原文由 lichao1986(lichao1986) 发表:
UPLC柱的粒径很小,蛋白很容易堵塞柱子,对于血样的处理常采用的就是沉淀蛋白和液液萃取法,沉淀蛋白法是一种相对脏的样品处理方法,而在用UPLC/MS中测定生物样品常采用的就是液液萃取法,而且在使用乙腈:甲醇沉淀蛋白时常用3:1的比例,同血浆的比例至少在1:4左右;而且你在梯度洗脱中流动相的比例我认为不是太好,一般采用梯度,等度同时洗脱方法,而且不从0%开始,常用是在10%左右甲醇开始,而且终止比例一般在90%
原文由 littlefish77(littlefish77) 发表:原文由 lichao1986(lichao1986) 发表:
UPLC柱的粒径很小,蛋白很容易堵塞柱子,对于血样的处理常采用的就是沉淀蛋白和液液萃取法,沉淀蛋白法是一种相对脏的样品处理方法,而在用UPLC/MS中测定生物样品常采用的就是液液萃取法,而且在使用乙腈:甲醇沉淀蛋白时常用3:1的比例,同血浆的比例至少在1:4左右;而且你在梯度洗脱中流动相的比例我认为不是太好,一般采用梯度,等度同时洗脱方法,而且不从0%开始,常用是在10%左右甲醇开始,而且终止比例一般在90%
您好,非常感谢您的指点,可是您说的液液萃取法我没有看懂,能说具体点吗?是乙腈:甲醇:血浆=3:1:4吗?谢谢!
原文由 风之彩(juju11) 发表:原文由 littlefish77(littlefish77) 发表:原文由 lichao1986(lichao1986) 发表:
UPLC柱的粒径很小,蛋白很容易堵塞柱子,对于血样的处理常采用的就是沉淀蛋白和液液萃取法,沉淀蛋白法是一种相对脏的样品处理方法,而在用UPLC/MS中测定生物样品常采用的就是液液萃取法,而且在使用乙腈:甲醇沉淀蛋白时常用3:1的比例,同血浆的比例至少在1:4左右;而且你在梯度洗脱中流动相的比例我认为不是太好,一般采用梯度,等度同时洗脱方法,而且不从0%开始,常用是在10%左右甲醇开始,而且终止比例一般在90%
您好,非常感谢您的指点,可是您说的液液萃取法我没有看懂,能说具体点吗?是乙腈:甲醇:血浆=3:1:4吗?谢谢!
不是萃取法,是直接沉淀法。一般来说乙腈的体积至少是血浆体积的3倍,甲醇4倍,我估计lichao的说法是将甲醇和乙腈以3:1比例混合后,然后再和血浆以4:1的比例来沉淀。不过,你用UPLC,强烈建议不要用蛋白沉淀法,很容易堵住子,不过如果你的样品量够多,可以过滤后再进样。