实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8091923今日发帖：10 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
厂商论坛
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【固相萃取讲座】问答节录

浏览0 回复36 电梯直达
相关阅读
Eda
diamonsil-girl
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/4/30 14:59:04 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题十五

请问：在检测过程中，我们不知道样品含量，个别样品含量非常高，不知道的情况下，过SPE柱后，目标物会损失，这时，如何判断SPE柱过载了？

回答：固相萃取柱给出了吸附容量，如果某个样品的浓度较高，您用浓度乘以定容体积得到样品的绝对质量，用这个绝对质量与吸附容量进行对比，如果两者比较接近，建议您减少样品量重新提取、SPE净化、分析，拿测试结果与第一次测试的纸进行对比，如果第二次的值明显增大就能断定是过载了。

问题十六

请问：固相萃取原理就和一般的C18色谱柱是一样吗？

回答：液相萃取柱实质上就是液相色谱柱，但其填料颗粒比分析柱大，所以它是一种低效的液相色谱柱。固相萃取的作用机制与液相色谱是相同，然而由于前者对溶剂体系进行了特殊选择，使得两者在分离效果上出现了一些差异。在液相色谱中，通常会选用一种溶剂体系使所有组分在一次操作的不同时间分别被洗脱下来。在固相萃取中，当样品溶液加入萃取柱，由于吸附剂与目标化合物之间的作用力较强，初始的溶剂体系(亦即样品溶剂)以及后面的淋洗溶剂均无法将目标化合物洗脱，使目标化合物保留在吸附剂上，这相当于液相色谱中的“无限保留”；最后将一种对目标化合物溶解性较强的溶剂体系加入柱中，该溶剂体系与目标化合物的作用力强于吸附剂，使目标化合物立刻被洗脱下来。

C18属于SPE的一个类型，也属于液相色谱柱的一个类型。



问题十七

我刚刚看了萃取柱的规格，好像最大上样量都很小啊？最大的才50mg,这个上样量是指包括溶剂一起的还是只有目标物的量？

回答：这个量指的是目标化合物+部分干扰物的量，不包括溶剂的量。虽然SPE对目标化合物具有选择性，但仍会保留部分杂质。目前多数固相萃取柱的规格比较适合农药兽药残留分析、环境监测、药物代谢、毒物检测，由于这些样品中目标化合物的浓度处于μg/L ~ mg/L之间，所以根本不必担心过载。如果有更大量的需求可以提出定做。

问题十八

个人感觉SPE柱子每批次间的质量有差异，厂家又不可能做到检测每一支SPE柱子，不知迪马是如何控制填料质量稳定性的呢？

回答：SPE的填料与液相色谱柱的填料生产比较相似，每出生产一批会进行填料测试和产品测试。

填料测试：分析元素，填装成色谱柱分离指定的一组化合物，显微镜观察填料外观，粒度测试。。。。。。。

成品测试：进行指定的固相萃取试验，流速测定，外观检验。。。。。

可以说ProElut SPE小柱的质检比HPLC还要严格。由于本人的工作仅限于应用，所以对生产知之甚少，只能告诉您大概情况。
赞贴
0
收藏
1
拍砖
0
举报
2010/4/30 15:10:39 Last edit by diamonsil-girl
Eda
diamonsil-girl
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/4/30 15:01:29 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题十九

同一批产品，填料的松紧也不一样，会影响SPE柱子的效果吗？

回答：固相萃取的填料在均匀性上肯定比不了HPLC的填料，所以粒径会有些差别进而导致松紧程度略微差别。但是SPE产品具有一个流速的指标，比如重力和低真空下，流速低于1.5 mL/min。实际上样品溶液的流速在低于5 mL/min时，回收率就不受影响了。所以看松紧程度不如设定流速限值更有意义。

问题二十

固相萃取柱用前需要活化或者其他处理吗？

回答：一个完整的SPE操作如下：

保留目标化合物模式：

活化\平衡

上样

淋洗

洗脱

保留干扰物模式：

活化\平衡

上样

淋洗

问题二十一

固相萃取在哪方面应用较多？好像在药品方面使用较少？

回答：SPE的主要应用领域：食品安全检测、环境监测、药物代谢、毒物分析、毒品分析等领域。

实际上，SPE在药品方面(代谢)是很有优势的。不过国内做的较少，本人总结原因如下：分析者认为成本比较高(实际上不使用SPE，净化效果差，液相色谱柱的寿命下来了，也不划算，还是理念的问题)；某些药物是仿制的，不进行药物代谢分析。不过，SPE用于药物代谢在国内只是时间的问题，药物生产厂家在这方面应预先积攒经验。

问题二十二

ProElut硅胶键合吸附剂的技术参数中提到“封端”请问“封端”和“不封端”有什么不同的作用？为什么大部分反相柱都封端而正相柱都不封端？

回答：

对于反相硅胶键合吸附剂（C18、C8、C2、CN、PH等），颗粒表面残余的硅羟基会与极性化合物发生极性相互作用，并且部分硅羟基解离后会与碱性化合物发生离子相互作用，相对于非极性相互作用这些作用力处于次要地位，因而被称为次级相互作用。次级相互作用是反相硅胶吸附剂所不期望的，通常可以通过封端技术（Endcaping）加以消除；
正相硅胶键合吸附剂，键合的是极性基团，它的作用力是极性相互作用，所以硅羟基的次级相互作用与之不冲突，所以不必封端处理。
赞贴
0
收藏
1
拍砖
0
举报
Eda
diamonsil-girl
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/4/30 15:02:42 13楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题二十三

请问：固相萃取应该是和大孔树脂分离道理是一样的，那么我分离样品后有没有像大孔树脂那样的有机残留在样品中？

回答：固相萃取与填装打孔树脂的层析柱相比没有本质区别，如果分别用固相萃取和大孔树脂层析柱分离了样品，那么均会有有机溶剂残留。

问题二十四

怎么控制溶剂的流速啊？

答：如果想把流速降低，可以在那小柱下方安装Cock阀；如果想提高流速，可以在小柱的加液端加压或在液体流出端减压。

问题二十五

请问：我要考察柱子对目标成分有没有死吸附，怎么做？

回答：您说的死吸附是指经洗脱后残留于吸附剂上的目标化合物吗？如果是，我可以告诉您，除了反相填料(C18、C8等)以外，其他的正相、离子交换吸附剂对目标化合物肯定会有死吸附，因为吸附(adsorption)和库伦力(也就是离子交换)保留的化合物存在滞后，即使大量溶剂洗脱，仍有微量残留，本人以为如果经过充分洗脱了，吸附剂上残留的目标化合物的量基本是检测不出来的，如果您对此担心，可以收集洗脱液后，重复洗脱一次，上机检测。

问题二十六

请问：我们在用内标法做实验时，内标物在柱前加还是柱后加更好？

回答：如果您的方法处于开发阶段，正在进行回收率实验，内标在前处理后、上样前加入；如果方法已经确定，用该方法进行实际样品检测，内标应该在前处理前加入。

问题二十七

请问：NY 438-2001饲料中盐酸克伦特罗的测定，规定了SPE的型号——30mg/Lcc Oasis HLB固相萃取小柱或同等效果净化柱，贵公司有这种柱子吗？


回答：
迪马科技的SPE与Oasis HLB相当者为ProElut PLS，这在任何项目上都是适用的，PLS在NY 438-2001中可以代替HLB。
不过对于克伦特罗等β-激动素分析，由于是氨基化合物，具有离子特性，使用离子交换柱(比如混合阳离子交换柱)更适合，其他很多标准用的也是这种理念。
赞贴
0
收藏
1
拍砖
0
举报
2010/6/11 12:07:39 Last edit by godblesschina
Eda
diamonsil-girl
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/4/30 15:05:13 14楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题二十八

固相萃取柱最大能上多大量样品？能定做固相萃取柱吗（有可能是现在规格的几百倍）？
回答：SPE 吸附剂所能吸附的化合物质量是有限的，在最佳条件下，一定质量吸附剂所能保留化合物的总质量被称为吸附剂的吸附容量。对于离子交换吸附剂，吸附容量处于0.5-1.5 meq/g 之间；其他吸附剂则不超过50 mg/g。所以您可以根据小柱中吸附剂的量来计算最大上样量。

                          表5-2 SPE柱规格及上样容量和洗脱参数

萃取柱规格

最大上样量

最小洗脱体积

50 mg

2.5 mg

125 μL

100 mg

5 mg

250 μL

150 mg

7.5 mg

375 μL

200 mg

10 mg

500 μL

500 mg

25 mg

1250 μL

1000 mg

50 mg

2500 μL



问题二十九

请问：只要不过载，3 ml 50mg的C18小柱和6 ml 1000mg的C18小柱效果是一样的吗？3 ml 50mg杂质很容易穿透吧？

回答：只要不过载，3 ml 50mg的C18小柱和6 ml 1000mg的C18小柱效果一样。杂质多种多样，有容易穿透的，也有保留很强的。

问题三十

请问：固相萃取柱的容量指什么？一般的3ml柱子的容量多少？通用的计算公式？

回答：SPE柱有一个重要的指标就是吸附容量，它是指在特定条件下，一定质量吸附剂能够保留的化合物（包括目标化合物和部分干扰物）的总质量。通常来说硅胶键合吸附剂的吸附容量不超过0.05 mg(样品)/mg(吸附剂)，所以SPE柱的吸附容量是从填料质量来计算的，比如100 mg C18最多可以保留5 mg的化合物。聚合物基质的吸附剂比如PLS要明显高于硅胶键合吸附剂。

问题三十一

请问贵公司的柱管是什么材料制成的，对检测三聚氰胺、邻苯二甲酸酯等项目会不会有影响。

回答：我们公司通用的柱管和筛板为医用级有机聚合物(出于商业机密，具体就不讲了)，这种通用柱管不影响三聚氰胺分析，要知道ProElut PXC是全国销量最高的三聚氰胺分析柱(这是竞争对手统计的)。但是塑料柱管中可能存在邻苯二甲酸酯类增塑剂，所以邻苯二甲酸酯分析项目，我们推荐ProElut PLS-glass柱，柱管和筛板均为玻璃材质，这就避免了邻苯二甲酸酯的污染。
赞贴
0
收藏
1
拍砖
0
举报
Eda
diamonsil-girl
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/4/30 15:06:48 15楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题三十二

请问：固相萃取的填料间隙多大是最好的，贵公司是如何控制填料间隙大小的。是否可以认为球形比无定形的要好些？

回答：我们通过控制吸附剂的粒径来控制间隙，比如我们的硅胶键合吸附剂的平均粒径为50 微米，颗粒是球形，间隙为四个小球叠加在一块儿所能产生的间隙，由于这个间隙是一种特殊的形状，本人无法提供具体的尺寸。据本人所知，多数厂家提供的都是无定形的，仅有迪马科技和瓦里安的是球形的，这样保证了小柱的流速恒定；聚合物基质的吸附剂同样是球形的，平均粒径为50 微米；对于Flirisil、石墨化炭黑等吸附剂的形状则为无定形颗粒。

由于SPE为低效色谱，所以球形和无定形颗粒在效果上差别不大，但是无定形颗粒粒径分布不均，小颗粒可能会堵塞筛板，并造成流速不均。



问题三十三

请问：SPE与色谱柱原理都是一样的，色谱柱都能重复使用，甚至达到上万次，为什么SPE不能呢？

回答：SPE柱与HPLC柱均属于液相色谱柱。但是两者有如下区别
A SPE的粒径处于几十~几百微米之间，所以是低效的；HPLC柱的粒径通常低于10 微米，是高效的；(这个特点和您的提问没关系，只是想让大家了解的详细一点儿)

B 两者的使用模式，SPE经历一个无限保留(上样和淋洗)与一个快速洗脱(洗脱目标化合物)的过程，然而洗脱后小柱上是否有杂质和目标化合物残留，我们是不清楚的，因为不能在线监测，所以存在交叉污染的风险；而HPLC不论是在等度还是梯度下，均可保证已知的化合物被洗脱下来，因为它是在线监测的；

C 进入SPE柱的样品的组成往往比较复杂，所以处理后小柱上含有许多强保留的干扰物，吸附剂上的作用位点急剧减少，如果重复使用，保留效果和净化效果得不到保证。而HPLC分析的样品通常经过了净化处理(比如SPE处理)，所以HPLC所受污染比较小，并且分析后往往会进行常规冲洗，这样HPLC柱的效果和寿命得到保证。

综合以上几点，SPE柱尽量不要重复使用。

问题三十四

请问：硅胶键合非极性基团后，表面仍残留活性硅羟基，硅羟基会与碱性化合物发生极性和离子相互作用，这是反相吸附剂所不期望的，封端(Endcap)技术可以消除这一影响。其中的封端(Endcap)技术是如何消除这一影响的。

回答：键合了功能基团的硅胶表面残留硅羟基(Si-OH)，将其与短碳链的硅烷化试剂(比如三甲基氯硅烷)，硅羟基基本不存在了。详细请见课件的第36页。

问题三十五

请问：有没有可能生产一种SPE柱子，测定尿液中盐酸克伦特罗时，直接上样到SPE小柱，最后用有机溶剂洗脱下来，上机测定。我用此方法回收率极低，专家能有什么好的建议，可以直接过柱吗？（测定动物尿液中的盐酸克伦罗）

回答：这种小柱一直就有。ProElut PXC(混合型阳离子交换反相柱)，将尿液样品调成酸性，克伦特罗带正电荷，然后按照ProElut PXC的通用操作方法进行操作即可。实际上ProElut PLS、PXC、PXA、PWC、PWA最核心的应用就是血液、尿液、动物样品中药物的分析，其中血液和尿液可以进调节pH值或稀释后直接上样，其他动物 需要提取后上样。我觉得您只要认真了解一下ProElut吸附剂的特性以及固相萃取方法的建立，相信您一定会在这一领域获得成功。

建议方法：

向尿液加入磷酸使pH处于1~2之间，直接上柱SCX或PXC
活化/平衡：甲醇活化、1%磷酸水溶液平衡
上样：将样品加入
淋洗：依次用水、甲醇淋洗(不必抽干小柱，因为甲醇早就把水洗掉了)
洗脱：5%氨水甲醇溶液
赞贴
0
收藏
1
拍砖
0
举报
2010/4/30 15:07:56 Last edit by diamonsil-girl
Eda
diamonsil-girl
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/4/30 15:10:09 16楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题三十六

可以根据物质的结构来选取小柱么？

回答：SPE是用来纯化样品的，所以结合目标化合物的化学性质以及主要干扰物的化学性质，选择出一款能够区别目标化合物和干扰物的小柱是成功的关键。化合物的结构是需要参考的一个重要方面。更多详情请参考讲座内容或迪马科技推出的ProElut 固相萃取技术及应用手册第二版。

问题三十七

我想咨询一下固相萃取用于气相色谱的前处理目前多不多，因为我刚接触固相萃取，想购买固相萃取设备，用于气象色谱的前处理，不知道这样做效果怎么样？

回答：SPE是用于样品前处理的，和您分析时用的检测仪器关系不大。您说自己是搞气相分析的，姑且猜测您是做农药残留吧，如果是多农残分析，通常使用Florisl、NH2、PSA等吸附剂用于保留样品溶液中的干扰物，如果样品为绿色植物，使用石墨化炭黑能够有效去除绿色素。如果不是多残留分析，只是分析某一种或某几种农药，也可以考虑反相柱比如C18、PLS，或离子交换柱(针对酸性或碱性农药)。固相萃取的净化效果在前处理手段中处于领先。

问题三十八

请问：过双柱（上下串接）时，很容易被堵塞，用简易固相萃取装置抽都不能抽出液体，不知专家有什么好的方法来解决？这种双层柱是混合在一起，还是分层填装？

回答：本人以为，小柱是否容易堵塞与几个小柱没关系。如果您的确遇到了这种困难，可以作如下改进：

1 对上样液进行离心处理；

2 建议您定做双层柱，也就是把两种填料装在一个小柱里面，分层填装。比如Carb/NH2.

问题三十九

请问：是根据回收率来确定冲洗杂质的体积和洗脱样品的体积吗？

回答：活化、平衡、淋洗、洗脱等过程溶液的用量依据的是填料的质量，具体请参考讲座内容。

问题四十

请问：现目前，无筛板固相萃取小柱还有市场吗，以后会得到发展吗？

回答：商品化的固相萃取柱均有上下筛板，其作用是为了固定吸附剂、恒定流速。据本人了解，只有实验室自己装玻璃层析柱时，不安放上面的筛板，但讲究的人会放一片滤纸，下面则有一块玻璃筛板。这种做法属于自给自足的自然经济，它不会被投放进入市场，所以没有市场。
赞贴
0
收藏
1
拍砖
0
举报
Eda
diamonsil-girl
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/4/30 15:11:52 17楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题四十一

请问：现目前，SPE柱子的填料除了正相、反相和离子填料外，还有哪些？

回答：从作用力的角度来分类，可以分为：反相(疏水相互作用)、正相(极性相互作用)、离子交换(库伦力)、亲和(亲和力)以及混合型填料(包含两种或以上作用基团)。

问题四十二

请问：固相萃取技术作用中有一个转换溶剂的作用，能讲讲应用实例吗。承接上面的问题，请问：固相萃取技术作用中有一个转换溶剂的作用，在转换的过程中会不会产生气泡？如何解决这个问题呢？

回答：比如当分析水或者含水样品中的有机污染物(PAEs、PAHS、农药等等)，分析仪器是GC或GC-MS，此时进样的时的样品应为易挥发的有机溶剂，水是不行的。这样就可以选择一款对疏水性化合物具有保留的SPE柱，比如C18、PLS(亲水亲脂平衡柱)，将样品注入小柱，化合物被保留，然后抽干小柱(除水)，最后用弱极性有机溶剂洗脱，溶剂被转换成易挥发的有机试剂了。

样品供GC分析时，才需要转换溶剂，当然也不是仅仅转换了溶剂，同时样品也被富集，比如分析水中PAHs，把大量水样加入PLS(亲水亲脂小柱)，样品流干以后，再抽干小柱，最后用少量弱极性有机溶剂洗脱，收集洗脱液，定容后仪器分析或蒸干重新溶解后分析。

在上面的应用中，水样是不能直接注入GC的，SPE处理后，溶剂由水变为易挥发的有机溶剂，同时也得到富集。SPE处理后，有机溶剂是不易溶解空气的，有机溶剂本身可能会挥发，但气相分析时，标品分析也存在这种现象。所以，SPE处理并不会使XXX产生气泡。此外，气相分析，产生气泡也没关系啊。

问题四十三

请问：三聚氰胺也溶于甲醇，固相萃取时上完样液后加入甲醇的目的是除去醇溶性物质，三聚氰胺会不会有损失？

回答：三聚氰胺前处理使用的是混合型强阳离子交换反相柱(PXC)，这种吸附剂既能保留疏水性化合物又能保留氨基化合物(潜在的阳离子)。三聚氰胺使用三氯乙酸的水溶液提取的，在低pH值下，三聚氰胺结合质子呈阳离子态，进入小柱后，阳离子态的三聚氰胺与吸附剂上的阴离子间存在库伦力，这种作用力不论是水、还是甲醇均不能将其打断，淋洗时用水和甲醇，三聚氰胺基本不会损失；只有加入碱性溶剂，使三聚氰胺释放出质子呈电中性，库伦力才消失，所以最后氨水甲醇将其洗脱下来。

问题四十四

请问：固相萃取小柱的保留范围越广泛是否就同时保留的干扰物质越多呢？

回答：您的这种见解非常正确，适用范围越广，净化效果要差一些。从选择性来比较，离子交换填料＞正相填料＞反相填料，所以可解离成离子的化合物，应优先选择离子交换模式。当然，通过优化淋洗液和洗脱液，反相模式同样能得到较好的净化效果，比如，专业的方法建立者会考察化合物在小柱(反相和正相)上的淋洗曲线，找出化合物开始被洗脱的溶剂体系(A)和完全被洗脱时的溶剂体系（B），把A作为淋洗液，这样可以尽最大可能地洗下保留较弱(与目标化合物相比)的干扰物，把B作为洗脱液，这样能见可能少地洗掉强保留(与目标化合物相比)的干扰物，得到更加纯净的样品溶液。

总之一句话：我们不能改变客观的东西，但是可以发挥自己的才智，把事情做得更好。
赞贴
0
收藏
1
拍砖
0
举报
Eda
diamonsil-girl
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/4/30 15:13:23 18楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题四十五

请问血液样品不用经过均质提取过程吗，这样回收率如何保证啊！均值后的样品最小单元是不一定比血细胞小，但是血液不会形成凝块吗？

回答：血液、血清、血浆样品可以直接用水或缓冲水溶液稀释，然后过小柱，目标化合物保留与吸附剂上，蛋白质、盐类则流出小柱。冒昧地反问一句，均质处理的样品(比如组织)，得到的样品最小单元就一定比血细胞还小吗？

当然，动物体液分析时，的确存在蛋白质与离子型目标化合物结合紧密的现象，但在操作中通过改变溶剂的pH值，一般能够克服这种问题。

问题四十六

请问：固相萃取柱的容量是怎么确定的，比如3ml的柱子的容量多少，是经过试验检测出来的还是计算出来的。

回答：固相萃取柱的容量(假设您问的是吸附容量)，小柱的吸附容量(最大样品容量)一般处于填料质量的1%~5%之间，谨慎一点，吸附容量=填料质量填料质量/100；3 mL的柱子，“3 mL”指的是柱管体积，柱管体积与吸附容量无关。

问题四十七

请问：是否可以只用回收率的指标来比较不同厂家固相萃取小柱的质量。请问净化效果用什么方法进行验收？

回答：

关于SPE的指标评定，可能存在下列两种情况：
1 有成熟的方法，比如按照GB或FDA方法进行QC工作，可以按照这些方法比较同一类型的SPE柱，比较的内容包括回收率和净化效果；
2 没有成熟的方法，自己搞研究，此时不太适合进行比较，因为比较的结果也仅适用于特定的应用。换另一个应用，结果可能相反。
赞贴
0
收藏
1
拍砖
0
举报
Eda
diamonsil-girl
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/4/30 15:18:03 19楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题四十八

请问：pH值对固相萃取的操作有多大影响，做固相萃取的时候pH应该调整到那个精度才对呢？

回答：如下情况需要调节样品溶液的pH值：

1 带有羧基和酚羟基的化合物用反相柱保留时(比如C18、PLS)，需要抑制化合物离子基团的解离增大其在反相柱上的保留，一般是向样品溶液中加酸使pH值比基团的pKa低两个单位以上，羧基和酚羟基的pKa一般大于4.0，所以样品溶液的pH调到2.0或更低都能满足要求，所以加过量的酸就行了，一般用1%磷酸水溶液做样品溶液即可，甚至不需要用pH计调节；

2 带有可解离基团的化合物用离子交换柱保留时。对于弱酸，应选择阴离子交换柱，为了使目标化合物和吸附剂上的离子基团均带电荷需要调节pH值，pH值比羧基的的pKa高两个单位以上，99%以上的羧基解离，羧基以及酚羟基的pKa处于6以下，所以pH值只要大于9就能满足要求，吸附剂上的阳离子基团为季铵基团，该基团在任何pH值下均为解离态，所以样品溶液采用5%的氨水溶液即可满足两种离子基团完全解离，甚至不需要用pH计调节；对于弱碱(氨基化合物)，应选择阳离子交换柱，为了使目标化合物和吸附剂上的离子基团均带电荷需要调节pH值，pH值比胺基的共轭酸的pKa低两个单位以上，99%以上的胺基结合质子呈阳离子态，胺基化合物共轭酸的pKa处于9以上，所以pH值只要小于7就能满足要求，吸附剂上的阴离子基团为磺酸基团，该基团在任何pH值下均为解离态，所以样品溶液采用1%磷酸或甲酸水溶液即可满足两种离子基团完全解离，甚至不需要用pH计调节。

综上所述，固相萃取中调节pH值时，只需将体系的pH值调到一个范围，不需要调到非常精确。

上面的知识若不能较好的理解，请参考分析化学上的酸碱电离平衡。

问题四十九

请问：在使用固相萃取小柱时，测定哪些项目时，不能使柱床干涸？

回答：

对于保留目标化合物的应用，上样前小柱不能干涸(不包括亲水亲脂平衡柱PLS及其衍生出的PXC、PXAc、PWC、PWA)；亲水亲脂平衡柱PLS及其衍生出的PXC、PXAc、PWC、PWA即使活化后放置一段时间，柱床也不会干涸。

对于保留干扰物的小柱，干涸了影响不大。
赞贴
0
收藏
1
拍砖
0
举报
Eda
diamonsil-girl
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/4/30 15:19:35 20楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题五十

在做旋转蒸发的时候，有的标准注明是旋至近干，如果全干会产生什么影响呢？

回答：旋转蒸发至近干可能会带来两个问题：

1 蒸干后，目标化合物与一些干扰物混杂着牢固地吸附在浓缩瓶的瓶壁上，重新溶解时可能会导致不完全溶解；

2 某些化合物的挥发性强，溶剂完全蒸干后，目标化合物开始加速挥发，最后回收率降低。这种情况因化合物性质而异，通常含有离子基团或较多极性基团的化合物挥发性差，问题不大，但极性较弱的低沸点化合物则容易出问题，比如很多人反映敌敌畏回收率低，大致就是因为这个问题。

问题五十一

请问：固相萃取小柱的选择性特强，但能不能同时处理一类物质，如β-兴奋剂，盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇这几种物质？

回答：性质大体一致的化合物均可以用同一款SPE同时处理。比如，氯霉素、磺胺类药物等等均具有一定程度的疏水性，可以选择亲水亲脂平衡柱PLS按其通用操作方法上进行处理。像您说的“β-兴奋剂，盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇”均具有氨基，可以用酸性水溶液对样品提取后，用PXC(混合型阳离子交换反相柱)按照其通用方法进行处理。每一款固相萃取小柱均具有多种用途，只要我们发挥自己的聪明才智，许多问题迎刃而解。

迪马科技拖出的“固相萃取技术与应用第二版”，应用里有“盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇”同时分析的方法，请参考。

另外，这本手册比课件还要详尽，希望大家参考。

问题五十二

请问：在资料上看到液-液萃取小柱（适合大体积上样），它与固相萃取小柱有没有本质上的区别？

回答：从技术角度来说，“液-液萃取小柱”应该称为“固相支持液-液萃取柱”，从本质上讲它不属于固相萃取。接触了一些行内人士，他们都把它当作固相萃取柱了，有点太“形而上学”了，不过客户愿意怎么叫就怎么叫，我也没必要挨个予以纠正。在这里我向您详细讲一下液液萃取柱的原理。

迪马科技的ProElut LLE+（液液萃取柱）以纯净的硅藻土为填料，将一定体积的含水样品加入柱中，水润湿硅藻土表面，形成一层水膜，然后用与水互不相溶的有机溶剂加入小柱，有机溶剂与水膜接触，水中的疏水性目标化合物扩散进入有机相(因为该有机相对其溶解性强)，有机相洗脱液依靠重力作用从柱中流出，整个处理过程耗时小于20 min。该产品简化了液液萃取步骤，有效地避免了乳化现象和溶剂浪费，并能取得更佳的回收率和重现性。

所以硅藻土在里面发挥了保持含水样品并增大其表面积的作用，也可能会吸附一些极性干扰物。所以萃取过程是在两个液相体系中进行的，不属于固相萃取柱的范畴。
赞贴
0
收藏
1
拍砖
0
举报
手机版： 【固相萃取讲座】问答节录
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁