主题：【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束）

原文由 windeast(windeast) 发表:
请问下Hibar RT250-4这个柱子很特殊么？为什么很多药典中的药物分离都用它做柱子，因为才开始做药，不知道hibar的柱子特点是什么？
不知道plexu能否介绍下。

原文由 01041610(01041610) 发表:

原文由 jewel2008(jewel2008) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
我前几天刚刚装上一个新的C18柱，在进样之前我用100%的甲醇冲了半个多小时。刚才看到上面写的要活化什么的？不知道我只冲洗半小时就开始用对柱子有没有影响？对出峰什么的有没有影响呢？谢谢！

这种影响也说不好，要试过才知道，不过最好先用甲醇多冲会，流速由低慢慢增高，活化的话用50%甲醇水充个半小时左右。

原文由 learner1999(learner1999) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：超高压快速高分离度色谱柱是不是未来液相色谱柱普及应用的一个发展趋势？谢谢！

原文由 问无止境！(lovehonghong) 发表:
讲座人气很旺啊，坐在后排慢慢学习。

想请教下plexu版主，液相色谱柱一般使用寿命多长？不同类型的色谱柱是否寿命也不一样？液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢？

原文由 问无止境！(lovehonghong) 发表:
讲座人气很旺啊，坐在后排慢慢学习。

想请教下plexu版主，液相色谱柱一般使用寿命多长？不同类型的色谱柱是否寿命也不一样？液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢？

原文由 问无止境！(lovehonghong) 发表:
讲座人气很旺啊，坐在后排慢慢学习。

想请教下plexu版主，液相色谱柱一般使用寿命多长？不同类型的色谱柱是否寿命也不一样？液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢？

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
1、请问怎么测柱效？柱子填料是SinoChrom ODS-BP 5um ，规格4.6mm*200mm
2、我用苯试了一下，峰性大大好，但是不知道理论塔板数，不知道怎么评价，感觉不大好，对称性不好，有点前延，柱子才用了四个月，是什么原因呢？是不是塌陷了呢？有什么补救的办法吗？
3、流动相里之前有酸的，做完后单纯用乙腈冲洗，能把酸冲洗干净吗？之前他们是这样冲的，现在怀疑柱子塌陷了，会不会是长时间在酸性环境中造成的呢？

原文由 zxm-1980(zxm-1980) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教
  我前一段时间做三聚氰胺用C18色谱响应值很小，几乎无法检测，可是检测标准就是用的C18，后来我用RP18结果响应值很好，不知道什么原因，请问这两个柱子不都是反相色谱柱么？他俩之间有什么不同？谢谢了！

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:

原文由 plexu(plexu) 发表:

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:

原文由 plexu(plexu) 发表:

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
感谢月旭在本版面做论坛线上讲座！
您好！我有以下问题想请教：
1、对于一根常用的C18住，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？希望能够详细些，非常感激。
2、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？

新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。

分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。

非常感谢plexu的回答，还有一点不明白，就是记得以前拿到C18柱，会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化，这样做的目的是什么呢？是先用溶剂活化吗？然后再用样品？
还有测定短肽总是冲出来，该怎么解决呢？就是和溶剂峰出在一起，或者出在溶剂峰之前。

新柱子先用甲醇平衡，测定前再用流动相平衡，平衡的目的是测定前把基线走平，最后才是在正式测定前用样品去平衡（也可称饱和或老化）柱子。
短肽和溶剂峰差不多时间出来，很明显是保留不足的问题。解决极性物质在反相柱上保留不足的方法详见此帖：http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20091215/2270999/。一般的办法是：提高流动相中水相的比例，譬如用100水做流动相；调pH值使待测物处于分子态不电离；加离子对试剂（多肽和蛋白测定中一般加0.1%的TFA三氟乙酸）。

现在的流动相中都加的有TFA，用98水做流动相还是不行，100水的话不是对柱子不好么？
“调pH值使待测物处于分子态不电离；”这个不会做

原文由 gaoxiaoyexian(gaoxiaoyexian) 发表:
plexu您好：
    你在色谱柱保存里面有提到“CN基柱在有机极性溶剂中柱床不稳定（会导致柱床结构坍塌），适合在水相中低温保存。低温保存要确保不发生固定相冻结而损坏柱床”
    我有以下问题想请教:
    1。“水相”指的是什么？纯水？
    2。我们实验室的CN基柱保存在40%的乙腈里面，这个有不良后果吗？
    3。CN基柱应该怎样维护才好呢？比如做完实验用什么流动相冲柱子、短期用什么溶剂保存、长期用什么溶剂保存等等。
    先谢啦！！