主题：【转帖】中药生物活性测定指导原则起草说明

1.2.2 中药生物活性测定的研究历史和使用现状
中药是天然物质，化学成份复杂，与采用生物活性测定的生物制剂有许多相似之处，如果采用生物活性测定法来进行中药质量控制，的确能弥补化学测定不能体现中药生物活性的缺点。多年以来，很多药学同仁都在思考如何借鉴这种生物活性测定法进行中药质量控制，并进行了许多拓展性的研究。1951年我国生药学家楼之岑院士报告了利用小鼠口服植物性泻剂（中药大黄）排出湿便效应，建立了泻下药的生物检定法，成为中药现代生物检定方法的最早报告^【3】，1997利用抗菌效应测定大蒜油中大蒜辣素和大蒜新素等活性物的含量^【4】，2004年杨明华采用子宫平滑肌建立了益母草制剂的生物检定法^【5】，2005年张恩户等采用体外抑菌法测定连翘及其制剂的抗菌活性^【6】。西欧和日本也早就采用生物效应法来进行植物药活性提取物或汉方药的拆方试验，以良好的生物效应符合国际公认的开发标准，推动了传统药物在西医药一统天下的欧美得到接受^【7】。这些研究，因为操作稍显繁琐复杂，精密度和重现性差，不适合发展为成熟的生物检定方法，在实际尤其是中药质量标准中没有得到运用。但也提示我们中药生物活性测定在理论与实践上的可能性。
生物活性测定在中药质量控制实践中也逐渐开始采用，如2005年版药典中水蛭的含量测定，消栓肠溶胶囊国家药品标准WS3－571（Z－67）－2005（Z）的效价测定，均为借鉴生物制品中酶效价测定方法。但是这两个方法只制定了控制下限，相对简单，误差较大。
近年来随着生命科学的发展，以现代生物学理论为前提和基础，选择一个恰当的指标，对中药作一个整体上的功能活性评价，并以这种生物效应的量化考核做依据来评价中药的质量，方法日益成熟。
1.2.3 中药生物活性测定的有利条件已经具备
1.2.3.1 确切的疗效是制定中药生物活性测定的前提。
多数中药制剂经临床验证具有确切的疗效和比较明确的“功能主治”。从理论来说，临床确定的疗效，必然是因为存在良好的生物效应，这是中医药生命力的根本，也是制定中药生物活性测定的最有利和有力的前提。中药生物活性测定，一定应选择临床大量应用，疗效确切，人民群众高度认可的药物首先进行，因为其效应好容易制定生物活性测定，同时影响力大有利于中药生物活性测定的推广。如十滴水、藿香正气液等，疗效十分确切，使用广泛，也是北京奥运要求必备的药品。
1.2.3.2  药效学研究和药理学机制研究已经很充分。
1.2.3.3  中药炮制和中药制剂工艺的不断进步，使生物活性测定的重现性和可靠性得到提高。
1.2.3.4  人才和技术储备已经成熟
药检药理人员具备生物检定和中药药理学的知识和技能
二、中药生物活性测定指定原则起草的意义和基本情况考虑
在当前中药质量标准存在相当明显的尴尬现状的情况下，需要采用生物活性测定来解决现在质量标准的不足并推进中药质量标准的进步，同时生物活性测定的技术方法条件也基本具备。制定本指导原则，就是鼓励、规范，、更重要的是推动生物活性测定在中药质量标准中的运用，这是指定本制定原则的初衷。

基于这个初衷，本指导原则有一下几点说明：

2.1  强调是中药的生物活性测定：

中药生物活性测定，包括中药饮片、中药汤剂和中药成方制剂。如单指中药制剂，不够广泛和准确，排除了其他两种中药，而且在05年版中水蛭已经采用抗凝血酶方法进行质量控制。

中药，从现代医学来看具有多组分、多途径、多靶点的特点，不仅是成分不清晰，甚至是主要作用也不明晰，其按照现代医学进行的主要药效学，往往不是一个主要方面，而是多个主要药效学。因此，中药的生物活性测定，可以不是一个试验，可以采用几个简单的试验，从几个不能方面的生物效应来控制其质量，尽量多地反应其“功能主治”，从而更好控制其质量。

中药，是在中医药理论下指导运用的药物。中药的基本理论，一些与现代医学有一定相关性解释，如活血化瘀、行气止痛、清热解毒等，可以优先考虑进行生物活性测定，不一定完全反应中药的本质特点，但可以达到以良好的生物效应控制标准符合国际公认的质量准则，从而推动中药在临床中的使用，可以推动中药质量标准的进步。对于另外的中医药的基础理论，如寒热温凉，中医证的辨证论治，现在没有确切的现代概念的认识，但其本质也是一种生物体的过程和反应，随着现代科学的发展，如基因组学、蛋白组学、混沌医学等的发展，也许可以将中药的药性、功能与主治等关联起来，出现新的、具有变革性的生物检定方法。

2.2 中药的生物活性测定，是广义的活性检定。

中药的生物活性测定，不仅包含整体动物的生物检定，还应包括体外试验如细菌、细胞、酶等试验系。凡是能构证明中药的生物活性的试验系，我们都可以考虑采用，因为这种方法，相对于含量在万分之几或千分之几的化学测定来说，其临床意义更大。中药的作用多途径，多靶点，能控制一点就是一点，有控制和证明，应该说就比没有控制和证明强，应该说就更科学，对临床更负责任。

中药生物活性测定，应本着有利于临床用药安全有效的原则，不强求一开始就建立量值测定方法。采用单剂量或多剂量的试验，说明中药具有某些生物活性，如单剂量的中药抗小鼠脑血栓形成测定试验，这种有利于临床安全用药的试验，尽管不是量值测定而是类似于鉴别和限值检查的试验，也是中药生物活性测定的可采用方法。这也是为何命名为生物活性测定而不是生物活性检定的原因。生物检定是一种测量的工具，最好与标准品比较，通过等值反应进行计算，得到供试品的具体相对测定值，这是理想的情况，需要符合几个基本前提和假设。中药有效成分不清楚，机制和途径不明晰，量效和时效的研究很不充分，这些都是需要随着时间来逐步深入、完善认识的，我们不能脱离这个现实。根据这一情况，只能说尽量要求建立2.2或3.3法的等值量反应、或标准曲线方法的量值测定方法。

2.3 中药生物活性测定指导原则，尽量规范但不作详细的要求

中药生物活性测定，处于探索的初始阶段，各种方法、原理等差异很大，因此无法对方法学等进行严格的详细的要求。本指导原则，只尽量对方向性的原则问题进行说明，包括中药生物活性测定基本定义、基本原则、基本内容，也对方法学的重复性和精密度进行简单要求。在实际的工作中，应具体问题具体分析，本着有利于临床安全用药的原则，尽量在质量标准中制定生物活性测定的方法。

随着中药生物活性测定方法研究的广泛开展和完善，逐步对指导原则的内容和要求进行完善。

三、中药生物活性测定的基本定义和说明

中药生物活性测定是以中药的生物效应为基础，以生物统计为工具，运用特定的实验设计，测定供试中药的效价或毒性，从而起到控制中药质量的检定方法。

此定义，参考了生物检定的定义，说明了基础原理、方法特点、目的，同时强调是具有中医药特点的质量控制方法。

在3家以上实验室能够重现

四、中药生物活性测定的基本原则

中药生物活性测定，是测定生物活性进行质量控制的方法，既可以是说明生物活性的鉴别方法，也可以是控制毒性的限量检查，更鼓励采用通过试验设计进行确切的的效价测定。因此，生物活性测定必须要有规范的确定的试验方法系统，必须符合药理学的随机、对照、重复的基本原则，具备简单、精确的特点。同时，作为中药质量控制的生物活性测定方法，必须不违反中医药理论，并最好能体现中医中药的特点。

生物活性测定的目的是判定中药药品的质量，必须对判定标准进行明确的、无歧义的说明。

五、中药生物活性测定方法设计的基本内容

中药生物活性测定的质量控制方法，在研究中应详细说明以下内容：实验方法的原理和观察指标、试验体系、观察测定指标及其测定方法、对照设置、剂量设计和结果计算、试验有效性和结果判断。中药的生物活性测定，应结合具体问题具体分析，不同的试验设计要求不同。

5.1  实验原理和观察指标  应有明确的实验方法的原理，此原理能够体现和说明药物的“功能主治”，能体现药物的主要生物效应。试验原理和观察指标的选择，需查阅大量文献，从中医药理论出发，结合现代研究分析作用机制和途径，选择最敏感、最能体现药物功能主治的方法体系。由于中药的药理作用具有多效性，生物活性测定的指标选择不要求完全反应功能主治，但原理和观察指标必须与药物的功能主治密切相关。

测定指标应客观，可以是量反应指标，也可以是质反应指标。观察描述性的指标最好不用。应对指标测定的方法进行详细说明，包括仪器、试剂配制、测定过程描述等。

5.2  受试药品    应选择疗效确切，作用途径和机制研究比较充分和清楚的中药，如中药注射剂或危重病症用药品。如果是饮片，应尽量来源（包括产地、分类等）清楚，如果是成方制剂，则应有确定的生产工艺，中试以上的样品，理化分析符合质量标准要求。方法学建立中最好每生产单位使用3批样品以上。

5.3  试验系    生物活性测定所用的体系载体，包括整体动物、离体器官和组织、细胞、亚细胞器、受体、离子通道和酶等。应选择背景资料清楚、影响因素少、成本低且简单易行的体系。试验系的选择与试验原理和测定指标密切相关，应选择灵敏，影响因素少的试验系。为更加符合国际规范，尽量选择可控的体外试验（符合条件的整体动物试验当然也可用），并尽可能细致地研究各种因素的影响，采取必要的措施进行准确控制。

如采用实验动物，应说明种属、品系、性别和年龄。如为其他试验系统，则应就系统的敏感度、灵敏度和重复性，以及背景资料进行说明。

5.4  对照设置  试验设计应考虑采用合理的空白、阴性对照，如采用模型动物一般应设模型对照和阳性对照，以说明操作正确性和试验的有效性，特别稳定的模型，可以不采用阳性对照。

效价测定中标准对照组的设定  生物活性测定是采用受试物与标准对照进行比较，通过生物统计计算后控制受试药品质量的方法。生物活性测定进行中药质量控制，选择合适的标准品是试验的关键。由于中药的复杂性，最好采用经过符合生物检定规范进行协作标定确定生物效应的中药标准品，也可以考虑采用已确定生物效应的西药对照等。标准对照品，必须有良好的生物效应并具备可重服量－效关系。

5.5  试验设计

剂量设计  如为活性鉴别试验，建议只设一个剂量，此剂量刚好能够保证中药的生物效应。方法学研究时，应采用多剂量试验充分说明用此剂量检定时，符合规定的可以保证生物效应，而不符合规定的药物则一定有质量问题。建议整体动物试验剂量按公斤体重计算不应超过人临床剂量的30倍。如为效价测定的多剂量试验，不同的剂量之间的生物效应应有显著差异，应根据具体情况进行2剂量、3剂量等剂量设计，设计合理的剂量比关系，以符合生物检定统计学的要求，并尽量使试验简单易行。效价测定的单剂量试验，则药物剂量最好在标准曲线的中值附近。

给药途径  给药途径应与临床拟用途径一致。如采用不同的给药途径，应说明理由。

给药次数  根据药效学研究合理设计给药次数。

5.6  统计与结果  应根据详细的试验记录，对结果进行定量和定性统计分析，说明具体的统计方法和选择理由，同时应注意对个体试验结果的评价。生物活性测定，必须对误差控制进行说明，试验成立的判定依据应符合药典生物检定统计的要求，最好能够有确定FL％限值。

5.7  判定标准  生物效应检定一定要能够反应出药物的生物效应的临床意义，检定标准应能就此作出说明，并规定判定的具体标准。判定标准的说明必须明确的、无歧义。

六、中药生物活性测定方法学验证的基本要求

方法学的验证，是为了保证中药生物活性测定所采用方法本身的质量，目的是证明采用的方法适合于相应的检测要求。方法学验证的过程和结果均应做好详细记录，在质量标准的起草说明和修订说明中进行说明。

由于中药生物活性测定的刚刚起步，生物活性测定的内容很广，形式多样，本着具体问题具体分析的原则，指导原则仅要求进行方法学考察，不规定具体内容，也不对准确性和精密度等提出具体要求。

6.1  实验体系影响因素考察与最佳因素的确定，说明试验系的选择性和准确性。选择性是指不被目标物外的其他成分（如杂质、基质等）所干扰，准确、可到地测定目标物的方法。应尽量采用选择性好的方法，以更准确说明中药的生物效应。准确性，是指真实值或认可的参考值与测量值之间相近的程度，生物活性测定的准确性，主要是对误差的估计以及统计有效性的说明。
6.2  精密度考察  精密度是指在规定条件下对均质样品进行多次检测，所得结果之间接近的程度。精密度可以重复性、中间精密度、重现性三种方法表示。精密度通常以多次测量结果的变异性、标准偏差或变异系数表示，本指导原则要求进行精密度考察。
重复性：在同样的操作条件下，较短时间间隔内，若干次重复实验的精密度。一般要求进行3批样品，每批3次。鉴别试验不得出现不同结果，效价测定试验，每批样品测定结果的变异性不得大于20％。
中间精密度：实验室内部条件改变，如不同人员、不同仪器、不同工作日，重复实验的精密度。
重现性：不同实验室之间的精密度。新建的生物活性测定，必须

好象没完啊，楼主继续啊

应该是没有转贴完,不过个人认为中草药还是古老的水蜜圆最可信.

原文由 穿越时空(fscmj) 发表:
应该是没有转贴完,不过个人认为中草药还是古老的水蜜圆最可信.

呵呵，不一定啊！现在的药材品种混乱，质量很难保证