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主题：【分享】细胞培养中流行的错误（过时）知识

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发表于：2010/05/31 11:41:42 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
（1）血清一定需要加热灭活



人们通常通过在56°C加热30分钟的办法，来灭活血清中的补体，以及其中可能的微生物（比如支原体）的污染。加热灭活带来的问题是，血清中的氨基酸、维生素和生长因子等也会不同程度的被破坏。



Triglia and Linscott 的研究发现（1），胎牛血清中的补体含量很低，即使在未稀释的胎牛血清中，也观察不到溶血现象。另外37°C的加热能够有效灭活补体。所以对胎牛血清而言，并不需要通过专门的热灭活来灭活其中的补体。



早期的血清制备中的滤膜的孔径大于0.22um，不能有效的去除支原体的污染。热灭活可以去除支原体的污染。但是现在血清制备中的终端滤膜的孔径为0.1um甚至小到0.04um，所以血清中一般没有支原体的污染。



综合上面的观点，除非有特别的情况，标准厂家生产的胎牛血清一般不需要加热灭活。



需要说明的是，有些厂家生产的胎牛血清质量并不符合标准。所以如果您的胎牛血清来自一家可信度不高的厂家，那么为了安全起见，还是以加热灭活为好。



（2）培养液中一定要加抗生素



随着超净台技术的提高，和超净台在细胞培养中的广泛使用，在细胞培养过程中如果操作规范，引进污染的机会并不大。同时抗生素的使用大大增加了支原体等微生物污染的机会，所以普通的细胞培养，最好不要加抗生素。



（3）细胞培养室要异常的洁净



由于以前超净台技术比较差，在超净台开启的时候，外面的灰尘可能飘到超净台里，笔者曾经见过的一个老式的没有空气过滤装置超净台，仅使用紫外线灯灭菌，这样实验室的清洁就显得很重要。现代的超净台从原理上来说，超净台外的污染源是很难到达超净台里面的(见文章5：超净台的挑选和使用)。所以保持细胞培养室一定程度的清洁固然有助于减少污染的机会，但是过度的清洁，比如用0.2%新洁尔灭拖地板，或者在培养室内加紫外线灯消毒，并不需要，更重要的是实验操作的规范。笔者曾经工作过的一个细胞培养室，维护实验室清洁的工作就是每天拖一次地板，每天大家进出并不换鞋换衣服，在2年多的时间内从没有发生过任何污染。



（4）在超净台上使用酒精灯



事实上使用酒精灯会造成空气对流，从而带起超净台面上的灰尘，反而增加污染的机会。更何况还增加了火灾的隐患。
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2010/6/4 12:05:36 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在超净台上不使用酒精灯？
呵呵那有些实验就得想其他的办法做了。。

还有酒精灯的火焰毕竟有限，你可以将超净台的风速提高。。减少这些空气对流。
同时，做实验前，用酒精棉球将台面擦拭一遍，就可以了。
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