主题：【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束）

原文由 plexu(plexu) 发表:

原文由 wdl158160(wdl158160) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问
1.保护柱和预柱的作用是不是一样的，如果不一样有什么区别么？
2.保留时间漂移多少为可以接受的范围？

保护柱一般带填料，相当于一根缩短了的色谱柱（一般是1-2cm长度），卡套里可更换的柱芯，柱管、筛板和填料都有。保护柱里的柱芯好像是在前面开路的扫雷部队，流动相和样品里如有什么损害柱子的污染物，保护柱就自己承受了下来。
而预柱，现在一般指的就是接在进样器和色谱柱之前的在线过滤器。在线过滤器和保护柱的最大区别是不带填料，只有可更换的筛板。预柱只能保护色谱柱免受颗粒物质的污染，而不能阻挡溶解在流动相中的强保留物质。
保留时间是液相色谱中一个很有用的诊断分离问题的工具。保留时间受流动相组成、温度、pH、流速、固定相流失和柱老化等很多因素的影响，如果所有这些参数保持不变，保留时间也保持恒定。但在实际操作中，不可能对每个色谱参数进行很完美的控制，如即便加了柱温箱，温度还是会有波动；流动相组成会因组分挥发性不同而改变。所以保留时间有上下0.02-0.05min的变动是非常正常的，对某些方法有0.1min上下变动也属正常。保留时间有大的变化，预示着系统和方法存在问题。流路里有气泡存在，泵阀有泄漏，会因流量降低而导致保留时间增加。梯度混合比例阀故障也是保留时间变化原因之一。

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plexu您好！我有以下问题想请教，
请问
1.保护柱和预柱的作用是不是一样的，如果不一样有什么区别么？
2.保留时间漂移多少为可以接受的范围？

保护柱一般带填料，相当于一根缩短了的色谱柱（一般是1-2cm长度），卡套里可更换的柱芯，柱管、筛板和填料都有。保护柱里的柱芯好像是在前面开路的扫雷部队，流动相和样品里如有什么损害柱子的污染物，保护柱就自己承受了下来。
而预柱，现在一般指的就是接在进样器和色谱柱之前的在线过滤器。在线过滤器和保护柱的最大区别是不带填料，只有可更换的筛板。预柱只能保护色谱柱免受颗粒物质的污染，而不能阻挡溶解在流动相中的强保留物质。
保留时间是液相色谱中一个很有用的诊断分离问题的工具。保留时间受流动相组成、温度、pH、流速、固定相流失和柱老化等很多因素的影响，如果所有这些参数保持不变，保留时间也保持恒定。但在实际操作中，不可能对每个色谱参数进行很完美的控制，如即便加了柱温箱，温度还是会有波动；流动相组成会因组分挥发性不同而改变。所以保留时间有上下0.02-0.05min的变动是非常正常的，对某些方法有0.1min上下变动也属正常。保留时间有大的变化，预示着系统和方法存在问题。流路里有气泡存在，泵阀有泄漏，会因流量降低而导致保留时间增加。梯度混合比例阀故障也是保留时间变化原因之一。

感谢月旭，把困惑我很久的问题解释的清清楚楚，希望以后还能有类似的讲座，谢谢。

原文由 xue2009(xue2009) 发表:

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plexu您好！我有以下问题想请教，
请问
1.保护柱和预柱的作用是不是一样的，如果不一样有什么区别么？
2.保留时间漂移多少为可以接受的范围？

保护柱一般带填料，相当于一根缩短了的色谱柱（一般是1-2cm长度），卡套里可更换的柱芯，柱管、筛板和填料都有。保护柱里的柱芯好像是在前面开路的扫雷部队，流动相和样品里如有什么损害柱子的污染物，保护柱就自己承受了下来。
而预柱，现在一般指的就是接在进样器和色谱柱之前的在线过滤器。在线过滤器和保护柱的最大区别是不带填料，只有可更换的筛板。预柱只能保护色谱柱免受颗粒物质的污染，而不能阻挡溶解在流动相中的强保留物质。
保留时间是液相色谱中一个很有用的诊断分离问题的工具。保留时间受流动相组成、温度、pH、流速、固定相流失和柱老化等很多因素的影响，如果所有这些参数保持不变，保留时间也保持恒定。但在实际操作中，不可能对每个色谱参数进行很完美的控制，如即便加了柱温箱，温度还是会有波动；流动相组成会因组分挥发性不同而改变。所以保留时间有上下0.02-0.05min的变动是非常正常的，对某些方法有0.1min上下变动也属正常。保留时间有大的变化，预示着系统和方法存在问题。流路里有气泡存在，泵阀有泄漏，会因流量降低而导致保留时间增加。梯度混合比例阀故障也是保留时间变化原因之一。

感谢月旭，把困惑我很久的问题解释的清清楚楚，希望以后还能有类似的讲座，谢谢。

那用了保护住岂不是我样品的一些信息会损失掉？这个问题怎么解决？

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plexu您好！我有以下问题想请教，
请问
1.保护柱和预柱的作用是不是一样的，如果不一样有什么区别么？
2.保留时间漂移多少为可以接受的范围？

保护柱一般带填料，相当于一根缩短了的色谱柱（一般是1-2cm长度），卡套里可更换的柱芯，柱管、筛板和填料都有。保护柱里的柱芯好像是在前面开路的扫雷部队，流动相和样品里如有什么损害柱子的污染物，保护柱就自己承受了下来。
而预柱，现在一般指的就是接在进样器和色谱柱之前的在线过滤器。在线过滤器和保护柱的最大区别是不带填料，只有可更换的筛板。预柱只能保护色谱柱免受颗粒物质的污染，而不能阻挡溶解在流动相中的强保留物质。
保留时间是液相色谱中一个很有用的诊断分离问题的工具。保留时间受流动相组成、温度、pH、流速、固定相流失和柱老化等很多因素的影响，如果所有这些参数保持不变，保留时间也保持恒定。但在实际操作中，不可能对每个色谱参数进行很完美的控制，如即便加了柱温箱，温度还是会有波动；流动相组成会因组分挥发性不同而改变。所以保留时间有上下0.02-0.05min的变动是非常正常的，对某些方法有0.1min上下变动也属正常。保留时间有大的变化，预示着系统和方法存在问题。流路里有气泡存在，泵阀有泄漏，会因流量降低而导致保留时间增加。梯度混合比例阀故障也是保留时间变化原因之一。

感谢月旭，把困惑我很久的问题解释的清清楚楚，希望以后还能有类似的讲座，谢谢。

那用了保护住岂不是我样品的一些信息会损失掉？这个问题怎么解决？

如果用了装填和设计良好的保护柱，相当于原来的分析柱延长了1cm，有什么信息会损失呢？只是颗粒物和强保留污染物留在了这延长的1cm柱子里，你感兴趣的分析物最后还是会从这1cm长的保护柱中被洗脱出来，进入分析柱的。如有某些分析物被保护柱滞留了洗脱不出来，那就是色谱方法本身有问题，不用保护柱同样会被滞留在分析柱前端而不出峰。当然，既然你的分析柱因此延长了1cm，保留时间、柱效和分离度等会与原来不同，但如把保护柱和分析柱作为整体看，各色谱参数还是可重现的。

原文由 xue2009(xue2009) 发表:
plexu，有一种观点是强烈的支持色谱柱反冲，其主要认为是色谱柱总是朝一个方向，由于疏水效应造成C18链“倒伏”，反冲可使倒伏的C18链重新舒展。虽然会损失一些柱效，但还是有很大的优势，你怎么看待这种说法？谢啦

原文由 zxm-1980(zxm-1980) 发表:
非常感谢旭月公司，感谢姚老师，这次讲座对我很有帮助，受益匪浅。

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plexu您好！我有以下问题想请教，
请问
1.保护柱和预柱的作用是不是一样的，如果不一样有什么区别么？
2.保留时间漂移多少为可以接受的范围？

保护柱一般带填料，相当于一根缩短了的色谱柱（一般是1-2cm长度），卡套里可更换的柱芯，柱管、筛板和填料都有。保护柱里的柱芯好像是在前面开路的扫雷部队，流动相和样品里如有什么损害柱子的污染物，保护柱就自己承受了下来。
而预柱，现在一般指的就是接在进样器和色谱柱之前的在线过滤器。在线过滤器和保护柱的最大区别是不带填料，只有可更换的筛板。预柱只能保护色谱柱免受颗粒物质的污染，而不能阻挡溶解在流动相中的强保留物质。
保留时间是液相色谱中一个很有用的诊断分离问题的工具。保留时间受流动相组成、温度、pH、流速、固定相流失和柱老化等很多因素的影响，如果所有这些参数保持不变，保留时间也保持恒定。但在实际操作中，不可能对每个色谱参数进行很完美的控制，如即便加了柱温箱，温度还是会有波动；流动相组成会因组分挥发性不同而改变。所以保留时间有上下0.02-0.05min的变动是非常正常的，对某些方法有0.1min上下变动也属正常。保留时间有大的变化，预示着系统和方法存在问题。流路里有气泡存在，泵阀有泄漏，会因流量降低而导致保留时间增加。梯度混合比例阀故障也是保留时间变化原因之一。

感谢月旭，把困惑我很久的问题解释的清清楚楚，希望以后还能有类似的讲座，谢谢。