你好,回答其中几个问题。
1 蛋白缓冲液问题:一般目标都是获得带活性的蛋白。 在整个蛋白制备过程中,有许多破坏活性的因素,具体问题具体分析,它们可能是某些敏感离子、添加剂、pH、有机溶剂、温度、光线等。在所选缓冲盐对目的蛋白活性没有破坏的条件下,使用缓冲液的目的是获得相对稳定的pH环境,这只是保住目的蛋白活性的一个方面。但是如果你的目的蛋白是个耐折腾的,在很宽酸碱度下都有活性,那水也未尝不可。关键的是综合考虑一直维持住活性。
2 蛋白含量测定方法就有限的三四种,比如280nm、福林-酚、考马斯亮蓝法、BCA法。直接用紫外测280nm的适用于层析分离出的较纯蛋白,其它的都是反应显色的,对灵敏度、抗干扰性各有优缺点。不妨比对一下你的具体蛋白来源和性质选择。
3 不知。
4 实践出真知。以目的蛋白活性和含量为指标,选不同时间超声破碎比较活性与含量,超声时间越长含量可能越高活性可能越低,最后权衡选哪个条件或者换方法。