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主题：【原创】网络大赛三等奖！给2010版药典挑个错-双氯芬酸钠肠溶片

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lousha
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发表于：2010/08/31 15:18:27 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被SH100800设置为精华；
按照2010版药典验证双氯芬酸钠肠溶片有关物质检测。
辗转询问当初起草这个品种标准的单位，告知使用的是艾杰尔的MP C18色谱柱，于是联系艾杰尔，送来一支Venusil MP C18色谱柱，5um，4.6*250mm；按照10版药典开始做了，结果意想不到的问题出现了…………

药典方法：
供试品溶液：取本品细粉适量（约相当于双氯芬酸钠50mg），精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声5分钟，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。
对照品溶液：另取邻苯二甲酸二乙酯2.5mg，置100ml量瓶中， 精密加供试品溶液1ml，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
系统适用性试验溶液： 取羟苯乙酯、羟苯丙酯与双氯芬酸钠对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含2.8μg、4.0μg与2.0 μg的混合溶液。
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Venusil MPC18 4.6x250mm, 5μm）
流动相：甲醇-0.12%冰醋酸溶液（20：80）
检测波长：240nm
流速:1.0ml/min
进样量： 20μl
测试：供试品溶液,系统适用性试验溶液各进样两针。对照品溶液连续进样5针,峰面积相对标准偏差不应大于2.0%。记录色谱图至主峰保留时间的2倍。用对照品溶液调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的20%。双氯芬酸钠峰的保留时间约为20分钟，羟苯乙酯峰与羟苯丙酯峰的分离度应大于5.0。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，除去邻苯二甲酸二乙酯峰和之前的色谱峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液中双氯芬酸钠峰面积（1.0%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液双氯芬酸钠峰面积的1.5倍（1.5％）。

一切准备OK，进样了，
进样20μL供试品，主峰时间在54分钟（图1），当时就晕倒了！！这是什么意思？


                            图1  主峰保留时间 54分钟

连续进了3次样，重现性很好；联系艾杰尔的工程师。分析可能的原因
1、流速不稳（经测试，没有问题，）排除
2、流动相配制有误，我们重新配制了流动相，分别用在线混合和预混合，主峰都在54分钟左右，排除。
大家彻底晕了……药典是法规，我们也不敢有太多的怀疑。

艾杰尔工程师建议换用低比表面积和低含碳量的色谱柱，他们说：
MP C18 的比表面积是380㎡/g;含碳量是18%，他们推荐了他们低表面的色谱柱：
Venusil ASB C18，200㎡/g，含碳12%和Vensuil XBP C18 L，比表面200㎡/g,含碳15%。
按照药典条件，进样20μL供试品，结果会怎样呢？看图2和3：


                    图2  使用 Veusil ASB C18的色谱图，主峰保留时间：14分钟


          图2  使用 Veusil XBP C18 L的色谱图，主峰保留时间：15分钟

使用低比表面积和低含碳量的柱子，主峰保留时间在14和15分钟，似乎可以接受，但是杂质分离情况很差，还是不适用。再次和艾杰尔工程师商量，大家这回彻底没辙了，陷入了困境。

没有办法，我们再次求助标准起草单位，结果很简单，药典标示的流动相写反了，原文的流动相
流动相：甲醇-0.12%冰醋酸溶液（20：80）应为甲醇-0.12%冰醋酸溶液（80：20），额的神啦，彻底服了。赶紧改回来，其他条件不变，吧流动相改过来，使用最早的MP C18，一切OK！见图4和图5

            图4 流动相更正以后色谱图甲醇-0.12%冰醋酸溶液（80：20）


                        图5 有关物质测定放大图，很OK！

通过这件事情，我总结
1、我很开心发现了药典的一个BUG，哈哈哈，如果各位兄弟姐妹又做这个品种，不用走这个弯路了。
2、第一次切身感受不同比表面和含碳量的柱子，对保留和影响如此之大！以前光看书和帖子上这么说，这回事见识了，降低比表面积和含碳量，保留时间和大幅降低！！
3、艾杰尔的工程师服务态度很好，也专业，赞一个！
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laolang520
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2010/8/31 15:22:23 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学习了
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hellohygo
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2010/8/31 15:37:45 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
药典也会出错啊！艾杰尔的专业技术值得称赞
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neon
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2010/8/31 16:19:45 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
非常有实用价值，顶！
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博纳艾杰尔
sh100800
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2010/8/31 18:17:36 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主认真记录实验过程的态度值得我们学习，非常感谢把经历和大家分享
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〓疯子哥〓
madprodigy
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2010/9/1 9:30:10 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个文章写的不错，从分析条件到检测过程再到条件的对比，最好总结，一目了然，很棒
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121008
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2010/9/1 15:07:58 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看来事情没有什么绝对，搞科研一定要有怀疑精神
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wangmeibao
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2010/9/1 16:12:35 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
比表面和含碳量是个什么概念呢？
药典上的流动相比例是可改的，只是这个改的太大。
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2010/9/1 16:32:08 Last edit by wangmeibao
bitwwwit
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2010/9/2 0:13:10 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
硅胶液相色谱柱的填料是多孔硅胶球，孔的孔径越小，则孔的数量越多，那么硅胶球的整体比表面积就越大。
就像活性炭那样，它有很强的吸附性能，就和它的比表面大有关。

硅胶键合C18是通过硅胶表面的硅羟基和C18硅烷反应的，比表面积越大，那么硅羟基就会相对而言得多，那么键合上去的C18数量也多，因而C含量也大。

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2006334215
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2010/9/2 8:11:12 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主太厉害了，对实验的研究有自己的独到一面，顶，今天又学到知识了。
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annazhang
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2010/9/2 8:48:39 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原来药典也有错误，这回学到了，一切得持着怀疑的态度才行啊。
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