实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8042673今日发帖：530 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
生命科学仪器综合讨论
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【讨论】我在使用酶标仪时遇到的问题

浏览0 回复39 电梯直达
闲鹤野云
头像
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
发表于：2007/06/21 10:39:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被ruojun设置为精华；
悬赏金额：10积分 状态： 已解决
您在使用酶标仪时,可能发生过很多问题,分享一下吧.
ELISA使用过程中的问题与分析
这是从其他资料复制的.

帖子我结了，但还是有很多问题期待大家继续讨论。
推荐答案：tianru的爸爸回复于2007/06/24


原文由 ruojun 发表:
试剂会接触空气的,但板井我都放在空气中了.时间从30分钟到3小时不等.错了,要封口呀?温度太低应该会影响抗原抗体吸附吧


1、温度低会影响抗原抗体反应的，一般是在37度反应一个固定时间，也有用室温（20度附近）反应一个固定时间（这些时间由自己掌握，固定就行）。
2、板子在不用的情况下，要密封起来，特别是长时间保存，不能让板子完全干透了，会影响将来的抗原抗体的结合。
3、最后酶显色也是很重要的，如果这时的条件不能一致，波动也会增加的；同样也是保持条件一定。
4、一直没有注意到板子回到室温的时间，没注意到它的干扰，只是注意反应的温度与时间：一般是把试剂回复到室温（用手感觉一下）再加试剂，然后再加样/试剂去反应（室温或37度保温）。
补充答案：

家有宝贝儿回复于2007/06/26


如果连上午和下午都差这么多，这个实验的系统适用性就有问题。
没有其他公司的产品吗？如果有可以试试，不排除试剂盒本身的不稳定性。

一抹冰蓝回复于2007/07/02


那这样的实验结果可靠吗？实验的重复性，重现性如何？

黄金战士回复于2007/06/21

ELISA KIT 回温时间应该没有严格要求,一般使抗体和抗原达到最佳活性为好.厂家的使用说明书会标明这些(许多是15分钟以上,但不让超过一天),没的话就询问厂家吗.假如厂家连这一点都确定不了的话,你还敢用他的产品吗?

happy水中月回复于2007/06/21


应该做回温时间和吸光度的关系考察，找到变化稳定的时间或影响最小的时间才好，否则系统的误差太大了。没有用过，个人观点，不知对否？

为您推荐
近期热榜
热门活动
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
选参数 看心得 找厂商 查方案
专属顾问快速对接
立即提交
可能感兴趣
闲鹤野云
ruojun
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2007/6/21 10:58:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我遇到的最大问题是,做ELISA,酶标板和试剂从3-6摄氏度冰箱取出然后在室温下回温时间不同,标准曲线和检测结果差异极大.我有时放30分钟,有时放一个小时.这样一来标准曲线差很多.有没有个比较保险的回温时间.
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
Last edit by ruojun
闲鹤野云
ruojun
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2007/6/21 11:33:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
出现问题的确原因很多,由于ELISA基于酶和竞争吸附原理,许多有关温度,浓度,时间,机械稳定性,比色体积等,都会影响结果.
正确使用酶标仪
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
Last edit by ruojun
家有宝贝儿
menghandna
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2007/6/21 12:37:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ruojun 发表:
我遇到的最大问题是,做ELISA,酶标板和试剂从3-6摄氏度冰箱取出然后在室温下回温时间不同,标准曲线和检测结果差异极大.我有时放30分钟,有时放一个小时.这样一来标准曲线差很多.有没有个比较保险的回温时间.

一般使用的酶标板和试剂都可以在室温放置的，不知道楼主是基于什么考虑而在低温放置。如果是4度包被之后取出，也不需要放置那么长的时间，平衡5分钟就可以了。回温时间应该不是测量误差的主要来源，因为标准品和样品的条件也是一致的，这也是为什么每次都要同时做标准曲线的原因。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
tianru的爸爸
lxdongzi2003
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2007/6/21 12:50:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ruojun 发表:
我遇到的最大问题是,做ELISA,酶标板和试剂从3-6摄氏度冰箱取出然后在室温下回温时间不同,标准曲线和检测结果差异极大.我有时放30分钟,有时放一个小时.这样一来标准曲线差很多.有没有个比较保险的回温时间.

我是刚开始做的，但每次的标准曲线是不一样的，而且差的很大，但同一个样品对于同一个标准品的标准曲线是正相关的。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
shine
shine
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2007/6/21 13:08:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请教怎样作标准曲线,我做出来的是过0轴,请问是一条直线吗
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
闲鹤野云
ruojun
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2007/6/21 13:26:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 menghandna 发表:
一般使用的酶标板和试剂都可以在室温放置的，不知道楼主是基于什么考虑而在低温放置。如果是4度包被之后取出，也不需要放置那么长的时间，平衡5分钟就可以了。回温时间应该不是测量误差的主要来源，因为标准品和样品的条件也是一致的，这也是为什么每次都要同时做标准曲线的原因。

我分析的是三聚氰胺。试剂盒要求在低温下保存。使用前在室温下回温后再用。但厂家没有告诉回温时间。所以为快速检测，有时回温时间偏短，有时较长，但总体看回温时间短吸光度低很多，如果读数推迟时，吸光度会在一定时间内逐步增加；相反，如果回温时间长，推迟读数时间，很快吸光度降低。当然，吸光度与浓度的关系仍然明显。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
闲鹤野云
ruojun
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2007/6/21 13:30:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 shine 发表:
请教怎样作标准曲线,我做出来的是过0轴,请问是一条直线吗

用酶标仪计算软件或Excell的统计工具中的回归模式，计算截率和系数即可。回归曲线是直的，但标准曲线因为检测条件会不直，可能是曲线。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
闲鹤野云
ruojun
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2007/6/21 20:07:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们做了10次三聚氰胺的标准曲线检测,虽然是同一个批号的试剂盒,每次都不一样,OD(吸光度)相差很大,四个标准(0,20,100,500ppb)OD值从1.5-0.8;1.2-0.5; 0.9-0.3; 0.5-0.2变化.原因在哪里.是试剂盒的问题,还是什么问题.
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
黄金战士
rlei
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2007/6/21 22:08:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
ELISA KIT 回温时间应该没有严格要求,一般使抗体和抗原达到最佳活性为好.厂家的使用说明书会标明这些(许多是15分钟以上,但不让超过一天),没的话就询问厂家吗.假如厂家连这一点都确定不了的话,你还敢用他的产品吗?
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
Last edit by rlei
happy水中月
lianlxh
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2007/6/21 23:05:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ruojun 发表:

我分析的是三聚氰胺。试剂盒要求在低温下保存。使用前在室温下回温后再用。但厂家没有告诉回温时间。所以为快速检测，有时回温时间偏短，有时较长，但总体看回温时间短吸光度低很多，如果读数推迟时，吸光度会在一定时间内逐步增加；相反，如果回温时间长，推迟读数时间，很快吸光度降低。当然，吸光度与浓度的关系仍然明显。

应该做回温时间和吸光度的关系考察，找到变化稳定的时间或影响最小的时间才好，否则系统的误差太大了。没有用过，个人观点，不知对否？
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
手机版： 【讨论】我在使用酶标仪时遇到的问题
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁