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主题：【分享】正相HPLC色谱柱的清洗、再生和维护方法

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plexu

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发表于：2010/02/20 11:22:22 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子已被samanthalas设置为精华；

正相HPLC色谱柱的清洗、再生和维护方法

正相柱一般包括硅胶、CN基、Diol和氨基柱。最好是事先采用预防性的措施，如样品过滤、用预柱和保护柱的方法，以尽可能的减少色谱柱的污染。下面的方法有助于延长正相色谱柱的使用寿命，运用方法中的理念，也可以用来诊断解决色谱柱使用中的疑难问题。

清洗步骤

1. 每次清洗都用低流速起步，当检测到柱压稳定在一定水平后再增加流速。

2. 先用10柱体积不含其它添加剂的流动相中的弱溶剂，如正己烷、氯仿等反冲色谱柱。

3. 再用20柱体积的诸如二氯甲烷或异丙醇等流动相中的强溶剂反冲色谱柱。

4. 100%异丙醇的极性和正相洗脱能力足够把正相柱上的所有残留物清洗掉。如果异丙醇的清洗还不足以恢复色谱性能，则说明色谱柱柱床有塌陷和空洞了，用清洗的方法无法解决这个问题。色谱症状和清洗再生过后的色谱性能恢复情况往往能提供色谱柱真正存在问题的线索。

正相柱除水分

诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状，可以归因于固定相的变化，而填料可能还是完好的。在正相色谱中，固定相的水分含量常常是个影响选择性的关键参数。大部分溶剂都内含有小部分的溶解水分（正己烷20摄氏度下水分含量是0.0111% w/w ), 正相色谱柱中水分含量随时间的不同是导致选择性变化的最普通的一个因素。

用含2.5 % 二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5 % 冰醋酸的正己烷冲洗色谱柱30个柱体积，可以去除色谱柱中水分并恢复色谱柱原来或所需要的选择性。

考虑到从流动相和色谱柱中完全去除水分非常困难，还有个尚有争议的简单方法可以采用。使用水分含量可控的流动相（譬如和水半饱和）以一直保持最初的方法选择性，而不需要每次进行冗长的除水分步骤。不管何种情况，最重要的都是保持水分条件的一致性。

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小卢

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2010/2/20 12:44:33 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

是不是正相色谱柱对水特别明感呢？是其独特的填料照成的？

该帖子作者被版主 samanthalas加 2积分， 2经验，加分理由：欢迎参与讨论

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plexu

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2010/2/20 20:39:12 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

正相柱就是固定相极性比流动相极性大,对于正相柱,流动相极性越大,洗脱能力越强,出峰时间越快。正相柱一般用的流动相比较多的是正己烷等非极性溶剂,水是强极性溶剂,正相色谱中用的量很少，水含量稍微一点的小变化，就会对出峰时间有很大的影响，所以正相色谱对水分含量极敏感。正相填料，硅胶、氨基、CN基等，本身并无特殊，也不是碰到水就会损坏的。

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