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| 诊状 | 可能的原因 | 解 决 方 法 |
( 一 ) 保留时间变化 | 1. 柱温变化 | 柱恒温 |
2. 等度与梯度间未能充分平衡 | 至少用 10 倍柱体积的流动相平衡柱 | |
3. 缓冲液容量不够 | 用 >25mmol/L 的缓冲液 | |
4. 柱污染 | 每天冲洗柱 | |
5. 柱内条件变化 | 稳定进样条件 , 调节流动相 | |
6. 柱快达到寿命 | 采用保护柱 | |
| ( 二 ) 保留时间缩短 | 1. 流速增加 | 检查泵 , 重新设定流速 |
2. 样品超载 | 降低样品量 | |
3. 键合相流失 | 流动相 PH 值保持在 3~7.5 检查柱的方向 | |
4. 流动相组成变化 | 防止流动相蒸发或沉淀 | |
5. 温度增加 | 柱恒温 |
( 三 ) 保留时间延长 | 1. 流速下降 | 管路泄漏 , 更换泵密封圈 , 排除泵内气泡 |
2. 硅胶柱上活性点变化 | 用流动相改性剂 , 如加三乙胺 , 或采用碱至钝化柱 | |
3. 键合相流失 | 同前 ( 二 )3 | |
4. 流动相组成变化 | 同前 ( 二 )4 | |
5. 温度降低 | 同前 ( 二 )5 | |
| ( 四 ) 出现肩峰或分叉 | 1. 样品体积过大 | 用流动相配样 , 总的样品体积小于第一峰的 15% |
2. 样品溶剂过强 | 采用较弱的样品溶剂 | |
3. 柱塌陷或形成短路通道 | 更换色谱柱 , 采用较弱腐蚀性条件 | |
4. 柱内烧结不锈钢失效 | 更换烧结不锈钢 , 加在线过滤器 , 过滤样品 | |
5. 进样器损坏 | 更换进样器转子 |
( 五 ) 鬼峰 | 1. 进样阀残余峰 | 每次用后用强溶剂清洗阀 , 改进阀和样品的清洗 |
2. 样品中未知物 | 处理样品 | |
3. 柱未平衡 | 重新平衡柱 , 用流动相作样品溶剂 ( 尤其是离子对色谱 ) | |
4. 三氟乙酸 (TFA) 氧化 ( 肽谱 ) | 每天新配 , 用抗氧化剂 | |
5. 水污染 ( 反相 ) | 通过变化平衡时间检查水质量,用 HPLC 级的水 | |
| ( 六 ) 基线噪声 | 1. 气泡 ( 尖锐峰 ) | 流动相脱气 , 加柱后背压 |
2. 污染 ( 随机噪声 ) | 清洗柱 , 净化样品 , 用 HPLC 级试剂 | |
3. 检测器灯连续噪声 | 更换氘灯 | |
4. 电干扰 ( 偶然噪声 ) | 采用稳压电源 , 检查干扰的来源 ( 如水浴等 ) | |
5. 检测器中有气泡 | 流动相脱气 , 加柱后背压 |
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