一开始使用不含缓冲盐的溶剂来冲洗色谱柱或许不是所有方法必需的,但它确是可以采用的一个很好的预防措施,尤其是对于流动相中含有缓冲盐,如磷酸盐。例如,不可以从30:70的乙腈-20mM磷酸盐缓冲盐直接转换到100%乙腈中,因为磷酸盐会在泵或色谱柱中沉淀下来。
如果流动相或色谱柱中含有缓冲盐,不要关闭
液相系统超过一个小时以上,当系统闲置的时候,如果有机相挥发,缓冲盐会残留在泵活塞和其它暴露的地方,进而缩短泵垫底寿命及导致其他部件过早损坏。比较好的办法是事先设计一个控制程序在所有样品检测结束后运行洗柱程序,如前所述先用水替换缓冲液冲洗几分钟,然后用强溶剂冲洗系统。如果LC系统不具备这种自动转换功能,可以设置一个低流速的方法使泵持续在极低的流速下运行,例如0.1ml/min,直到你有时间来冲洗系统。
溶解性不好的样品
如果样品不溶于流动相中的有机溶剂怎么办,按照化学合成人员的溶解性测试,的确有些样品不能完全溶解在甲醇或者乙腈中,可是对于分析测试用的样品浓度来说,样品不太可能不溶于相同的溶剂中。如果样品在分析用浓度水平不能溶解的话,它怎么能在分析过程中从色谱柱上被洗脱出来呢?对于极少数情况,样品在水-有机溶剂中的临界浓度对其溶解性很重要。但是对于好的
液相色谱系统,比较倾向样品溶解在流动相中,并会被流动相洗脱出来。大多数色谱柱的清洗方法关注的不是样品如何从色谱柱洗脱下来,而是如何将样品所带来的污染物从色谱柱上清洗掉,那么采用强溶剂将是最好的选择。
可以采取强溶剂冲洗吗
有些色谱工作者喜欢用一些洗脱能力比流动相中强溶剂更强的溶剂来清洗色谱柱,例如,在用乙腈冲洗色谱柱后,采用二氯甲烷或甲基叔丁基醚或者DMSO冲洗。的确这样做可以出去一些强吸附在色谱柱上的污染物,但有时要考虑值不值得。我们从经济的角度考虑一下:对于制药行业来说,一般一个LC-UV的分析大约要花费50美元。如果一个价值500美元的色谱柱可以持续运行500次进样的话,那么每一次进样花费1美元,是全部花费的2%。如果你用1小时来清洗色谱柱,并使其寿命延长一倍的话,你也只是节约全部费用的1%,这是一种很好的投资吗?我觉得如果一根色谱柱可以进样500次的话,就已经很值了。根据经验,即使是血样样品,色谱柱常常能经受2000次进样或者更多。色谱柱是消耗品,不是固定资产,即使它非常贵也仍然是耗材。