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主题：【求助】求高效液相专家指点

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darcy123
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发表于：2010/08/31 11:35:48 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用安捷伦1200LC测定多酚物质标准品图像，但是一直得不到结果，做了好多次了，现在的状况是不到三分钟就会有一个响应值很大的倒峰（有时会紧邻着个别小峰），后边也为找到标准品的峰，请高手明示下，我该怎么办啊？流动相为1%的乙酸水和甲醇，流速在0.5--1.0之间，标准品用流动相溶解，进样量为10ul，柱温30.另附图如下        
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2010/8/31 11:52:49 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相适合吗？
谁提供的条件，以前是否做过呢
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sacid
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2010/8/31 11:59:07 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
倒峰的问题倒不是很大，有时候因为样品中其他物质影响，会造成倒峰。但是从你的谱图上看，这个方法似乎不是很好。最好找找别人的分析方法做个参照。
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crack5858
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2010/8/31 12:17:25 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你说用流动相配置对照品？但是从图像看，你配制方法有问题。流动相有两相，
应该用5%c，95%d配制比较好，另外需要说明，你的对照品浓度太低，多酚的大部分紫外波长在280nm，花青素是520nm，黄酮苷类是360nm
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duanjiezz
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2010/8/31 14:00:52 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是否进样方式引起的呢，您可以改变进样方式，比如满环进样，P进样，ul携带，如果您用250mm的柱子，0.8的流速，那么根据出峰位置判断，就更有可能是进样引起的了。试试吧，告诉我结果，不行的话咱们再想办法！
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darcy123
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2010/8/31 18:13:59 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
流动相适合吗？
谁提供的条件，以前是否做过呢


没有做过，但是参考了别人的文献，得出的方法，我测定的是儿茶素，表儿茶素，没食子酸，槲皮素等六种物质，您有好的方法或建议吗？望不吝赐教
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2010/8/31 18:20:31 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 duanjiezz(duanjiezz) 发表:
是否进样方式引起的呢，您可以改变进样方式，比如满环进样，P进样，ul携带，如果您用250mm的柱子，0.8的流速，那么根据出峰位置判断，就更有可能是进样引起的了。试试吧，告诉我结果，不行的话咱们再想办法！


您好，我刚刚接触液相色谱，对于您说的进样方式我甚至还不懂，所以我也不知道该怎么尝试，我只在仪器上看到标准进样字体。还有我的色谱柱是150mm的，您看我该怎么办啊？
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darcy123
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2010/8/31 18:58:22 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
C是甲醇，D是1%的乙酸，是甲醇的比例高，还是乙酸的比例高能够分离呀
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astromote
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2010/8/31 20:06:59 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
首先我觉得楼主的梯度程序设置的不是很好，34min前什么峰都没有，说明甲醇的起始浓度太低。可以适当改进一下。不要完全照搬文献上的设置，不同的仪器都不一样的，文献只能用来参考。
另外，从色谱图上来看，前面出的倒峰并不影响样品的分析，一般出倒峰是因为样品里面有有机盐的存在，这些物质的紫外吸收比流动相更小，所以会有倒峰，但是一般这种盐几乎没有保留，都在溶剂峰处出峰，不会影响样品分析，楼主不用在意。除非您是要分析这些物质。希望我的看法对您有一点帮助
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darcy123
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2010/8/31 22:10:15 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
]大家好，根据意见我调整了流动相比例，这次是甲醇（C）的比例高，D（乙酸），进样量为10ul，柱温30，还是出现了倒峰，但还是出峰时间较早，怎样调整使其分开并错后啊。
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jixf_1114
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2010/9/1 9:33:29 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问：你在梯度结束后，即40分钟后有没有把梯度调整到初始梯度，并平衡，然后再进下一针样品？
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