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主题：【求助】关于HPLC的梯度问题

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纸鸢
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发表于：2010/06/09 10:52:47 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用HPLC梯度淋洗测试样品含量  可能由于极性问题  样品在溶剂峰的时候一起出来

请问该怎么调节梯度，改变流动相的极性？

流动相A是乙腈
流动相B是水加了一点酸

这方面有没有什么好的资料呢？
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2010/6/9 10:56:41 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不知你的流动相的比例，样品出峰快应减小乙腈的比例。
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zhdy1111
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2010/6/9 11:52:43 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在反相色谱中 ，流动相的极性越弱， 其洗脱能力越强，样品出峰越早。乙腈水溶液中，乙腈比例越大，极性越弱 洗脱能力越强。所以你可以先用5%的乙腈水溶液分析样品，在慢慢调节流动相比例。如果还是不行的话，有机溶剂可改用极性稍强的甲醇作流动相。
    另外，流动相流量也会影响出峰时间，流量越大出峰时间越早。你可以用较小流量来分析样品，如0.5ml/min。
    还有柱温也会影响出峰时间，柱温也高，出峰越快。你可以在室温下分析样品。流动相PH 也会影响出峰时间，可以调节缓冲盐ph来提高分离度。
    如果以上方法都不行，你只能换柱子了。
该帖子作者被版主 xky0230699加 2积分， 2经验，加分理由：积极应助
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zhdy1111
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2010/6/9 11:58:12 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如何提高分离度 
可以参考 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100104/2315910/
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supermouse888
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2010/6/9 13:01:51 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
调整pH值，换用甲醇，减小流速，换用C8柱，试试吧！要根据化合物结构来判断！
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纸鸢
wkfei1128
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2010/6/9 13:38:44 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 beijingxiatain(beijingxiatain) 发表:
不知你的流动相的比例，样品出峰快应减小乙腈的比例。


走的是梯度，乙腈是从1%到26%，其余是水，如果样品极性大，是不是应该增大乙腈的比例呢？
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sacid
Sacid
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2010/6/9 13:54:49 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果极性特别强，恐怕要换柱子了，不是靠调节流动相能实现的。
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chenaroy
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2010/6/9 18:00:58 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
极性如果很大应该减小乙腈的比例，可以把乙腈小的比例走梯度时时间长点。
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