主题：【求助】请教关于过柱子的详细操作问题

原文由 tomatoyezi(xiaoanxiaoye) 发表:
做绞股蓝的含量测定：
山东省中药材标准里面要求处理完的样品加50%甲醇5ml使溶解，加至中性氧化铝柱（5g，内径1.5cm，干法上柱），用50%甲醇5ml洗脱，收集洗脱液。
  我没做过过柱子，谁帮帮忙告诉我详细的方法啊？有什么详细的资料介绍过柱方面的啊？

原文由 雾非雾(mcds) 发表:
有5g成品的氧化铝SPE柱，个人觉得5ml的洗脱体积有点小。

原文由 chaifayong(chaifayong) 发表:

原文由 tomatoyezi(xiaoanxiaoye) 发表:
做绞股蓝的含量测定：
山东省中药材标准里面要求处理完的样品加50%甲醇5ml使溶解，加至中性氧化铝柱（5g，内径1.5cm，干法上柱），用50%甲醇5ml洗脱，收集洗脱液。
  我没做过过柱子，谁帮帮忙告诉我详细的方法啊？有什么详细的资料介绍过柱方面的啊？

如果让我操作，就不管多少ml了，即使用10ml溶解也没关系，上了样后，再用10或20或更多的溶剂去洗脱，没关系，多了，浓缩呗。
但标准里说的用5ml洗脱，这绝对的不合实际，估计洗脱液连一滴也收集不到。整个10ml可能还没把柱子润透呢。
当然条件允许可以用SPE柱就另说了。估计标准不是这个意思，否则也不会说是干法装柱了。
不一定对，请大家多多指教。

原文由 chaifayong(chaifayong) 发表:

原文由 tomatoyezi(xiaoanxiaoye) 发表:
做绞股蓝的含量测定：
山东省中药材标准里面要求处理完的样品加50%甲醇5ml使溶解，加至中性氧化铝柱（5g，内径1.5cm，干法上柱），用50%甲醇5ml洗脱，收集洗脱液。
  我没做过过柱子，谁帮帮忙告诉我详细的方法啊？有什么详细的资料介绍过柱方面的啊？

如果让我操作，就不管多少ml了，即使用10ml溶解也没关系，上了样后，再用10或20或更多的溶剂去洗脱，没关系，多了，浓缩呗。
但标准里说的用5ml洗脱，这绝对的不合实际，估计洗脱液连一滴也收集不到。整个10ml可能还没把柱子润透呢。
当然条件允许可以用SPE柱就另说了。估计标准不是这个意思，否则也不会说是干法装柱了。
不一定对，请大家多多指教。

原文由 chaifayong(chaifayong) 发表:
具体操作：称取足量的中性氧化铝于合适的柱中，底部若为烧结物，可直接加入氧化铝，若为活塞，可用脱脂棉少许堵住，用吸耳球轻敲柱边，使顶部成一平面，再于其上加少许脱脂棉，即可。至于上样，沿柱内壁倾倒入即可。
依我看，某些标准的操作可行性，远没有那么标准，有些就纯属多余。这里，氧化铝我觉得是除杂，如果待测成分分离度符合要求，完全可以略去这一步。
请您试试吧。

原文由 tomatoyezi(xiaoanxiaoye) 发表:
1、做绞股蓝的含量测定：
山东省中药材标准里面要求处理完的样品加50%甲醇5ml使溶解，加至中性氧化铝柱（5g，内径1.5cm，干法上柱），用50%甲醇150ml洗脱，收集洗脱液。
2、保健品中总黄酮的测定
试样处理：称取一定量的试样，加乙醇定容至25mL，摇匀后，超声提取20min，放置，吸取上清液1.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25mL。此液于波长360nm测定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量。

我没做过过柱子，谁帮帮忙告诉我详细的方法啊？有什么详细的资料介绍过柱方面的啊？

想问一下：转入层析柱之前，层析柱是用什么溶剂处理呢（或者应该叫淋洗吧，反正它应该是湿的吧）

          是不是问题1的应该中用甲醇呢？
          那么2问中用什么呢，用苯吗？
      谢谢指教，我还是不是很清楚，有什么书是详细介绍这方面的吗？谢谢大家了！

原文由 chaifayong(chaifayong) 发表:

原文由 tomatoyezi(xiaoanxiaoye) 发表:
1、做绞股蓝的含量测定：
山东省中药材标准里面要求处理完的样品加50%甲醇5ml使溶解，加至中性氧化铝柱（5g，内径1.5cm，干法上柱），用50%甲醇150ml洗脱，收集洗脱液。
2、保健品中总黄酮的测定
试样处理：称取一定量的试样，加乙醇定容至25mL，摇匀后，超声提取20min，放置，吸取上清液1.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25mL。此液于波长360nm测定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量。

我没做过过柱子，谁帮帮忙告诉我详细的方法啊？有什么详细的资料介绍过柱方面的啊？

想问一下：转入层析柱之前，层析柱是用什么溶剂处理呢（或者应该叫淋洗吧，反正它应该是湿的吧）

          是不是问题1的应该中用甲醇呢？
          那么2问中用什么呢，用苯吗？
      谢谢指教，我还是不是很清楚，有什么书是详细介绍这方面的吗？谢谢大家了！

我还从没听说要先用苯洗脱的聚酰胺呢
用苯先洗脱，可能是先洗去其中的极弱极性的成分吧，由于黄酮类成分与聚酰胺有着非常好的可逆性的吸附，所以苯不太可能将黄酮类成分洗脱下来。但我认为这一步可能是多余的，略去苯洗一步，甲醇也不会把杂质洗下来，另外，如果苯液流入甲醇液中，会将甲醇液的本底提高。
我不知道中性氧化铝有什么特殊的预处理，但活化是没有必要的，因为标准中没说活化到何种程度。
至于聚酰胺是有预处理的，用乙醇煮或洗至洗脱液加水变澄清，再用水将乙醇洗净。不过，我在操作中，有时也用过未经处理的聚酰胺，效果也很好。推荐用一下。
我认为这种方法是一种简单的自制的SPE方法，自己装柱，前面已说过，上样，再洗脱即可。起到净化，浓缩的作用。[/quot]

十分感谢