原文由 xuxushug(xuxushug) 发表:
在作者的总结上添加些注释,如果觉得不妥,请删除。
实验总结:
1、 有些物质可能不用手性柱子也可以分离,所以先可以试一试例如HILIC这样的柱子,毕竟手性柱还是比较贵的,要是实验室有这样的柱子,先试一试也不费什么事情的。
楼主分开了一个小的东西,我觉得是非对映异构体的存在造成的,如果只有一对手性中心的话,非手性柱子是分不开的。所以这样的事情并不是每次都可以的。
正解,分开的应该是非手性对应异构或者是其它杂质,分离手性物质必须有手性固定相或者是流动相里添加手性添加剂。
2、 手性物质的分离柱子的选择还是比较重要的,分离的提高,换柱子比换流动相更快捷一些。
正解,大赛璐的四大金刚一般都能解决,我推荐筛选柱子的顺序:AD-H、IC、OD-H,基本上前两只柱子足以对付98%以上的一般小分子手性化合物(我的经验)。
3、 一定要样品较为纯净,这样才能判断分离出来的是杂质,还是手性异构体。或者使用DAD的检测器。
有些时候杂质是很难避免的,关键是把消旋体的谱图做好,后面可以很好的对应。用DAD可以更直观。
样品越纯越好,但是判断手性异构体最可靠的是异构体标准品,或者消旋体,DAD也不是绝对的,同系物可能也有相同或相近的紫外吸收。
4、 有时候向流动相中加酸或者碱,或者两种都加对分离会有一定的帮助。酸碱的量不能过大,不然对柱子的寿命会有影响。
酸碱是可以帮助分离,但是使用前最好向合成人员询问下,在酸碱情况下该手性化合物是否会发生消旋,这个很重要!!!要不,即便做成了很好的选择性,到头来也难发现问题的所在。
流动相里的酸碱导致样品消旋的情况我从来没有遇到过,这个基本上不用考虑,一般的酸碱添加量都在0.1%以内(主要考虑柱子填料的耐受能力),添加酸碱更多的是考虑样品本身的酸碱性、抑制样品解离以后与填料硅羟基之间的相互作用导致的拖尾,而且酸碱可以增加额外的选择性,有些样品用不加酸碱的流动相没有分离趋势,但是添加酸碱以后可以分离的很好,甚至有些情况下需要即加酸又加碱,否则就不能达到基线分离。
5、 向溶剂中加甲醇、叔丁醇会对分离有一定的改善。
这个会不会和样品的结构和溶解度更相关呢?
手性流动相中起洗脱作用的一般是醇类(乙醇、异丙醇)正己烷正庚烷用以调节洗脱能力的大小,甲醇与正己烷正庚烷不互溶,但是在乙醇异丙醇大量存在的情况下可以少量添加,叔丁醇熔点高(室温稍低就是固体),不好直接用,一般也是结合乙醇异丙醇使用,但是每种醇都能提供独特的选择性,没有手性选择性就不可能使样品分离。溶解度是前提条件,但不是必要条件。
6、 温度也是一个关键因素,不妨将温度调高一些,这样可能有利于分离。
这是一条很好的建议!
提高温度可能使峰形更窄更对称,但是会降低手性的选择性,而且大赛璐柱子的温度上限就是40度,一般手性分离在温度上可以下的功夫很小,最主要还是考虑流动相。
7、 有时候加少量的水对峰型与一定的帮助,尤其对于强保留物质。但是这个要注重,除非你是在没招了才能这样做。因为水对柱子的寿命有很大的影响,(涂布的手性柱)以寿命换分离。
少量的加水可以作为最后的尝试,注意要小于0.1%的量,但是一般还是不推荐使用,其实流动相比例和组成有很多种考虑因素,你一定还有更多更好的方法可以尝试
我也冒犯一下两位,!