主题：【讨论】色谱柱的使用寿命用什么指标来衡量？

色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外，最主要的是与日常的委会密切相关。为延长色谱柱的使用寿命，维护您的利益，请仔细阅读此部分。
      色谱柱的使用寿命主要是分局柱效和柱压两个指标来衡量，如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高，通常被认为该色谱柱已经结束。因此，延长色谱柱使用寿命的关键是，消除引起柱效下降和柱压升高的因素。以下是色谱柱的日常维护方法：
一、流动相的PH应在使用的范围内
      Welch公司的色谱柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外，其反相色谱柱的PH范围均为1.5-10，由于填料中存在Si-C和Si-O键，流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，使用寿命变短。由于流动相的PH 控制不当而对色谱柱造成的损害，通常很难是色谱柱恢复，因此必须认真对待，严格控制流动相的PH值。
二、去除样品和流动相中的固体颗粒
      样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵住不仅会引起柱压的升高，而且也会引起柱效下降，因为筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰型拖尾、变宽，从而使柱效下降。因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析样品前对样品进行针筒过滤，流动相过0.45μm滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器
      样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质，因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压升高、柱效下降。保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱孔径相同，因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大 比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
      如果去人色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的，科选择一下方式进行补救：
1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min。
2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器，然后反向使用。
四、正确使用缓冲盐
      缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展，使色谱柱的保留能力下降，柱效降低。缓冲盐析出后，去除非常困难，因此，正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。
      正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出，因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话：使用前要过滤，使用后要冲洗。具体方法如下：
1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min；使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗色谱柱过夜。
2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前，用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min，再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓，以避免梯度过程中缓冲盐析出。
      注意：过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，区别只是过渡流动相不含缓冲盐。
3、缓冲盐析出的补救方法：
1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min
2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。
五、防止强保留物质在色谱柱上存留
      强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰型变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多药品特别是复杂样品而言，很难判断其是否是含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙氰清洗色谱柱。
清洗方法：
1、未使用缓冲盐：每天分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min。
2、使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后在用纯甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min
3、补救方法：
水——乙氰——氯仿（或异丙醇）——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱60min。

1.使用”保护柱”﹐能够延长色谱柱的使用寿命。简单的说﹐”保护柱”即是很短的色谱柱﹐填装和所使用液相色谱柱相同的填料。正确使用装在液相色谱柱前面的”保护柱”﹐可以阻拦一些容易损坏液相色谱柱的物质﹐而达到延长柱子寿命的效果。如果使用”保护柱”不当﹐会造成反效果。因为在保护柱使用过程中﹐如污染达到一定程度而没有及时更换﹐累积的杂物很可能会冲入色谱柱中﹐反而会造成色谱柱损坏。因此﹐使用”保护柱”时﹐最重要的是要知道什幺时候该换保护柱。该换的时候就必须要立即更换。
2.选择高品质的柱子﹐并注意使用方法﹔可以延长柱子的使用寿命。一般认为同一厂牌﹑同一型号的柱子之间的品质都相同﹐对品质管理很严格的厂家而言﹐这说法是成立的。但如果厂家品质管理不够严格﹐即使是同一批号的新柱子之间的品质也有差异。所以﹐选用柱子时必须选择管理严格的高品质柱子﹐我们知道﹐任何柱子使用过后都会产生变化。尤其如在强酸或强碱条件下使用﹐柱子更易产生变化。因此﹐应尽量选用pH适用范围大的柱子。在开发新分析方法时﹐许多专家建议不要使用旧柱子﹐因柱子一经使用﹐柱性会改变﹔如此一来﹐使用旧柱子开发出来的新分析方法﹐很可能在再使用同厂牌的新柱子分析时﹐发生无法达到预定效果的情况。总的说﹐开发新分析方法时要使用品质好的新柱子﹐并且一支柱子最好使用在一种分析方法上﹔则柱子寿命可以延长。

3.定期冲洗柱子可以延长柱子使用寿命。我们知道柱子使用一段时间后总会有一些杂质累积在柱内。这些杂质不会随着流动相出来﹐自然会逐渐影响柱子的品质。这些杂质在后来的分析谱图上出现﹐而造成出现怪峰﹑基线不平等现象。简单的解决方法是用较强的流动相冲洗。最好是在每次分析某一产品完成后冲洗。如果分析时使用缓冲剂时﹐最好用水来取代缓冲剂。先使用有机和水的混合溶液为流动相冲洗缓冲剂﹐接着再用100%有机溶剂冲洗。如果不先用有机和水的混合溶液冲洗﹐而直接用100%有机溶剂冲洗的话﹐缓冲剂很可能会沉淀出来﹐而损坏柱子的品质。使用10-20倍柱体积的量来冲洗基本就足够了。专家建议最好将100%有机溶剂冲洗的条件加在分析实验程序完毕地最后﹐如此一来每天在开机前都会用100%机溶剂冲洗。一般硅胶柱可以反冲洗处理﹐即是在将冲洗前将柱子倒反接后再冲洗。打算使用反冲洗处理前﹐最好先参考柱子的保养说明书。所以要真正保护柱子﹐使柱子的寿命延长﹐最好是使用”保护柱”和定期冲洗柱子。

色谱柱性能指标
一.某指定容量因子的理论塔板数N；
理论塔板数越大，柱效越高
N=16(Tr/W)*2
Tr:谱峰的保留时间
W：峰宽
*2：平方
提高理论塔板数的因素包括：
1.色谱柱填充良好，粒度分布范围越窄，填充色谱柱床的稳定性越好、柱效越高，同时压力降最小，一般要求粒度分布范围不超过平均值的正负50%；
2.增加色谱柱长度，长度一般在100--300mm；
3.采用较小微粒填料，用相对较小的填料，目前常用约5微米粒径固定相，也有1.5~3微米的多孔或无孔微粒；
4.采用低黏度流动相；
5.升高色谱柱温度；
6.采用小分子化合物测定。
二、峰不对称因子As，理想的As为0.95~1.1（绝对的对称峰值为1）；
三、两种不同溶质的选择性；
四、色谱柱的反压，用不同规则的微粒填充，色谱柱柱的压力可能会高；
五、保留之的重新性；
六、键和相的浓度；
七、色谱柱的稳定性。

一般压力太高了 也就要Over了吧

12317仪器商城有这方面的解说

应该以被分离样品的分离度、对称性等为指标

原文由 lxx5052(lxx5052) 发表:
一般压力太高了 也就要Over了吧

压力高就Over，有点太奢侈了吧
影响压力的因素比较多，不要把压力升高都归功于柱子，有点片面
举个例子：一般柱床塌陷，压力是下降的，柱子Over

用不同的检测方法检测时，柱效都很低了，寿命就到了。

原文由 快乐(ynsfeed) 发表:
用不同的检测方法检测时，柱效都很低了，寿命就到了。

柱效只是一方面，还要和你的待测成分有关
有些柱子测柱效就是不行，分离样品还可以，那还是可以用的

原文由 lxx5052(lxx5052) 发表:
一般压力太高了 也就要Over了吧

压力太高，可以再生，压力也许会降下来，还可以继续使用一段时间！