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主题：【求助】液相（HPLC)衍生化单糖组分分析的问题？

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muchonghh
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发表于：2010/06/05 22:01:21 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
液相（HPLC)衍生化单糖组分分析的问题

希望能得到高手们的指点，我尝试用PMP衍生化单糖的方法去做液相分析，因为衍生化之后就可以用C18柱分离并用紫外检测器检测，可是结果做了N次一直不理想，无论是标品还样品出的峰都很小很小，微不可见，只有电脑才识别的出来，跟被没法往Paper上贴，恳请各位高手指点一二，以帮我爬出这泥潭。谢谢
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有水有渝
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2010/6/5 22:22:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是没有衍生好？

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2010/6/5 22:23:21 Last edit by xky0230699
muchonghh
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2010/6/6 15:03:21 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你好，非常感谢，不过你的梯度是怎么设定的，还有流动相是什么，你的色谱柱是C18柱吗？我用以下方法衍生化
将待测样品置于1 mL 具塞试管中,加或不加内标溶液,室温减压真空干燥;向干燥好的试管中依次
加入20μL PMP 溶液(0. 5 mol/ L 甲醇溶液) 和20μL 氢氧化钠溶液(0. 3 mol/ L) ,混匀后置于70 ℃水浴中
加热反应30 min ,取出室温放置10 min ;再加入25μL 盐酸溶液(0. 3 mol/ L) 中和,混匀后用0. 5 mL 乙酸
异戊脂萃取,涡旋3 min ,离心15 min ,小心弃去有机层,再萃取一次得到下层,加水150μL 混匀并离心15
min ,用于HPLC 分析。请您看看是否有哪里不对？
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有水有渝
xky0230699
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2010/6/6 15:15:36 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个我也没有做过，上面那上是文献中的，色谱条件都在上面了。梯度是从16%乙腈开始，到55分钟时为25%乙腈。色谱柱为ODS也就是反相C18柱。
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hy425
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2011/3/20 14:36:57 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我也遇到和您同样的问题, 衍生化方法也和您在回贴中描述的完全一样, 我希望了解您是否已经得到解决, 望不吝赐教!
我现在想不到问题出在哪里, 开始怀疑PMP试剂是否有什么不同了.
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xiaoqin77
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2011/4/6 15:37:45 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们也做过这个实验，但是响应都挺好的，我们流动相是乙腈：缓冲溶液ph6.8 =20：80
会不会你们的PMP加少了。。顺便附个这方面的文献给你吧。。
附件：
PMP柱前衍生高效液相色谱法分析杜氏盐藻多糖的单糖组成.pdf
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即墨络绎
v2865762
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2014/4/2 23:22:20 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我也在做这个实验，但是衍生化效果不好，衍生物不稳定，还有衍生化反应中氢氧化钠由氨水取代较好。
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Insp_221e478d
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2020/6/26 22:47:04 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hy425(hy425) 发表:我也遇到和您同样的问题, 衍生化方法也和您在回贴中描述的完全一样, 我希望了解您是否已经得到解决, 望不吝赐教!我现在想不到问题出在哪里, 开始怀疑PMP试剂是否有什么不同了.
请问你的问题解决了吗，我也遇到同样的问题
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