分钟那个峰高是多少？
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cherry39
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2010/1/6 12:16:25 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xky0230699(xky0230699) 发表:
物质的结构是如何的，能不能上传一个。波长选择有没有对，有没有可能在你选择的波长下样品没有吸收，2.5分钟那个峰高是多少？


结构就是一个咪唑环，一个2位取代的硝基。
波长用的是370nm，做过紫外的。
2.5分钟那个峰高随物质的浓度的升高而升高，应该不是溶剂峰吧。
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Last edit by cherry39
muziying114
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2010/1/6 14:47:21 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
（1）感觉上“硝基咪唑”极性强，在反相柱上保留相对较弱，上述两种情况中可能是均没有保留。建议增大水相的比例，在柱子允许的情况下，可以试试100%的水相（如不能确定在哪个条件下以分子的形式存在，最好是两个PH值条件下都试一下）
（2）溶剂峰的出峰位置可以大概计算一下，基本上等于“管路体积+柱子体积”除以“流速”
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essen_CC
essenyinghong
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2010/1/6 15:26:22 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果楼主用的是反相色谱，建议可以先测定一下死时间（反相色谱可用不保留化合物，如硝酸钠210nm检测），是不是你的东西在该条件下没有保留，所以无论用什么比例的有机相都会出峰时间不变。
使用缓冲盐，峰高变化了，是不是因为峰形变差了，矮了？峰面积有么有什么变化？我们定量一般用峰面积法，尤其是在摸条件的时候。保留时间不同，峰高一定不一样的。
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cherry39
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2010/1/6 17:58:17 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 essenyinghong(essenyinghong) 发表:
如果楼主用的是反相色谱，建议可以先测定一下死时间（反相色谱可用不保留化合物，如硝酸钠210nm检测），是不是你的东西在该条件下没有保留，所以无论用什么比例的有机相都会出峰时间不变。
使用缓冲盐，峰高变化了，是不是因为峰形变差了，矮了？峰面积有么有什么变化？我们定量一般用峰面积法，尤其是在摸条件的时候。保留时间不同，峰高一定不一样的。

  峰形还变好了，更对称了，峰面积也变小了很多。
  明天实验再用硝酸钠210nm检测，测定一下死时间看看。
  谢谢您啊！
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