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主题：【求助】请大家帮我分析一下流动相

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ronda
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发表于：2010/07/06 13:43:40 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家好：
首先我是液相新手，所以请多多帮助。
我的样品是小分子蛋白，分子量5000左右。前面摸了一下条件，波长214nm，流动相可以用A：0.2molNaCl，磷酸调ph=3和B：乙腈走梯度初步分开。现在我要在流动相中加入缓冲溶液，我先用了0.2mol醋酸铵，醋酸调ph=3。结果我样品的吸收值变得非常小，严重影响峰高和峰面积，也无法考察分离度是否有改善了。所以我想可能是醋酸铵体系影响了我样品的吸收值，大概不适合这个样品分离吧。于是我换成0.1mol柠檬酸钠，柠檬酸调ph=3。可结果还是吸收值很小，峰高和峰面积都很小。和醋酸铵体系的谱图比较一下，我的样品在两个体系里差不多。
这一下搞得我好糊涂，不知道原因出在哪了，更不知道实验该怎么进行了。请大家帮我分析一下，给我点建议，我将感激不尽。
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2010/7/6 14:49:35 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你用磷酸二氢钠和磷酸做缓冲体系试试吧
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ronda
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2010/7/6 14:55:53 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 acic_zyf(acic_zyf) 发表:
你用磷酸二氢钠和磷酸做缓冲体系试试吧


好的，多谢！能再帮我解释一下为什么样品吸收值会减小呢？我以后也好避免一下。
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2010/7/6 15:28:04 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你先用这个体系试试看，可能是因为不同的体系可能影响样品的吸附和沉淀等.
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yanghaichao0
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2010/7/6 17:58:42 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
首先最好不要用氯化物做流动相；其次注意PH值不要过低
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2010/7/6 18:26:54 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
醋酸铵和柠檬酸在这个波长下背景吸收高的很。
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guoke121
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2010/7/7 12:16:27 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
醋酸铵和柠檬酸的截止波长是230左右，远远大于你样品的吸收波长（214），所以你的色谱图上的峰高很低。
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