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主题：【求助】用HPLC如何测定蛋白质分子量?

浏览0 回复7 电梯直达
mmlcy
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发表于：2010/07/23 10:30:38 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如题.
请教各位, 已有蛋白质分子量标准, 67000~669000,欲测未知蛋白质的分子量,请问应该如何测定?
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2010/7/23 10:52:25 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
要用水相的GPC柱，如TSK的SW系列柱或SHODEX的KW系列柱，GPC软件
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有水有渝
xky0230699
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2010/7/23 11:38:05 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tigertooth(tigertooth) 发表:
要用水相的GPC柱，如TSK的SW系列柱或SHODEX的KW系列柱，GPC软件


补充：有了色谱柱，还要有示差折光检测器。楼主说明一下检测器的型号。
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liminzhe
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2010/7/29 19:26:02 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我推荐GE的Superdex 75 5/150的柱子，设定柱温25°，接在HPLC上后，用含25 mM的磷酸盐，200 mM的NaCl，pH 7的缓冲液做流动相，平衡3-5个柱体积至紫外和压力基线稳定，先后进样标准品和样品，得到各自的保留体积。对标准蛋白的分子量求对数，与保留体积进行一次线性回归得到方程，再代入待测样品的保留体积求得其分子量的对数，再求反对数即得。注：buffer的pH应远离目标蛋白的PI2个单位，防止沉淀
该帖子作者被版主 xky0230699加 2积分， 2经验，加分理由：积极应助
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jiachenzhong
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2010/9/23 15:53:28 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问标准品选择什么较好
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tigertooth
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2010/9/23 19:58:48 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
原文由 tigertooth(tigertooth) 发表:
要用水相的GPC柱，如TSK的SW系列柱或SHODEX的KW系列柱，GPC软件


补充：有了色谱柱，还要有示差折光检测器。楼主说明一下检测器的型号。

蛋白一般有紫外吸收，而且样品往往浓度低或量很少，所以还是紫外检测器更好。
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Vigorous
liuzhenhua87913
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2010/9/24 10:16:23 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我一般用TSK2000加PDA检测器，缓冲液pH6.8
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ahuadicp
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2010/9/24 21:38:15 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
分子量测定一般用GPC凝胶过滤色谱，系统跟液相是一样的，只是采用的柱子是凝胶柱，流动相为缓冲盐。检测器的话我们用过折光示差
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